李 男 崔玉海 李紹銘 葉 欣

（哈爾濱仁皇藥業(yè)股份有限公司 中藥提取物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江 哈爾濱 150300）

刺五加軟膠囊是本公司由刺五加片[1]劑型改造而成的中藥軟膠囊，由刺五加浸膏、精制玉米油等成分按照制備工藝制成，具有益氣健脾、補(bǔ)腎安神的作用。臨床用于體虛乏力，食欲不振，腰膝酸痛，失眠多夢。刺五加軟膠囊的主要成分為紫丁香苷、刺五加苷E和異嗪皮啶，為了更好的控制產(chǎn)品質(zhì)量，本文參考有關(guān)文獻(xiàn)[2～4],建立了異嗪皮啶的HPLC含量測定方法,對刺五加軟膠囊中的異嗪皮啶進(jìn)行含量測定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該法操作簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作刺五加軟膠囊中異嗪皮啶的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1100型高效液相色譜儀，紫外檢測器；TU-1901紫外分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；十萬分之一天平(上海亞榮儀器廠)。

1.2 試藥

異嗪皮啶對照品 (中國藥品生物制品檢定所提供 批號0837-9902供含量測定用)；刺五加軟膠囊（自制批號:20101001、20101002、20101003規(guī)格為0.3g)；乙腈為色譜純,水為去離子水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Diamonsil C18(250mm×4.6mm,10μm)；乙腈-0.1%冰醋酸溶液（20:80）；流速：1.0ml/min；檢測波長：345nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10ul，理論板數(shù)以不得低于2000。

色譜圖見圖1

圖1 異嗪皮啶HPLC色譜圖

2.2 對照品溶液的制備

取異嗪皮啶對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml約含20μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品10粒，除去膠皮取內(nèi)容物，精密稱定，取相當(dāng)于2粒的量，精密稱定。置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25ml。密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率33KHz）20分鐘。放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻。濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系考察

線性關(guān)系的考察 取異嗪皮啶對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液, 精密量取此溶液 2、6、12、16、20μl注入色譜儀,記錄色譜圖,以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程:

結(jié)果表明,異嗪皮啶在0.0406～0.4060μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

2.5 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收法,取同一批已知含量樣品 (批號:20101001異嗪皮啶含量0.236mg/粒)6份各10粒，除去膠皮取內(nèi)容物，精密稱定相當(dāng)于1粒的量的樣品，加入異嗪皮啶對照品溶液10ml（20μg/ml），按照2.3項(xiàng)供試品制備方法進(jìn)行測定，計算平均加樣回收率，結(jié)果平均加樣回收率為98.52%，RSD為0.72%。結(jié)果見表1。

表1

2.6 精密度試驗(yàn)

取同一對照品溶液,進(jìn)樣10μl,重復(fù)6次進(jìn)樣,依法測定，其峰面積的RSD=0.28%(n=6)。結(jié)果表明，儀器的精密度較高。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取樣品(批號20101001)的供試品溶液，分別于室溫下放置 0、2、4、6、8 小時后測定,異嗪皮啶峰面積積分值基本不變,RSD=0.65%(n=5)。結(jié)果表明，在室溫條件下，供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號的樣品(批號20101001)6份，按照供試品含量測定方法進(jìn)行操作，結(jié)果測得異嗪皮啶平均含量為0.236mg，RSD=0.53%(n=6)，表明本含量測定方法的重復(fù)性良好。

2.9 樣品含量測定

分別取本品三批（20101001、20101002、20101003），按供試品溶液制備方法制備并測定異嗪皮啶含量，結(jié)果見表2。

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3 討論

3.1 通過紫外掃描,異嗪皮啶在345nm處有最大吸收,故選擇345 nm為檢測波長。

3.2 先后分別考察了甲醇-水、甲醇-水-磷酸、乙腈-水-冰醋酸和甲醇-水-冰醋酸等多個系統(tǒng),分析結(jié)果表明：乙腈-0.1%冰醋酸溶液（20:80）系統(tǒng)分離效果最佳,理論塔板數(shù)較高，保留時間適中。

3.3 實(shí)驗(yàn)證明，用該法檢測刺五加軟膠囊中異嗪皮啶含量，可操作性強(qiáng)、線性關(guān)系良好、回收率和精密度較高、穩(wěn)定性和重現(xiàn)性良好，陰性樣品無干擾，該方法可作為刺五加軟膠囊的質(zhì)量控制方法。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）)[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2010:801.

[2]江敏 張強(qiáng).HPLC法測定刺五加膠囊中異嗪皮啶的含量[J].黑龍江醫(yī)藥,2005,18(2):9-10.

[3]趙陸華，屠穎，趙振宇等.HPLC測定刺五加軟膠囊中異嗪皮啶含量 [J].中草藥，2003，34(10):911-912.

[4]王憲明 周鈺 曲凡.反相高效液相色譜法測定刺五加藥材中異嗪皮啶含量[J].成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2007,30(3):59-60.