王麗麗，杜慧斌，葉志文，張曉琦，汪 豪,**，葉文才,

1中國(guó)藥科大學(xué) 天然藥物化學(xué)教研室,南京 210009；2廣西玉林制藥有限責(zé)任公司，玉林537001；3暨南大學(xué) 中藥及天然藥物研究所，廣州 510632

毛雞骨草為豆科相思子屬植物Abrus mollis Hance的干燥全草。本品具有清熱利濕、舒肝止痛、活血散瘀的功效，臨床用于治療急慢性肝炎、肝硬化腹水、胃痛、風(fēng)濕痹痛等癥[1]。毛雞骨草，又名大葉雞骨草，為廣西特產(chǎn)藥材，是中藥名優(yōu)產(chǎn)品雞骨草膠囊的主要原料。本課題組藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究表明，廣西毛雞骨草治療肝病的主要藥效活性成分為芹菜素黃酮碳苷類(lèi)化合物，即芹菜素-6-C-阿拉伯糖-8-C-葡萄糖苷等，毛雞骨草提取物是從毛雞骨草提取分離得到的總黃酮碳苷有效部位，該類(lèi)化學(xué)成分具有保肝、降酶及降脂等藥效活性[2-3]?！吨袊?guó)藥典》2005年版一部未收載藥材雞骨草及含雞骨草制劑的含量測(cè)定方法。本文采用紫外分光光度法，以三氯化鋁為顯色劑，芹菜素-6-C-阿拉伯糖-8-C-葡萄糖苷為對(duì)照品（結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1），測(cè)定毛雞骨草提取物中總黃酮含量，從而為其成方制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化研究提供依據(jù)。

圖1 芹菜素-6-C-阿拉伯糖-8-C-葡萄糖苷的結(jié)構(gòu)式

1 儀器與試藥

UV-2450型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津）；Mettler Toledo XS105DU十萬(wàn)分之一電子天平 （瑞士 Mettler Toledo）；PHS-3C 精密 pH 計(jì)(上海雷磁)。毛雞骨草提取物系毛雞骨草經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂工藝分離純化得到；芹菜素-6-C-阿拉伯糖-8-C-葡萄糖苷為中國(guó)藥科大學(xué)天然藥物化學(xué)教研室自制，對(duì)照品純度＞98%(HPLC-UV法,面積歸一化法)[4]。其他所用試藥與溶劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

對(duì)照品溶液：精密稱(chēng)取芹菜素-6-C-阿拉伯糖-8-C-葡萄糖苷適量，加甲醇制成0.20 mg·mL-1的溶液，即得。

供試品溶液的制備：取毛雞骨草提取物約10mg，精密稱(chēng)定，置25mL量瓶中，加甲醇10 mL超聲使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

顯色試劑和緩沖液的配置：精密稱(chēng)取三氯化鋁1.34g，加甲醇溶解并定容至100mL，配成0.1mol·L-1的溶液；精密稱(chēng)取醋酸鈉1.64g，加雙蒸水溶解并定容至100 mL，配成0.2mol·L-1的溶液；精密量取1.15mL冰醋酸，加雙蒸水稀釋至100mL，配成0.2mol·L-1的醋酸溶液[5]。

2.2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

精密量取芹菜素-6-C-阿拉伯糖-8-C-葡萄糖苷對(duì)照品溶液1 mL置25 mL量瓶中，加入2 mL 0.1 mol·L-1的三氯化鋁溶液與2 mL pH5.2的醋酸鈉/醋酸緩沖液，各加甲醇稀釋至刻度，搖勻，40°C水浴10min，室溫放置10min，同法制得供試品溶液和空白液，按紫外-可見(jiàn)分光光度法（《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VA）試驗(yàn)，在200～500 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，記錄紫外吸收光譜，見(jiàn)圖2。

圖2 對(duì)照品（A）和供試品（B）顯色前后的紫外吸收光譜

結(jié)果表明，對(duì)照品和供試品溶液顯色后均在343、382nm處分別有最大吸收，但兩種溶液顯色前382nm處的吸收度均較小，故選擇382nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.3 線性關(guān)系考察

精密量取芹菜素-6-C-阿拉伯糖-8-C-葡萄糖苷對(duì)照品溶液 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL，余同“2.4”項(xiàng)操作，在382 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：Y=0.0229X-0.0012,r2=0.9999。結(jié)果顯示，對(duì)照品在 4.1～24.6 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取本品同一毛雞骨草提取物6份，按“2.4”項(xiàng)下方法操作并計(jì)算含量，含量均值為74.2%，RSD=2.12%，表明本法重現(xiàn)性較好。

2.5 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取已知含量的毛雞骨草提取物5份 （總黃酮含量：74.2%），各精密加入芹菜素-6-C-阿拉伯糖-8-C-葡萄糖苷對(duì)照品適量，制備供試品溶液并按“2.4”項(xiàng)下方法操作，計(jì)算加樣回收率，回收率均值為101.3%，RSD=2.6%。結(jié)果見(jiàn)表1，表明本法準(zhǔn)確度較好。

2.6 樣品測(cè)定

取本品毛雞骨草提取物5批樣品，按“2.4”項(xiàng)下方法操作并計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討 論

黃酮類(lèi)化合物分子中含有 3-羥基-4-酮基、5-羥基-4-酮基或鄰二酚羥基等基團(tuán)時(shí)可以與鋁鹽絡(luò)合，并引起相應(yīng)的吸收帶紅移。毛雞骨草提取物中的主要活性成分為芹菜素黃酮碳苷類(lèi)化合物，該類(lèi)化合物的5-羥基-4-酮基與鋁鹽絡(luò)合，顯色后在382 nm處有最大紫外吸收，且顯色前的背景吸收度較小，可以避免非黃酮類(lèi)化學(xué)成分的測(cè)試干擾。單因素考察不同顯色劑用量 （0.1 mol·L-1三氯化鋁1.0、2.0、4.0 mL），顯色溫度（30、40、50℃），緩沖液pH（5.0、5.2、5.4、6.0），以“2.4”項(xiàng)采用的條件最好。本測(cè)定方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，專(zhuān)屬性較強(qiáng)，適用于毛雞骨草提取物及含毛雞骨草制劑的總黃酮含量測(cè)定。

表1 加樣回收率試驗(yàn)

表2 毛雞骨草提取物總黃酮含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

[1] 《中華本草》編委會(huì).中華本草[M].第4卷.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1999:303-5.

[2] 劉卓偉，闕兆麟，葉志文，等.毛雞骨草地上部分的化學(xué)成分[J].中國(guó)天然藥物，2008，6(6):415-7.

[3] 汪 豪，熊 非，劉卓偉，等.黃酮碳苷類(lèi)化合物在治療和預(yù)防肝炎藥物中的應(yīng)用[P].中國(guó)，200710134589.4.2008-04-16.

[4] 寧麗娟，汪 豪，葉文才，等.毛雞骨草中芹菜素-6-C-阿拉伯糖-8-C-葡萄糖苷對(duì)照品的制備分離及鑒定[J].

中草藥，2010，41(8):1905-7.

[5] 丁明玉，趙紀(jì)萍，李擎陽(yáng).貫葉金絲桃提取物中總黃酮的測(cè)定方法[J].分析實(shí)驗(yàn)室，2001，20(6):45-7.