張麗虹,楊玉萍,陳小花,肖婷婷,肖培云
(大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院,云南大理 671000)
酸性染料比色法測定千里光總生物堿含量
張麗虹,楊玉萍,陳小花,肖婷婷,肖培云*
(大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院,云南大理 671000)
目的:研究測定千里光中總生物堿含量的方法。方法:以氧化苦參堿為對照品,采用酸性染料比色法,在422 nm波長處測定千里光中總生物堿含量。結(jié)果:氧化苦參堿在6.75~135μg與吸光度呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 2),平均回收率100.0%(RSD=1.54%)。結(jié)論:該方法簡便、準(zhǔn)確,可用于千里光中總生物堿的測定。
酸性染料比色法;千里光;總生物堿
千里光(Senecio scandens Buch.-Ham.)為菊科千里光屬植物的干燥地上部分〔1〕。本品以千里光之名始載于《本草拾遺》,味苦、辛,性寒,具有清熱解毒、明目退翳、殺蟲止癢之功效。主治流感、上呼吸道感染、肺炎、急性扁桃腺炎、腮腺炎、急性腸炎、菌痢、黃疸型肝炎、膽囊炎、急性尿路感染、目赤腫痛翳障、癰腫癤毒、丹毒、濕疹、干濕癬瘡、滴蟲性陰道炎、燒燙傷〔2〕。文獻(xiàn)報(bào)道千里光屬的大部分植物均含有吡咯里西啶生物堿、萜類、黃酮、有機(jī)酸等化學(xué)成分〔3〕。生物堿生理作用主要有抗腫瘤、有益神經(jīng)系統(tǒng)、抗菌、抗瘧。千里光中生物堿類的含量測定未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用酸性染料比色法,以氧化苦參堿為對照品測定千里光中總生物堿的含量〔4〕。
1.1儀器TU-1901雙光束紫外-可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司);梅特勒電子天平AE240(梅特勒儀器有限公司);DZKW-4電子恒溫水浴鍋(上??莆鰧?shí)驗(yàn)儀器廠);超聲波清洗器(上海科導(dǎo)超聲儀器公司);RE-3000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠);FYB5型萬能粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限責(zé)任公司);LD4-2型離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠);pHS-25C型數(shù)字酸度計(jì)(梅特勒儀器有限公司)試劑均為分析純。
1.2藥品與試劑氧化苦參堿對照品(中國藥品生物制品檢定所,含量測定用,批號:110780-200004),溴甲酚綠和其它試劑均為分析純。千里光藥材于2010年8月至12月采自云南省大理市蒼山東坡(經(jīng)大理學(xué)院藥學(xué)院生藥學(xué)教研室段寶忠老師鑒定)。
2.1 pH=5.0檸檬酸-磷酸緩沖溶液的配制0.1 mol/L磷酸二氫鈉和0.1 mol/L檸檬酸按1∶1混合,酸度計(jì)校正為pH=5.0。
2.2 0.6%溴甲酚綠溶液的配制稱取0.6 g溴甲酚綠,加入檸檬酸-磷酸緩沖液(pH=5.0)溶解,并定容至100 mL,得溴甲酚綠緩沖液。
2.3對照品溶液的制備精密稱取氧化苦參堿對照品13.5 mg,加70%乙醇溶解并定容至100 mL,作為對照品儲備溶液(0.135 mg/mL)。
2.4供試品溶液的制備按文獻(xiàn)〔5~6〕提取工藝,精密稱定千里光藥材5 g,加10倍量70%乙醇回流提取2次,每次1.5 h,過濾,合并提取液,回收乙醇,得浸膏。加3倍量2%鹽酸至浸膏中,超聲溶解,加適量石油醚分2次進(jìn)行脫脂,脫脂后的酸水液加氨水調(diào)pH=10,用氯仿萃取2次,合并氯仿液,加蒸餾水洗滌氯仿液,回收氯仿得千里光總堿。精密稱定,精密加入70%乙醇10 mL超聲溶解千里光總堿,冷卻,補(bǔ)重,作為千里光樣品儲備溶液。
2.5測定波長的選擇精密移取氧化苦參堿對照品溶液1.0 mL,置具塞試管中,加入氯仿10.0 mL。另取10.0 mL氯仿,置另一具塞試管中,制備空白液。分別加入pH5.0的0.6%溴甲酚綠緩沖液1.0 mL,密塞,劇烈振搖3 min,移入分液漏斗中,靜置10 min,分取氯仿層。精密吸取氯仿液5 mL,無水乙醇定容至10 mL,搖勻。在400~800 nm波長范圍內(nèi)掃描,結(jié)果最大吸收波長為422 nm。
2.6溴甲酚綠緩沖液用量的選擇精密量取對照品溶液4份,每份1 mL,加入氯仿10.0 mL,再分別精密加入溴甲酚綠緩沖液1.0、1.5、2.0、2.5 mL,空白溶液同法操作,按“2.5”項(xiàng)方法顯色,于422 nm下測定溶液吸光度。結(jié)果表明溴甲酚綠緩沖液用量為1.0 mL時(shí)有較明顯的吸光值,空白吸收較小,故選擇溴甲酚綠緩沖液用量為1.0 mL。
2.7標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別精密吸取氧化苦參堿對照品溶液 0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、1.5、2.0 mL按“2.5”項(xiàng)操作,取氯仿層于422 nm波長處測定吸光度值,以對照品量為橫坐標(biāo),吸光度值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到線性方程:Y=70.009x+0.168 4,r= 0.999 2。結(jié)果表明,氧化苦參堿在6.75~135μg范圍內(nèi)吸光度值與對照品用量呈良好的線性關(guān)系。
2.8精密度考察同一樣品液于422 nm波長處連續(xù)測定6次,得吸光度的RSD=0.076%(n=6)。
2.9重復(fù)性考察精密稱取千里光藥材6份,每份5 g,按“2.4”項(xiàng)方法制備樣品儲備液,精密取上述溶液1.0 mL,按“2.5”項(xiàng)下方法顯色,于422 nm處測定吸光度,計(jì)算含量。結(jié)果樣品平均含量為0.054 5 mg/g,RSD=1.56%(n=5)。結(jié)果表明重復(fù)性較好。
2.10穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品和對照品溶液,按“2.5”項(xiàng)顯色,并在0、5、10、15、20、25、30、35 min分別測定吸光度,結(jié)果表明在35 min內(nèi)基本穩(wěn)定,樣品RSD=2.14%(n=8),對照品RSD=0.15%(n=8)。
2.11加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取適量千里光藥材,共9份,按表1分別精密加入氧化苦參堿對照品溶液(0.135 mg/mL),每個(gè)梯度平行操作3份,按“2.4”項(xiàng)方法制備樣品儲備液,精密取上述溶液1.0 mL,“2.5”項(xiàng)操作,在422 nm波長處測定吸光度,計(jì)算回收率,結(jié)果見表1。
表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2.12樣品含量測定取大理境內(nèi)不同月份采集的不同部位千里光藥材,按“2.4”項(xiàng)方法制備樣品儲備液,精密取上述溶液適量,“2.5”項(xiàng)操作,測定總生物堿的含量,結(jié)果見表2。
表2 不同月份不同部位千里光總生物堿含量測定(mg/g)
本實(shí)驗(yàn)對千里光不同月份不同部位的總生物堿含量分別進(jìn)行了測定,從結(jié)果中可以看出,不同采收期、不同部位千里光總生物堿的含量有顯著變化,葉里的含量明顯較其它部位高,11月份采收的千里光葉總生物堿含量最高,其次是12月份。這是由于千里光在11月份生長發(fā)育到成熟階段,為開花茂盛期,植物體內(nèi)總生物堿含量較高,所以從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出11月份為最佳采收期。
千里光地上部分總生物堿含量明顯大于地下部分,含量依次為葉>花>莖>根。
采用酸性染料比色法測定中藥中總生物堿的含量〔7-8〕,是根據(jù)一定pH值條件下,生物堿鹽的陽離子和酸性染料的陰離子定量結(jié)合生成有色的絡(luò)合物(即離子對),此離子對可以定量的被某種有機(jī)溶劑萃取的原理,通過測定萃取液的吸光度,來測定中藥中總生物堿含量的方法。此方法簡便、快速、可靠、易行,適合千里光總生物堿含量測定,以控制其質(zhì)量。
〔1〕國家藥典委員會.中華人民共和國藥典〔S〕.2010版一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:32.
〔2〕國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草〔M〕.上海:上??萍汲霭嫔纾?999:1390.
〔3〕胡軍.千里光屬植物化學(xué)成分的研究進(jìn)展〔J〕.中成藥,2007,29(4):567-570.
〔4〕高江國,李巖.千里光總生物堿的富集工藝及Adonifoline的分離純化〔J〕.上海中醫(yī)藥雜志,2009,43(2):72-74.
〔5〕高淑云,焦?fàn)N.麻葉千里光中生物堿的提取及測定分析〔J〕.食品科學(xué),2009,30(18):261-266.
〔6〕王玉芹.峨眉千里光生物堿乙醇提取工藝研究〔J〕.中成藥,2004,26(10):2-3.
〔7〕蔣愛芳,楊義芳,黃文武.酸性染料比色法測定總生物堿的研究進(jìn)展〔J〕.中草藥,2006,37(S):359-362.
〔8〕萬進(jìn),方建國.酸性染料比色法測定荷葉總生物堿含量〔J〕.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2010,29(5):671-673.
*通信作者:肖培云,副教授.
(責(zé)任編輯 毛本勇)
Determination of Total Alkaloids Content in Senecio Scandens Buch.-Ham.by Acid Dye Colorimetry
ZHANG Lihong,YANG Yuping,CHEN Xiaohua,XIAO Tingting,XIAO Peiyun*
(School of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China)
Objective:To determine the total alkaloids content in Senecio scandens Buch.-Ham.Methods:Using the oxymatrine as standard,acid dye colorimetry was used to determine the total alkaloids content in S.scandens at the wavelength of 422 nm.Results: The concentration of oxymatrine showed good linearity in the range of 6.75-135μg(r=0.999 2),the average recovery was 100.0%(RSD=1.54%).Conclusion:The method is simple,reliable and can be used for determination of the total alkaloids in S.scandens.
acid dye colorimetry;Senecio scandens Buch.-Ham.;total alkaloids
R286;R917
A
1672-2345(2011)12-0030-02
大理學(xué)院大學(xué)生科研基金(DXSKYX201012)
2011-04-28
2011-09-17
張麗虹,大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院本科生.