史瑩華，王成章，陳明亮，姚惠霞，袁德地，王先科

(河南農(nóng)業(yè)大學牧醫(yī)工程學院，河南 鄭州 450002)

紫花苜蓿(Medicagosativa)享有“牧草之王”的美譽，具有產(chǎn)草量高、適應性強、草質(zhì)優(yōu)良、營養(yǎng)豐富、適口性好、易于家畜消化等特點。苜蓿草粉富含蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、維生素和色素，以及多種未知生長和繁殖因子[1-3]，可以提高動物的生長、生產(chǎn)及繁殖性能，而且苜蓿中含有大量的生物活性物質(zhì)，如皂甙、多糖及黃酮類化合物等可以降低動物血清膽固醇、甘油三酯，具有預防和減輕動脈粥狀硬化等心血管疾病的作用。目前國內(nèi)外有關苜蓿草粉對生長肥育豬、母豬、蛋雞生產(chǎn)性能影響的研究報道較多[4-9]，但在肉鵝飼養(yǎng)中應用的研究報道較少。Timmer[10]報道，在4周齡前鵝日糧中添加0～15%、5～6周齡鵝日糧中添加30%草粉對鵝生長、屠宰性能無顯著影響，但減少胴體脂肪的沉積。Yu等[11]指出，鵝盲腸內(nèi)容物中有淀粉酶和纖維素水解酶，對飼料纖維有一定的利用潛力，在日糧中添加適量的草粉與粗纖維不會對鵝生長造成不良影響。Hallsworth和Coates[12]報道，鵝具有發(fā)達的肌胃，其肌肉層較其他家禽厚，肌胃收縮壓分別為鵝35 330～37 330 Pa，鴨為23 998 Pa，雞為13 332～19 998 Pa。特殊的消化道結(jié)構(gòu)可以使其采食并消化大量的高纖維飼料。苜蓿草粉對鵝抗氧化和免疫能力等方面的影響尚未見報道。鑒于此，本試驗旨在研究苜蓿草粉對肉鵝生長性能及抗氧化和免疫功能的影響，并初步探討其作用機理，為生產(chǎn)實踐提供依據(jù)和參考。

1 材料與方法

1.1試驗動物與試驗設計 選用160只15日齡健康四川白鵝仔鵝，隨機分為4個處理，每處理4個重復，每重復10只，公母各半。試驗鵝分別飼喂基礎日糧(對照)，添加10%(T1)、20%(T2)和30%(T3)的苜蓿草粉日糧?；A日糧及試驗日糧參考肉鵝飼養(yǎng)標準[13]并結(jié)合生產(chǎn)實踐配制，配方及其主要營養(yǎng)成分見表1、表2。試驗所用苜蓿草粉產(chǎn)自鄭州黃河草業(yè)畜牧有限公司。選用在初花期刈割的苜蓿，經(jīng)自然干燥、加工而成苜蓿草粉。經(jīng)測定草粉中營養(yǎng)成分含量為：干物質(zhì)87.00%、粗蛋白17.20%、粗纖維25.60%、粗脂肪2.60%、粗灰分8.30%、鈣1.52%、磷0.22%。

表1 試驗日糧配方 %

表2 試驗日糧營養(yǎng)成分

1.2飼養(yǎng)管理 試驗鵝采用地面平養(yǎng)方式飼養(yǎng)，預試期10 d，正試期30 d。試驗鵝飼喂?jié)癜枧浜巷暳?，自由采食，自由飲水。消毒和免疫按常?guī)方法進行。試驗期間每日觀察鵝精神狀態(tài)、行為并記錄耗料量。飼養(yǎng)試驗結(jié)束時，禁食(自由飲水)24 h 后稱體質(zhì)量，計算試驗鵝的平均日采食量(ADFI)、日增體質(zhì)量(ADG)和料重比(F/G)。

1.3屠宰試驗與取樣 飼養(yǎng)試驗結(jié)束后，每個重復隨機選取體質(zhì)量相近的試驗鵝2只，共32只，自由飲水，禁食24 h后編號，稱體質(zhì)量，屠宰，取血樣置于37℃水浴中，待析出血清后轉(zhuǎn)入離心管中以3 000 r/min離心10 min，所得血清樣品分裝于eppendorf管中，-70℃保存，以測定其中免疫球蛋白IgA、IgG、IgM水平。取胸腺、脾臟和腔上囊稱量，計算各免疫器官指數(shù)。取肝臟、胸肌、腿肌樣品約30 g，于-70℃冰箱保存，以測定其中超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量。測定均按照南京建成生物工程研究所的試劑盒所提供的方法進行。

1.4數(shù)據(jù)處理 所有數(shù)據(jù)均以平均值±標準差表示，采用SAS 8.0軟件中的一般線性模式(GLM)對數(shù)據(jù)進行方差分析，各處理間平均值的比較采用Duncan氏多重比較進行差異顯著性檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1苜蓿草粉對鵝生長性能的影響 隨著苜蓿草粉添加量的提高，肉鵝的日增體質(zhì)量呈現(xiàn)降低的趨勢，料重比呈現(xiàn)上升的趨勢(表3)。T1組的日增體質(zhì)量最高，與對照組和T3組差異顯著(P<0.05)，與T2組差異不顯著(P>0.05)。T2、T3組與對照組差異不顯著(P>0.05)。T1組的料重比最低，與對照組和T2、T3組差異均顯著(P<0.05)。T2組與對照組差異不顯著(P>0.05)。T3組與對照組差異顯著(P<0.05)。各處理組之間日采食量差異不顯著(P>0.05)。

2.2苜蓿草粉對鵝抗氧化性能的影響

2.2.1四川白鵝肝臟和肌肉中超氧化物歧化酶活性 飼糧中添加苜蓿草粉后，肝臟及肌肉中的SOD活性均有所升高(表4)。肝臟中SOD活性T2組顯著高于對照組(P<0.05)，T1、T3組與對照組差異不顯著(P>0.05)；胸肌中SOD活性試驗組均顯著高于對照組(P<0.05)，以T2組最高；腿肌中SOD活性T2組顯著高于對照組(P<0.05)，T1、T3組與對照組差異不顯著(P>0.05)。

表3 苜蓿草粉對鵝生長性能的影響

2.2.2四川白鵝肝臟及肌肉谷胱甘肽過氧化物酶活性 飼糧中添加苜蓿草粉后，肝臟及肌肉中的GSH-Px活性均有所升高(表5)。肝臟中GSH-Px活性T2組顯著高于對照組(P<0.05)，T1、T3組與對照組差異不顯著(P>0.05)；胸肌中GSH-Px活性試驗組均高于對照組，但各處理間差異不顯著(P>0.05)；腿肌中GSH-Px活性T2組顯著高于對照組、T1和T3組(P<0.05)。

2.2.3四川白鵝肝臟及肌肉丙二醛含量 飼糧中添加苜蓿草粉后，MDA在肝臟和肌肉中的含量均有所降低(表6)。肝臟中MDA含量T1、T2組顯著低于對照組(P<0.05)，T3組與對照組差異不顯著(P>0.05)；胸肌中MDA含量T2組顯著低于對照組(P<0.05)，T1、T3組與對照組差異不顯著(P>0.05)。腿肌中MDA含量均低于對照組，但各處理間差異不顯著(P>0.05)。

2.3苜蓿草粉對鵝免疫性能的影響 隨著苜蓿草粉的添加，試驗組的免疫指數(shù)均比對照組高(表7)。T2、T3組胸腺指數(shù)顯著高于對照組(P<0.05)，T1組與對照組差異不顯著(P>0.05)；T3組法氏囊指數(shù)顯著高于對照組(P<0.05)，T1、T2組與對照組差異不顯著(P>0.05)；脾臟指數(shù)各處理之間差異不顯著(P>0.05)。IgG含量T3組最高，顯著高于對照組(P<0.05)，T1、T2組與對照組差異不顯著(P>0.05)；飼糧中添加苜蓿草粉對IgM、IgA含量沒有顯著的影響(P>0.05)，但是有提高的趨勢。

表4 苜蓿草粉對鵝肝臟、胸肌、腿肌蛋白質(zhì)中SOD活性的影響 U/mg

表5 苜蓿草粉對鵝肝臟、胸肌、腿肌蛋白質(zhì)中GSH-Px活性的影響 U/mg

表6 苜蓿草粉對鵝肝臟、胸肌、腿肌蛋白質(zhì)中MDA含量的影響 nmol/mg

表7 苜蓿草粉對鵝免疫性能的影響

3 討論

3.1苜蓿草粉對四川白鵝生長性能的影響 近些年來，關于苜蓿草粉對畜禽生產(chǎn)性能影響的研究較多，均取得了較好的效果。蔣永清等[14]報道，肉雞日糧中添加3%的苜蓿草粉，可提高其生長速度，降低飼料報酬。臧為民等[15]、王成章等[5]、廉紅霞等[16]報道，在飼糧中添加苜蓿草粉可顯著改善肥育豬、妊娠母豬、哺乳母豬及其仔豬的生產(chǎn)性能。張春梅等[17]、何云等[18]報道，在魚飼糧中添加苜蓿草粉對魚生產(chǎn)性能和魚肉品質(zhì)均有較顯著的改善作用。許富忠[19]的研究表明，2～5周齡鵝飼喂120 g/kg的苜蓿草粉，其體質(zhì)量增加有升高的趨勢。趙輝和徐悅[20]的研究表明，用紫花苜蓿飼喂鵝其體質(zhì)量增加效果顯著，且能提高鵝的抵抗力和適應能力。本研究結(jié)果表明，與對照組相比，10%的苜蓿草粉能顯著提高四川白鵝的日平均體質(zhì)量增加量，降低料重比，但是30%的苜蓿草粉添加量對鵝的生長反而有不良的影響。20%苜蓿草粉組鵝的生長性能與對照組差異不顯著。說明苜蓿草粉作為一種優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)、維生素和礦物質(zhì)補充料，其適宜的添加量能促進動物生長，降低飼料報酬。這與前人對苜蓿草粉在豬、雞、魚上的研究報道是一致的。但苜蓿草粉添加量過高時，會在一定程度上抑制動物的生長。這與其中含有的大量纖維、皂甙等可能對動物產(chǎn)生不利影響有關。

3.2苜蓿草粉對四川白鵝抗氧化性能的影響 生物體脂質(zhì)過氧化作用(lipid peroxidation,LPO)是自由基介導的鏈式反應。自由基是一類具高度化學反應活性且生物毒性很強的代謝產(chǎn)物，它們可攻擊細胞的脂類、蛋白質(zhì)及核酸等成分，導致細胞功能和結(jié)構(gòu)的改變。活性氧自由基對生物膜的脂質(zhì)過氧化損傷最為廣泛和嚴重，其形成的脂質(zhì)過氧化物還可繼續(xù)降解生成丙二醛、烷烴等終末產(chǎn)物，這些分解產(chǎn)物能引起細胞成分的損傷[21]。正常生理情況下，機體存在有效的抗氧化防御體系，包括酶系統(tǒng)和非酶系統(tǒng)，酶系統(tǒng)包括超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶和過氧化氫酶等，非酶系統(tǒng)包括維生素A、維生素C、維生素E，硒、黃酮類、輔酶Q、半胱氨酸和谷胱甘肽等，這兩個系統(tǒng)共同作用使得自由基的產(chǎn)生與清除之間處于動態(tài)平衡，維持生理低水平的自由基濃度。因此，通過測定機體谷胱甘肽過氧化物酶、超氧化物歧化酶等活力以及丙二醛的含量，在一定程度上可以反映機體抗氧化防御體系的抗氧化能力的高低[22-24]。本試驗中，10%、20%、30%苜蓿草粉組鵝肝臟和肌肉中的超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶活性均高于對照組，丙二醛含量低于對照組，說明添加苜蓿草粉能有效提高四川白鵝的抗氧化能力，其中20%苜蓿草粉組效果最顯著。推測其原因為：苜蓿中含有皂甙類、異黃酮類、多糖類、胡蘿卜素、硒和多種維生素(維生素C、維生素E等)等活性物質(zhì)[25]，這些生物活性物質(zhì)對機體的抗氧化作用都有一定的影響。類胡蘿卜素能夠猝滅動物體內(nèi)單線態(tài)氧，消除自由基，阻止脂質(zhì)過氧化，減少自由基對細胞遺傳物質(zhì)和細胞膜的損傷[26-27]。硒是谷胱甘肽過氧化物酶的必要組成部分[28]。維生素E能避免脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生，保護生物膜的結(jié)構(gòu)與功能[29]。異黃酮能有效清除氧化自由基從而具有抗氧化的作用[30]。沈小燕[31]、張藝[32]研究了苜蓿葉蛋白對機體抗氧化性能的影響，結(jié)果表明苜蓿葉蛋白可提高機體谷胱甘肽過氧化物酶、超氧化物歧化酶活力，降低丙二醛含量，表明苜蓿葉蛋白具有一定的抗過氧化作用。何云[33]對黃河鯉魚的研究表明，添加苜蓿草粉能提高魚體的抗氧化性能，添加量為10%的苜蓿草粉組效果最好。劉圈煒[34]的研究也表明苜蓿青飼波爾山羊后，可提高其肌肉中超氧化物歧化酶的含量、降低丙二醛的含量。這些研究與本試驗的結(jié)果是一致的。

3.3苜蓿草粉對四川白鵝免疫性能的影響 免疫器官是動物免疫活性細胞發(fā)育、增殖的場所。胸腺和法氏囊是機體的中樞免疫器官，中樞免疫器官控制著機體的免疫應答反應，可賦予小淋巴細胞以免疫功能，使其成為T、B淋巴細胞；脾臟是動物重要的外周免疫器官，是T、B淋巴細胞定居、增生和對抗原的刺激進行免疫應答的場所。法氏囊作為免疫器官之一，尤其對于仔鵝的早期健康起著非常重要的作用。因此，免疫器官指數(shù)的高低可用于評價機體的非特異性免疫水平及動物的免疫狀況。體液免疫是動物特異免疫的一個重要方面，免疫球蛋白水平的高低直接反映體液免疫功能的強弱。本研究表明，隨苜蓿草粉添加量的增加，鵝胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)及血清IgG、IgM、IgA水平均呈升高趨勢，說明在四川白鵝日糧中添加苜蓿草粉能提高機體的免疫力，其中30%苜蓿草粉組效果最明顯。這可能與苜蓿中含有大量的生物活性成分密不可分，如苜蓿多糖、苜蓿異黃酮和苜蓿皂甙等均能促進動物免疫器官的發(fā)育，提高動物的免疫性能。苜蓿多糖通過提高B細胞的活性增進B細胞的功能，可對淋巴細胞產(chǎn)生較強的活化作用，能提高IL-2和免疫球蛋白IgG、IgM和補體C5的水平[35-36]。郝永清等[37]、王麗容等[38]、張世軍等[39]的研究均表明苜蓿多糖可以提高畜禽的免疫功能。異黃酮類化合物具有廣泛的生物活性，可有效清除機體內(nèi)的自由基，具有抗氧化、提高免疫、降血脂、預防心腦血管疾病等作用，對人類健康和動物生產(chǎn)都具有益作用[40]。朱宇旌等[41]報道，苜蓿異黃酮對小鼠的特異性和非特異性免疫功能都有不同程度的提高和改善作用。Cheeke[42]報道皂甙能誘導多種細胞因子，如IL-2、IL-4、IL-8、IFN的表達，提高動物機體對抗原的特異性抗體水平，刺激產(chǎn)生抗體亞類IgG1、IgG2b和/或IgG2a；皂甙還能通過其佐劑效應影響機體免疫系統(tǒng)，這種效應通過促進大分子吸收和它們的免疫刺激作用來提高免疫性能，但其具體作用機制有待進一步研究。徐兵[43]、王彥華[44]的研究均表明，在日糧中添加苜蓿草粉和皂甙可以提高斷奶仔豬和肥育豬的免疫功能。

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