周娟妮 趙詩云

（1江西中醫(yī)學院附屬醫(yī)院 南昌330006；2江西省中醫(yī)藥研究院 南昌330046）

肝復康片系根據(jù)部頒中藥成方制劑第7冊收載的肝復康丸經(jīng)劑型改革（改變提取工藝及劑型）而成的中藥片劑，功能收斂、益氣、解毒、降谷丙轉(zhuǎn)氨酶，用于急性肝炎、慢性肝炎、早期肝硬化和肝功能不良。為了評價其安全性，我們進行了肝復康片長期毒性研究，并觀察了其毒性作用的可逆性，為臨床安全用藥和毒副反應監(jiān)測提供參考。

1 實驗材料

1.1 供試品 肝復康片，每片含生藥量2 g，批號：091001。

1.2 動物 健康6～7周齡SD大鼠160只，體重100～120 g，雌雄各半，清潔級，由江西中醫(yī)學院實驗動物中心提供（合格證號：JZDWNO：2008-0049）。飼養(yǎng)環(huán)境為層流柜屏障系統(tǒng)，溫度20～26℃，相對濕度40%～70%，噪音低于60分貝。每籠5只，雌雄分開飼養(yǎng)，每組8籠。定時定量添加飼料和飲水，每兩天更換墊料一次。鼠全價顆粒飼料喂養(yǎng)，自由攝食。

1.3 儀器及試劑 BS-223S電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司），7170A全自動生化分析儀（日本日立），CD1400血球計數(shù)儀（美國），RM2235組織切片機（徠卡），CX-31生物顯微鏡（Olympus）?？偟鞍诇y定試劑盒（批號：20080210）、白蛋白測定試劑盒（批號：20080209）均由四川邁克爾生物制品有限公司生產(chǎn)，堿性磷酸酶測定試劑盒（批號：20080201）、血糖測定試劑盒（批號：20080127）、肌酐測定試劑盒（批號：20080313）、尿素氮測定試劑盒（批號：20080317）均由北京中生生物工程高技術公司生產(chǎn)，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（批號：20080109）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（批號：20080115）均由和光純藥工業(yè)株式會社生產(chǎn)，總膽紅素測定試劑盒（批號：20080116）、甘油三酯測定試劑盒（批號：20080125）、總膽固醇測定試劑盒（批號：20080118）、肌酸磷酸激酶測定試劑盒（批號：20080121）均由上海榮盛生物技術公司提供。

2 實驗方法

2.1 動物分組及給藥[1～2]將動物按體重隨機分為四組，40只/組，雌雄各半，設對照組及肝復康片高、中、低劑量組[18.50、6.15、2.05 g（生藥）/（kg·d）]，分別相當于臨床擬用劑量的74.0、24.6、8.2倍）。每日上午9:00～10:00給藥，連續(xù)給藥26周。

2.2 觀察指標[1～2]觀察大鼠的外觀特征、行為活動、飲食和體重等，每周記錄一次，即時記錄異常癥狀和體征。于給藥后13周、26周及停藥后2周（恢復期），每組處理10只、20只和10只動物，雌雄各半，眶后靜脈取血，進行血液學和血液生化檢查，處死動物，剖取臟器組織稱量濕重，計算臟器指數(shù)，并進行病理學檢查。血液學指標包括：紅細胞（RBC）計數(shù)、血紅蛋白（HGB）、紅細胞壓積（HCT）、平均紅細胞壓積（MCV）、平均紅細胞血紅蛋白（MCH）、平均紅細胞血紅蛋白濃度（MCHC）、白細胞計數(shù)（WBC）及其分類（LYN/N）、血小板計數(shù)（PLT）、網(wǎng)織紅細胞(RC)；血液生化學指標包括：丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN），苦味酸動力學法測肌酐（Cr）、血糖（G1u）、總蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、總膽紅素（TBil）、肌酸磷酸激酶（CK）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、球蛋白（GLB）、凝血酶原時間(PT)、K+、Na+、Cl-；臟器指數(shù)包括：腦、肝、心、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、睪丸（或子宮）、附睪（或卵巢）；病理檢查包括：大腦、小腦、垂體、肝、心、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、睪丸（或子宮）、附睪（或卵巢）、胃、大腸、小腸、淋巴結、膀胱等。

3 實驗結果

3.1 對動物的一般行為、外觀體征等的影響 給藥過程中，對照組及各給藥組動物均發(fā)育正常，皮毛光滑，反應機敏，自主活動未見異常，飲食及排泄物亦正常，試驗期間無動物死亡。

3.2 對體重、飼料消耗量、飲水消耗量的影響 給藥13周和26周及恢復期，各組動物體重均持續(xù)增長，各給藥組與空白對照組比較無顯著性差異，飲水量、飼料消耗量亦無顯著性差異。

3.3 對血液學指標的影響 給藥13周和26周，動物血液學檢測未見明顯異常改變，各給藥組與對照組比較，血液學指標無顯著性差異(P＞0.05)。見表1。

表1 肝復康片對大鼠血液學指標的影響 (±S)

表1 肝復康片對大鼠血液學指標的影響 (±S)

時間 組別 nWBC(109/L) N(%) L(%) RBC(1012/L)HGB(g/L)HCT(L/L) MCV(fL) MCH(pg) MCHC(g/L)PLT(109/L) RC(%)對照組 10 10.1±1.79 25.4±5.76 74.6±5.76 7.46±0.49 159±6.4 0.42±0.02 56.7±1.72 21.3±1.07 376±18.6 827±144.8 3.05±0.78高劑組 10 10.7±1.61 24.3±7.66 75.7±7.66 7.20±0.49 156±14.0 0.42±0.03 57.9±1.85 21.6±0.93 373±15.5 692±173.6 3.33±0.31給藥13周中劑組 10 10.3±2.56 23.1±4.65 76.9±4.65 7.30±0.51 154±10.7 0.42±0.03 57.5±2.73 21.1±0.79 367±20.7 703±279.3 2.92±0.40低劑組 10 10.0±1.47 22.5±6.06 77.5±6.06 7.16±0.49 152±7.9 0.41±0.03 57.5±1.56 21.3±0.94 370±12.7 696±227.7 3.34±0.70對照組 20 9.9±1.84 23.4±4.09 76.6±4.09 7.24±0.50 156±12.3 0.41±0.03 57.2±1.84 21.5±1.03 377±21.2 697±216.2 3.11±0.56高劑組 20 10.4±2.33 23.1±6.47 76.9±6.47 7.27±0.42 157±9.0 0.42±0.03 57.3±1.96 21.6±0.94 378±15.0 728±148.2 3.29±0.57給藥26周中劑組 20 10.1±1.50 25.0±7.36 75.0±7.36 7.36±0.56 157±10.4 0.42±0.03 57.2±2.35 21.3±0.88 373±23.1 696±239.5 3.04±0.71低劑組 20 10.0±1.59 23.0±5.82 77.0±5.82 7.25±0.42 154±9.1 0.42±0.02 57.5±1.93 21.3±1.16 370±20.8 806±144.5 3.40±0.60對照組 10 9.7±2.06 26.1±4.74 73.9±4.74 7.35±0.50 155±12.1 0.42±0.03 57.4±2.36 21.1±0.61 369±22.3 799±187.5 3.35±0.59高劑組 10 10.5±1.42 25.4±7.22 74.6±7.22 7.36±0.58 159±11.9 0.41±0.03 56.3±1.81 21.6±1.23 384±19.0 682±217.0 3.13±0.72恢復期 中劑組 10 10.9±2.31 21.2±4.31 78.8±4.31 7.19±0.56 155±13.4 0.42±0.03 57.7±1.80 21.5±0.97 373±22.7 711±217.7 3.13±0.47低劑組 10 9.3±1.31 21.8±6.99 78.2±6.99 7.23±0.45 153±7.1 0.42±0.02 57.7±1.76 21.3±0.83 369±11.7 746±184.9 3.33±0.7

3.4 對血液生化學指標的影響 給藥13周和26周，動物血生化學檢測未見明顯異常改變，各給藥組與對照組比較，血液生化學指標無顯著性差異（P＞0.05）。見表 2、表 3。

表2 肝復康片對大鼠血液生化學指標的影響 (±S)

表2 肝復康片對大鼠血液生化學指標的影響 (±S)

mol/L) ALT(U/L) AST(U/L) ALP(U/L) CREA(mmol/L) BUN(mmol/L)0.61 46.0±9.08 137.1±12.25 193.7±58.70 23.0±2.64 6.68±1.126 0.90 42.0±5.50 142.7±17.05 222.2±64.30 22.3±3.97 6.89±1.054 0.68 44.3±7.99 144.9±20.15 217.8±74.17 22.5±4.57 6.75±0.801 0.38 43.3±6.77 150.1±13.67 218.2±76.30 22.7±2.13 6.61±0.862 0.44 45.9±8.54 143.4±19.99 216.0±63.32 22.8±4.65 6.77±0.934 0.61 41.5±5.44 135.2±18.41 223.1±54.07 21.0±3.69 6.74±1.145中劑組 20 72.1±6.10 43.5±2.74 0.9±0.41 44.2±7.57 147.7±21.87 236.4±63.94 21.9±3.09 6.36±0.683低劑組 20 71.5±4.56 43.6±2.12 1.1±0.51 43.4±6.85 139.2±19.66 216.6±46.94 23.1±4.87 6.45±0.998對照組 10 70.5±3.64 42.7±1.55 1.1±0.62 46.4±7.29 141.5±19.36 211.9±68.49 23.2±1.62 6.47±0.718高劑組 10 70.9±4.69 43.5±2.32 1.2±0.98 46.1±7.74 142.0±17.11 210.1±66.12 23.2±4.35 6.77±0.761恢復期 中劑組 10 74.2±6.06 44.5±2.35 0.9±0.46 41.5±7.53 149.5±15.60 203.2±72.17 21.4±3.47 6.73±1.296低劑組 10 70.4±5.92 43.2±2.45 0.7±0.45 41.1±6.16 141.0±14.36 224.4±67.78 22.8±3.62 6.92±0.929

表3 肝復康片對大鼠血液生化學指標的影響 (±S)

表3 肝復康片對大鼠血液生化學指標的影響 (±S)

時間 組別 n GLU(mmol/L) CK(U/L) TG(mmol/L) TC(mmol/L) K+(mmol/L) Na+(mmol/L) Cl-(mmol/L) PT（s）對照組 10 7.88±0.932 724±207.3 1.11±0.413 1.91±0.314 6.4±0.52 144.8±3.35 101.0±1.19 16.5±1.73高劑組 10 7.40±0.948 753±251.0 1.12±0.365 2.16±0.223 6.2±0.42 143.4±2.31 100.4±1.89 16.7±1.91給藥13周 中劑組 10 7.69±0.612 723±237.8 1.01±0.522 1.99±0.355 6.4±0.64 143.0±1.98 100.9±2.02 16.4±1.56低劑組 10 7.76±0.905 658±230.5 1.07±0.411 1.93±0.311 6.3±0.67 143.7±3.47 100.4±1.56 17.1±1.64對照組 20 7.74±0.833 732±259.8 1.07±0.515 1.88±0.272 6.4±0.53 143.9±3.35 101.4±1.99 16.6±1.81高劑組 20 7.87±0.850 764±187.6 1.12±0.443 1.89±0.391 6.3±0.43 143.9±3.31 101.1±2.16 16.2±1.89給藥26周 中劑組 20 8.16±1.058 743±249.8 1.08±0.345 1.94±0.340 6.3±0.47 144.7±3.43 100.4±2.41 16.5±1.75低劑組 20 8.02±0.928 742±192.1 1.03±0.471 1.87±0.348 6.4±0.59 144.5±2.44 101.6±1.65 16.9±1.55對照組 10 6.24±0.711 704±157.9 1.10±0.425 1.92±0.359 6.5±0.69 144.4±3.52 100.9±1.78 16.6±1.86高劑組 10 6.34±0.643 712±199.3 1.02±0.509 2.11±0.284 6.3±0.44 143.2±3.97 100.7±1.99 16.4±1.45恢復期 中劑組 10 6.05±0.885 679±303.6 0.99±0.359 2.05±0.341 6.3±0.47 144.7±3.23 100.2±2.62 16.5±1.34低劑組 10 6.19±1.167 771±248.9 1.22±0.392 1.90±0.247 6.3±0.60 142.2±1.98 100.3±1.86 15.9±1.95

3.5 系統(tǒng)尸檢及病理檢查 系統(tǒng)尸檢，各組組織及器官均未見異常；各給藥組與對照組比較，臟器指數(shù)無顯著性差異（P＞0.05）。見表4。光鏡病理檢查結果顯示，對照組及各給藥組均有少數(shù)動物肺組織切片出現(xiàn)異常。肺切片可見局部肺氣腫，或肺泡隔增厚，炎性細胞浸潤。由于各組均散在出現(xiàn)相似肺組織炎性反應，出現(xiàn)的數(shù)量也相近，故沒有毒理學意義。組織病理學檢查，給藥結束及恢復期結束，與對照組相比，各給藥組均未出現(xiàn)相關毒性病理改變。系統(tǒng)尸檢及病理檢查顯示，肉眼觀察臟器未見明顯異常，臟器系數(shù)均在正常范圍內(nèi)，高劑量組動物臟器組織學與對照組一致，基本正常，均未見有特異性組織病變及延遲性病變發(fā)生。

4 討論

大鼠連續(xù)灌胃給藥肝復康片26周，各給藥組大鼠的皮毛、活動、體重、飲食、排泄物及病理學檢查均未出現(xiàn)異常改變；且大鼠的血液學指標、血液生化學指標、臟器指數(shù)指標與對照組比較均未出現(xiàn)顯著性差異（P＞0.05）；光鏡病理檢查結果顯示，對照組及各給藥組均有少數(shù)動物肺組織切片出現(xiàn)異常，推測可能與動物本身個體差異以及處理動物時的操作和給藥過程有關，與藥物無明顯相關性，其余動物臟器組織學檢查未見明顯異常。在恢復2周后，各組各項指標正常，未見蓄積毒性產(chǎn)生，未見與藥物有關的不可逆毒性反應。實驗結果表明，在本試驗條件下，大鼠口服肝復康片26周未見明顯毒性反應的劑量為18.50 g（生藥）/(kg·d)，該劑量相當于臨床擬用劑量的74倍。

表4 肝復康片對大鼠臟器指數(shù)的影響 (±S) g/kg

表4 肝復康片對大鼠臟器指數(shù)的影響 (±S) g/kg

6.92±0.99 4.72±0.87 7.17±0.34 5.03±0.40 7.26±0.50 4.71±0.49 7.49±0.42 5.18±0.15肝31.12±5.38 29.63±2.87 30.63±2.42 31.22±1.59 31.87±1.62 28.92±3.19 32.70±4.10 28.24±2.70心3.41±0.20 3.40±0.34 3.40±0.24 3.51±0.35 3.56±0.47 3.37±0.25 3.73±0.23 3.22±0.19胸腺 1.88±0.59 0.90±0.20 1.68±0.31 1.17±0.19 1.67±0.27 1.22±0.35 1.68±0.32 1.20±0.37肺6.01±0.66 5.28±0.63 5.42±0.69 5.54±0.24 5.34±0.77 4.66±0.87 5.74±0.52 5.39±1.17給藥13周 腎 3.18±0.38 3.14±0.34 3.09±0.40 3.22±0.19 3.28±0.38 3.24±0.24 3.28±0.39 3.27±0.17對照組 高劑組 中劑組 低劑組時間 組別 ♀ ♂ ♀ ♂ ♀ ♂ ♀ ♂腦2.66±0.17 2.04±0.37 2.74±0.52 2.05±0.34 2.54±0.39 1.78±0.22 2.79±0.62 2.00±0.24睪丸/子宮 2.32±0.67 3.95±0.28 2.00±0.56 3.66±0.10 2.02±0.28 3.51±0.20 1.91±0.39 3.71±0.64附睪/卵巢 0.46±0.07 1.40±0.16 0.43±0.08 1.54±0.30 0.49±0.11 1.31±0.12 0.59±0.19 1.45±0.50腎上腺 0.13±0.02 0.06±0.01 0.14±0.03 0.06±0.01 0.14±0.03 0.06±0.01 0.16±0.03 0.07±0.01腦7.39±0.35 4.96±0.77 7.06±0.55 4.92±0.40 7.19±0.72 5.04±0.60 7.11±0.77 4.99±0.37肝32.47±3.40 28.20±2.84 31.09±3.38 30.51±2.13 30.02±3.21 28.98±2.69 32.09±3.93 29.78±2.63心3.86±0.68 3.33±0.27 3.78±0.40 3.45±0.25 3.63±0.41 3.36±0.33 3.44±0.23 3.32±0.14胸腺 1.77±0.39 0.98±0.21 1.83±0.34 0.95±0.23 1.59±0.37 1.10±0.31 1.57±0.32 1.12±0.32肺5.95±0.65 5.44±0.68 5.61±0.57 5.47±0.63 5.54±0.67 5.29±0.99 5.66±0.68 5.25±0.69給藥26周 腎 3.25±0.35 3.34±0.31 3.23±0.50 3.33±0.27 3.15±0.33 3.29±0.21 3.17±0.29 3.25±0.21脾2.70±0.77 2.14±0.68 2.58±0.35 1.93±0.35 2.67±0.78 1.96±0.22 2.80±0.67 2.14±0.66睪丸/子宮 2.01±0.31 3.86±0.34 2.00±0.67 3.62±0.43 1.71±0.63 3.72±0.49 1.86±0.50 3.57±0.21附睪/卵巢 0.50±0.07 1.45±0.22 0.49±0.18 1.43±0.11 0.49±0.18 1.43±0.20 0.45±0.09 1.47±0.27腎上腺 0.16±0.03 0.07±0.02 0.14±0.02 0.05±0.01 0.14±0.02 0.06±0.01 0.14±0.04 0.06±0.01腦6.80±0.70 5.16±0.47 7.10±0.30 4.99±0.32 7.18±0.51 4.93±0.35 7.34±0.51 4.67±0.96肝32.02±3.20 26.50±1.95 31.37±1.91 28.92±2.14 32.42±2.10 28.22±2.90 33.31±2.55 29.92±3.27心3.58±0.24 3.22±0.18 3.97±0.56 3.34±0.16 4.10±0.63 3.34±0.17 3.64±0.22 3.47±0.48胸腺 1.59±0.39 1.14±0.40 1.73±0.44 0.97±0.20 1.80±0.47 1.09±0.25 1.47±0.13 1.24±0.30肺5.63±0.32 5.40±1.37 5.66±0.45 5.78±0.73 5.77±0.70 4.92±0.79 5.25±0.80 5.15±0.48恢復期 腎 3.25±0.23 3.19±0.44 3.19±0.31 3.21±0.17 3.52±0.35 3.42±0.27 3.49±0.31 3.26±0.18脾3.02±0.98 2.03±0.37 2.39±0.51 2.33±0.90 2.63±0.33 1.86±0.28 2.77±1.06 1.95±0.17睪丸/子宮 1.81±0.28 3.69±0.63 1.73±0.37 3.68±0.23 1.90±0.52 3.36±0.57 1.84±0.37 3.86±0.26附睪/卵巢 0.55±0.22 1.26±0.18 0.42±0.06 1.32±0.07 0.51±0.03 1.35±0.11 0.47±0.12 1.40±0.26腎上腺 0.14±0.02 0.07±0.01 0.16±0.04 0.06±0.01 0.14±0.02 0.06±0.02 0.14±0.05 0.06±0.01脾

[1]陳奇.中藥藥理研究方法學[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1993.119

[2]中華人民共和國衛(wèi)生部藥政管理局.中藥新藥研究指南·毒理學[M].1994.20