趙麗麗,韓 磊,鮑文華

(1.牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院呼吸內(nèi)科,黑龍江 牡丹江157003;2.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科,黑龍江 佳木斯154003)

肺纖維化(pulmonary fibrosis,PF)是以慢性進(jìn)行性彌漫性肺間質(zhì)纖維化和肺生理功能障礙為特點(diǎn)的肺間質(zhì)性疾病,肺纖維化是危害當(dāng)代人類(lèi)健康的重要疾病,其發(fā)病率逐年增高,但發(fā)病機(jī)制尚不清楚。參芎葡萄糖注射液為復(fù)方制劑,其組分為:丹參相當(dāng)于丹參素20mg,鹽酸川芎嗪100mg。

1 材料與方法

1.1 材料

佳木斯大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供健康Wistar大鼠60只,博萊霉素(BLM-A5)購(gòu)于黑龍江省哈爾濱博萊制藥有限公司,尼康全自動(dòng)顯微照相系統(tǒng)。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組:佳木斯大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供健康Wistar大鼠60只,雌雄各半,體重 170～200g,先隨機(jī)分為兩組:對(duì)照組20只;模型組40只。分別于實(shí)驗(yàn)的第 7天、14天對(duì)照組、模型組各處死5只,通過(guò)對(duì)大鼠肺組織形態(tài)學(xué)、病理學(xué)觀察,評(píng)價(jià)模型是否成功,若成功進(jìn)一步將模型組剩余的30只大鼠分為模型組(單純肺纖維化組)10只、參芎葡萄糖治療肺纖維化組10只(簡(jiǎn)稱(chēng)參芎組),地塞米松治療肺纖維化組(簡(jiǎn)稱(chēng)地塞組)10只,分別于實(shí)驗(yàn)的第21、28天每組各處死5只大鼠。

1.2.2 模型制備:(1)大鼠肺纖維化模型制備:模型建立參見(jiàn)文獻(xiàn)[1]稍修改,使用速眠新II(0.8～1.2mL/kg)肌肉注射將大鼠麻醉后將其仰臥固定于鼠板上,剪去頸部毛,常規(guī)消毒皮膚后無(wú)菌操作下作長(zhǎng)約1cm的頸中切口,逐層分離暴露氣管,并用彎尖眼科鉗經(jīng)氣管下方穿過(guò),輕微抬起氣管,但不影響氣道通氣,在直視下用27G針頭穿刺兩軟骨環(huán)間,抬高鼠板頭端,使與桌面成30～35度角。保持針頭與氣道方向相同,并盡可能在氣道中央,一次性快速推注推注博萊霉素(5mg/kg體重)注射液0.2～0.3mL注入氣管。立即拔出針頭,豎立鼠板,保持大鼠直立體位,左右來(lái)回旋轉(zhuǎn)1～2min,使藥液盡可能到達(dá)兩側(cè)肺部。手術(shù)后,然后縫合皮膚,置其于動(dòng)物室喂養(yǎng)。(2)參芎葡萄糖治療肺纖維化組模型制備:在肺纖維化模型基礎(chǔ)上于實(shí)驗(yàn)的第15天開(kāi)始每日腹腔注射參芎葡萄糖注射液33.3mL/kg。(3)地塞米松治療肺纖維化組模型制備:在肺纖維化模型基礎(chǔ)上第15日開(kāi)始每日腹腔注射地塞米松注射液3mg/kg。(4)對(duì)照組:按照大鼠肺纖維化模型制備方法氣管內(nèi)注射0.9%生理鹽水注射液0.2～0.3mL。

1.3 病理學(xué)觀察

將各組處死的大鼠分離肺臟,注入10%(體積分?jǐn)?shù))福爾馬林液1.5mL保持30min后,投入Bouins液固定24h,常規(guī)脫水,石蠟包埋后,切片(3μ m),行蘇木精-伊紅(HE)和三色染色。光鏡下觀察有無(wú)炎癥及纖維化發(fā)生。以Szapiel等[2]的半定量法進(jìn)行評(píng)價(jià)。

2 結(jié)果

2.1 大鼠肺組織大體形態(tài)學(xué)觀察

對(duì)照組:肺組織呈粉紅色,表面光滑,質(zhì)地柔軟,未見(jiàn)出血點(diǎn),第 7、14、21、28天無(wú)明顯變化。模型組:造模后第 7天,雙肺呈暗紅色,充血水腫,表面有散在出血點(diǎn);第14天,雙肺出血水腫增多,部分融合成片;第21天,雙肺體積略縮小,顏色蒼白,硬度增加;第28天,雙肺體積縮小,少見(jiàn)陳舊性出血點(diǎn),表面凸凹不平,可見(jiàn)斑片狀,結(jié)節(jié)狀實(shí)變,顏色蒼白,硬度增加。參芎組:造模后第21天,雙肺充血水腫明顯減少,偶有部分融合成片,顏色略蒼白;第28天,雙肺體積略縮小,較正常肺組織硬度略增加,雙肺充血水腫明顯減少,肺組織色澤介于對(duì)照組和模型組之間,但與地塞米松組比較明顯紅潤(rùn)。地塞組:造模后第21天,雙肺充血水腫略減少,少量融合成片;第28天,雙肺體積略縮小,較正常肺組織硬度略增加,雙肺充血水腫明顯減少,肺組織形態(tài)及色澤略蒼白。

2.2 光鏡觀察

對(duì)照組:造模后第7天,僅有部分出現(xiàn)輕度充血水腫,肺組織含有少量膠原纖維,為細(xì)胞外基質(zhì)的主要組成部分,其他時(shí)相未出現(xiàn)明顯病理學(xué)變化。模型組:造模后第7天,肺泡縮小,肺泡壁增厚,毛細(xì)血管充血,肺泡腔內(nèi)出現(xiàn)炎癥細(xì)胞侵潤(rùn),肺泡間隔增寬;第14天,肺泡腔內(nèi)仍有大量炎癥細(xì)胞滲出,形成嚴(yán)重的肺泡炎,纖維組織合成增加;第21天,肺泡腔內(nèi)炎癥細(xì)胞略減少,肺泡壁增厚,纖維組織合成明顯增加;第28天,肺泡壁明顯增厚,肺纖維化程度加重,肺泡結(jié)構(gòu)破壞,肺泡腔消失。參芎組:實(shí)驗(yàn)第21天,肺泡腔內(nèi)炎癥細(xì)胞較模型組明顯減少,纖維組織合成較模型組第21天時(shí)明顯減少;第28天,肺泡腔內(nèi)仍有炎性細(xì)胞,肺泡壁增厚,肺纖維化程度較模型組28天時(shí)輕(圖1、2)。地塞組:第21天,肺泡腔內(nèi)炎癥細(xì)胞較模型組減少,纖維組織合成較肺纖維化組第21天時(shí)減少;第28天,肺泡腔內(nèi)仍有炎性細(xì)胞,肺泡結(jié)構(gòu)破壞較模型組21天時(shí)輕,少量肺纖維化形成(圖 3、4)。但參芎組、地塞組比較差異不大,沒(méi)有明顯區(qū)別。

圖1 參芎組28d HE×200

3 討論

肺纖維化是一種慢性炎癥性間質(zhì)性肺疾病,其主要病理特點(diǎn)是:早期彌漫性肺泡炎,后期大量成纖維細(xì)胞病理性增生及基質(zhì)膠原進(jìn)行性積聚,最終導(dǎo)致正常的肺組織結(jié)構(gòu)改變和功能喪失的一類(lèi)疾病。從起始癥狀到病情逐漸惡化,進(jìn)而導(dǎo)致呼吸功能不全而死亡一般在5年左右,病因尚不清楚,其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,治療困難。本試驗(yàn)對(duì)博來(lái)霉素導(dǎo)致大鼠肺纖維化進(jìn)行了28d的動(dòng)態(tài)觀察,包括整體病情、精神、飲食、活動(dòng)能力、一般反應(yīng)、體重的變化以及肺組織病理學(xué)觀察。發(fā)現(xiàn)博來(lái)霉素注入氣管后從第2天開(kāi)始,大鼠精神狀態(tài)、飲食、活動(dòng)能力開(kāi)始下降,從第7天開(kāi)始出現(xiàn)呼吸困難,脫毛,體重增長(zhǎng)緩慢,隨著時(shí)間的延長(zhǎng)出現(xiàn)體重減輕,呼吸困難逐漸加重,活動(dòng)能力逐漸下降。第15天給予藥物后,參芎組、地塞組大鼠呼吸困難癥狀與相同天數(shù)肺纖維化組對(duì)比略減弱,體重略高于肺纖維化組,且參芎組大鼠的平均體重略高于地塞組。丹參、川芎嗪長(zhǎng)期應(yīng)用未發(fā)現(xiàn)明顯的副作用,兩藥在祖國(guó)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域已做過(guò)很多研究和長(zhǎng)期廣泛應(yīng)用。兩者具有舒張血管、抑制血小板聚集作用而用于多種血管阻塞性疾病的治療[3,4]。朱建偉等觀察了丹參水煎液灌胃對(duì)平陽(yáng)霉素所致大鼠肺纖維化的影響。表明用藥組肺泡炎及膠原纖維較模型組明顯減少,丹參有阻止成纖維細(xì)胞向膠原纖維轉(zhuǎn)化的作用,確實(shí)可抗肺纖維化。研究表明,川芎嗪在增強(qiáng)肺纖維化患者機(jī)體抗病能力的同時(shí)對(duì)局部炎性滲出有促進(jìn)吸收作用,并對(duì)博萊霉素引起的脂質(zhì)過(guò)氧化損傷有明顯抑制作用。大量實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果也證實(shí)了川芎嗪對(duì)肺纖維大鼠具有保護(hù)作用。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)的研究,可以得出參芎對(duì)大鼠肺纖維化有一定的治療作用,本實(shí)驗(yàn)可為肺纖維化的治療提供一種新的途徑,但其機(jī)制尚不十分明確,有待進(jìn)一步繼續(xù)研究。

[1]鮑文華,石峰,刑繼強(qiáng).血紅素氧合酶-1/一氧化碳系統(tǒng)在肺纖維化大鼠中的表達(dá)及藥物干預(yù)[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥,2008,15(3):39 41

[2]Szapiel SV,Elson NA,Fulmur JD,et al.Bleomycin-inducedinterstitial pulmonary disease in the nude,athymic mouse[J].Am Rev Respir Dis,1979,120(6):893-897

[3]譚春雨,譚善忠,蔣 健,等.扶正化瘀方對(duì)肝纖維化大鼠肝臟明膠酶、TIMP-2和星狀細(xì)胞凋亡的影響[J].上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2003,17(4):40-44

[4]徐德斌,劉樹(shù)芬,張劭夫,等.川芎嗪對(duì)慢性肺源性心臟病急性加重期患者血小板活化能力的影響[J].臨床內(nèi)科雜志,1999,6(3):203