楚秉泉，毛祝新，傅 華

(蘭州大學(xué)草地農(nóng)業(yè)科技學(xué)院 農(nóng)業(yè)部草地農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)學(xué)重點開放實驗室，甘肅 蘭州 730020)

脂肪酸是重要的生理活性物質(zhì)，在機體內(nèi)有特殊的生物學(xué)效應(yīng)，特別是不飽和脂肪酸，其對心腦血管類疾病有明顯的預(yù)防和治療作用，對人體健康具有重要意義[1-2]。反芻動物由于其瘤胃的氫化作用，其產(chǎn)品的飽和脂肪酸含量比較高，提高此類產(chǎn)品的消費量將會增加患心血管疾病和其他消化代謝類疾病的風險[3]。因此，探索提高肉類生產(chǎn)過程中不飽和脂肪酸的含量，是提高畜產(chǎn)品品質(zhì)的一個重要目標。盡管牧草中只含有少量的脂類，但是它們是以牧草為飼料的動物脂肪酸的重要來源[4]。Lorenz等[5]研究表明，與精料飼喂相比，放牧可顯著提高牛肉中n-3不飽和脂肪酸含量和牛奶中共軛亞油酸的含量，降低n-6不飽和脂肪酸含量，因此，很有必要對牧草中的脂肪酸構(gòu)成進行研究。Boufaied等[6]檢測了貓尾草(Phieumpratense)、黑麥草(Loliumperenne)等12個不同物種的脂肪酸組成及其含量，發(fā)現(xiàn)不同物種之間的脂肪酸含量差異較大，同一物種不同生育期脂肪酸含量及組成也不同。李志強等[7]對紫花苜蓿(Medicagosativa)、鴨茅(Dactylisglomerata)等12份牧草中脂肪酸進行了研究，其中亞麻酸含量最高，亞油酸次之，其他脂肪酸含量很少，豆科牧草和禾本科牧草的脂肪酸組成無明顯差別，且脂肪酸含量在不同生育期無顯著差異。Yoshida[8]發(fā)現(xiàn)耐低溫牧草不飽和脂肪酸含量較高。而目前對我國高海拔地區(qū)種植的牧草脂肪酸組成及含量研究較少。因此，本研究以我國高山草原地區(qū)廣泛種植的箭筈豌豆(Viciasativa)和垂穗披堿草(Elymusnutans)為對象，分析其脂肪酸含量和組成，旨為這兩份種質(zhì)資源的開發(fā)和利用提供參考。

1 材料與方法

1.1試驗地概況 試驗區(qū)位于甘南州夏河縣，地理坐標為102°25′ E，35°06′ N,海拔3 049 m，≥0 ℃年積溫1 806 ℃·d，年降水量為400～500 mm，屬于典型的高山草原。土壤為山地黑鈣土。

1.2樣品來源 垂穗披堿草地為2008年建植，播種方式為撒播，播種量為15 kg/hm2；箭筈豌豆為2009年種植，播種方式為條播，播種量為75 kg/hm2，于2009年初花期各采集鮮樣1 000 g，用冷凍干燥機(美國Labconco公司)干燥，粉碎，過40目篩，用于測定脂肪酸。

1.3脂肪酸前處理 稱取10 g(精確至0.1 mg)待測牧草，用索氏抽提法提取粗脂肪，隨后將粗脂肪和無水乙醚混合液轉(zhuǎn)移至50 mL的圓底燒瓶中，于75 ℃左右的水浴中回收溶劑，稍冷卻后置于40 ℃的真空干燥箱中干燥，用差量法計算粗脂肪質(zhì)量。再加入約為其粗脂肪質(zhì)量分數(shù)20%的十七烷酸(精確至0.1 mg)、4 mL 0.5 mol/L 氫氧化鈉-甲醇溶液和少許沸石于燒瓶中，在冷凝回流下煮沸至脂肪液滴消失后再持續(xù)30 min。用移液器從冷凝管頂部加入5 mL質(zhì)量分數(shù)為10%～15%的三氟化硼甲醇溶液，繼續(xù)煮沸3 min。將燒瓶從水浴鍋中取出，從冷凝管頂部加入1～3 mL正己烷，冷卻至室溫，加入15 mL氯化鈉飽和水溶液，振蕩后靜置5 min，繼續(xù)加氯化鈉飽和水溶液使液面至瓶頸部，用膠頭滴管取上層液，然后再用正己烷萃取3次，每次加入正己烷2 mL，將上層液合并至小錐形瓶中，用少量無水硫酸鈉干燥后過濾。之后用GC-MS儀測定脂肪酸組成和含量[9]。

1.4脂肪酸組成和含量測定 使用美國Agilent公司6890N 型氣相色譜儀和5975C 質(zhì)譜儀，采用自動進樣，每個樣品連續(xù)進樣6次。

色譜條件：采用石英毛細管柱(Agilent DB-FFAP，30.0 m×250.0 μm×0.5 μm，最高溫度250 ℃)，進樣量為0.2 μL；分流比為100∶1；進樣口溫度為200 ℃；程序升溫從130 ℃開始，以15 ℃/min升至190 ℃，保持1 min，以 8 ℃/min升至230 ℃保持12 min；柱流速為1.1 mL/min；載氣為高純氦氣(99.999%)。

質(zhì)譜條件：電離源為70 eV；離子源溫度230 ℃；四級桿溫度150 ℃；界面溫度為250 ℃；溶劑延遲為1.5 min。

1.5樣品的測定 通過NIST譜圖庫檢索，并配合脂肪酸標準物質(zhì)比對，進行脂肪酸定性，通過十七烷酸內(nèi)標進行定量。

2 結(jié)果

2.1脂肪酸測定方法 在篩選獲得的色譜條件下，從箭筈豌豆333/A和垂穗披堿草中分別檢測到12種和11種脂肪酸，各成分出峰時間均勻，峰型好(圖1、圖2)。平行進樣6次，各組分含量相對標準偏差均小于3%(表1)。

2.2箭筈豌豆333/A中脂肪酸組成及含量 箭筈豌豆333/A中共檢測到12種脂肪酸，其中不飽和脂肪酸(UFA)4種，含量為2.77 g/kg，占脂肪酸總量的57.25%；飽和脂肪酸(SFA)8種，含量為2.07 g/kg，占脂肪酸總量的42.75%；UFA/SFA為1.34。UFA中α-亞麻酸含量最高(1.64 g/kg)，亞油酸含量次之(0.83 g/kg)，油酸和棕櫚油酸含量最低(0.22和0.08 g/kg)。 SFA中棕櫚酸含量最高(1.34 g/kg)，癸酸含量最低(0.01 g/kg)，粗脂肪含量為14.2 g/kg(圖1、表1)。

2.3垂穗披堿草中脂肪酸組成及含量 垂穗披堿草中共檢測到11種脂肪酸，其中UFA 4種，含量為3.07 g/kg，占脂肪酸總量的68.84%；SFA 7種，含量為1.39 g/kg，占脂肪酸總量的31.16%；UFA/SFA為2.21。UFA中α-亞麻酸含量最高(2.02 g/kg)，亞油酸含量次之(0.83 g/kg)，油酸和棕櫚油酸含量最低(0.17和0.05 g/kg)。SFA中棕櫚酸含量最高(0.93 g/kg)，十二烷酸和十四烷酸含量最低(0.01和0.02 g/kg)，粗脂肪含量為24.5 g/kg(圖2、表1)。

圖1 箭筈豌豆333/A總離子流圖

圖2 垂穗披堿草總離子流圖

表1 牧草中脂肪酸組成和含量

3 討論與小結(jié)

本研究從箭筈豌豆333/A中檢測到4種不飽和脂肪酸和8種飽和脂肪酸，其中11種脂肪酸和Cabiddu等[10]對8種箭筈豌豆的研究一致，但該研究還發(fā)現(xiàn)十七烷酸和油酸的2種同分異構(gòu)體C18∶1(c-9)和C18∶1(c-11)，而本研究中并未檢測到十七烷酸，所檢測到的油酸為C18∶1(c-10)。箭筈豌豆333/A中飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸占總脂肪酸的比例分別為42.75%和57.25%，而Cabiddu等[10]發(fā)現(xiàn)箭筈豌豆中飽和脂肪酸為49.62%～71.28%，不飽和脂肪酸為28.72%～50.38%。因此可以認為，在高山草原地區(qū)種植的箭筈豌豆333/A中不飽和脂肪酸比例更高，具有較高的利用價值，而垂穗披堿草中檢測到4種不飽和脂肪酸和7種飽和脂肪酸，除癸酸未被檢測到外，其他與箭筈豌豆種類相同，但不飽和脂肪酸含量更高。

兩種牧草中不飽和脂肪酸均以α-亞麻酸含量為最高，亞油酸含量次之，油酸和棕櫚油酸含量最低，這和李志強等[7]對我國12種牧草材料的研究結(jié)果一致。特別是禾本科牧草垂穗披堿草與豆科牧草箭筈豌豆333/A相比，其不飽和脂肪酸含量高11%，飽和脂肪酸含量低33%,UFA/SFA是后者的1.65倍。

本研究對高山草原地區(qū)廣泛分布的兩種牧草進行脂肪酸分析，采用GC-MS聯(lián)用技術(shù)，得出的結(jié)果分離效果好，重現(xiàn)性高，具有一定的參考價值，為更全面了解其活性成分,飼用資源開發(fā)等提供依據(jù)。

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[2]阮征,吳謀成,胡筱波,等.多不飽和脂肪酸的研究進展[J].中國油脂,2003,28(2):55-59.

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[8]Yoshida S.Chemical and biophysical changes in the plasma membrane during cold acclimation of mulberry bark cells (MorusbombycisKoidz.cv Goroji)[J].Plant Physiology,1984,76:257-265.

[9]國家飼料質(zhì)量監(jiān)督檢測中心(北京).GB/T 21514-2008 飼料中脂肪酸含量的測定[S].北京：中國標準出版社，2008.

[10]Cabiddu A,Decandia M,Salis L,etal.Effect of species, cultivar and phonological stage of different forage legumes on herbage fatty acid composition[J].Italian Journal of Animal Science,2009,8(2):277-279.