呂顯榮 張 闖 張 超 陳 普 陳清華

1.保山中醫(yī)藥高等專科學(xué)校，云南 保山 678000;2.云南省軍區(qū)門診部，云南 昆明 650051;3.云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650500

傣雅解護(hù)肝方是從傣醫(yī)臨床文獻(xiàn)資料中收集整理的民族有效驗方，該方是具有調(diào)節(jié)體內(nèi)“四塔、五蘊(yùn)”功能，解除人體毒素，保護(hù)臟腑功能的解毒方。傣雅解護(hù)肝方由傣百解、葛根、文尚海 (竹葉蘭)、十大功勞、定心藤、大黃藤、山楂、三七等組成。全方合用具有調(diào)補(bǔ)四塔、清火解毒，解酒保肝之作用。

1 實驗材料

1.1 動物 昆明種小鼠，清潔級，體重22～26g，雌雄各半，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院試驗動物研究所提供，合格證號:SCXK(川)2004—16。

1.2 藥品與試劑

1.2.1 藥品

“傣雅解護(hù)肝方”的所有藥材由云南中醫(yī)學(xué)院門診部提供 (其中的傣藥經(jīng)西雙版納傣醫(yī)院巖罕單副主任藥師鑒定);乙硫氨酸 (DL－E)為Sigma公司產(chǎn)品。

1.2.2 試劑

總膽固醇 (TC)試劑盒，批號:1008141，甘油三脂(TG)試劑盒，批號:1108111，均購自四川省邁克科技有限公司。

1.3 儀器

752 N紫外可見分光光度計，上海精密科學(xué)儀器有限公司;HH－6數(shù)顯恒溫水浴鍋，常州國華電器有限公司;FLUKO F6/10超細(xì)勻漿機(jī)，上海弗魯克流體機(jī)械制造有限公司;LG10－2.4A高速離心機(jī)，北京醫(yī)用離心機(jī)廠;HW－80A旋渦混合器，上海精科實業(yè)有限公司;電子天平sartorius AG，STARTORIUS。

2 方法

2.1 藥物的制備 參照文獻(xiàn)[1]，傣雅解護(hù)肝方高、低劑量藥物的制備:將方藥用水煎煮、濃縮成稠浸膏;傣雅解護(hù)肝方醇提取物的制備:將方藥水煎煮、濃縮、乙醇沉淀、上清液回收乙醇，濃縮成浸膏。分別置于－18℃冰箱冷藏備用，給藥前配至所需濃度。

陽性藥、傣雅解護(hù)肝方低劑量為臨床用量的等效量，高劑量為等效量的2倍，醇提組劑量為低劑量水提醇沉后的量。由于在做急性毒性試驗時，該方直接煎煮后濃縮至最大濃度仍然倍數(shù)較低，故采用水提醇沉法，以提高藥物在最大濃度時的倍數(shù)。同時，在此后的試驗中均加入一組經(jīng)水提醇沉后的醇提組，以觀察該組與未水提醇沉前療效是否一致，為該藥以后制劑的研究提供藥理實驗依據(jù)。

2.2 動物分組及給藥方法

參照文獻(xiàn)[2]，昆明種小白鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分成5組:正常對照組，模型對照組，傣雅解護(hù)肝方高、低劑量組，傣雅解護(hù)肝方醇提組。連續(xù)給藥7天，末次給藥后2小時，除正常對照組外均灌服1.25%的乙硫氨酸，250mg/kg，24h后處死，剖腹取肝臟，取各樣本同一部位肝組織200±10mg，用乙醇:丙酮 (1:1)混合抽提液2m l勻漿，測其總膽固醇 (TC)、甘油三脂 (TG)，進(jìn)行組間比較。剩余肝臟用10%甲醛固定，作病理學(xué)檢查。

2.3 生化指標(biāo)的檢測

檢測總膽固醇、甘油三脂，按試劑盒操作方法進(jìn)行測定。結(jié)果見表1

2.4 病理學(xué)檢查

取固定好的肝右葉組織，石蠟包埋、切片、染色、光鏡下觀察。結(jié)果見附圖1。

2.5 統(tǒng)計學(xué)處理 計量資料符合正態(tài)分布、方差齊者用t檢驗，方差不齊者用t'檢驗，不符合正態(tài)分布者用秩和檢驗。實驗數(shù)據(jù)均以±s表示。

3 結(jié)果

3.1 肝勻漿中總膽固醇、甘油三酯的變化見表1

結(jié)果表明:模型組LTG、LTC與正常組相比，均明顯升高 (p＜0.05);傣雅解護(hù)肝方高劑量、醇提組能明顯抑制模型小鼠LTC的升高 (p＜0.05);低劑量組與模型組比較，對LTC有降低作用趨勢，但差異無顯著性意義 (p＞0.05);各給藥組對LTG均作用不明顯。

表1 肝勻漿LTC、LTG的變化 (±s，n=12)

表1 肝勻漿LTC、LTG的變化 (±s，n=12)

注:與正常組比較，﹟P＜0.05;與模型組比較，﹡P＜0.05。

組別 劑量 (g/kg) LTG(mmol/L) LTC(mmol/L)0.677±0.260 1.033±0.113模型組 等容積 0.907±0.192# 1.180±0.187#高劑量組 4.4512 1.019±0.255 1.049±0.051*低劑量組 2.2256 1.009±0.437 1.055±0.110醇提組 1.04 0.929±0.359 1.054±0.053正常組 等容積*

3.2 肝臟病理形態(tài)學(xué)變化見附圖1

正常組小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝索排列規(guī)則，肝細(xì)胞大小均勻一致，胞核呈圓形，形態(tài)規(guī)則，多數(shù)肝細(xì)胞見一個細(xì)胞核，部分可見雙核，肝竇清晰可見。模型組小鼠肝臟組織光鏡下可見程度不等的彌漫性脂肪變性，胞漿內(nèi)出現(xiàn)大量脂肪空泡。傣雅解護(hù)肝方各劑量 (型)組與模型組比較能明顯減少脂肪空泡的數(shù)量，高劑量組僅存在少量的、散在的脂肪空泡。高劑量組作用較低劑量組、醇提組好，低劑量組與醇提組差異不明顯。

附圖1 傣雅解護(hù)肝方對乙硫氨酸所致小鼠脂肪肝的影響

4 討論

近年來，由于生活水平的提高、飲食結(jié)構(gòu)的改變等多種因素的影響，我國脂肪肝發(fā)病率有逐漸增加的趨勢，在歐美及我國許多地區(qū)脂肪肝成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病。脂肪肝是多種病因引起的肝細(xì)胞內(nèi)脂肪蓄積過多的一種病理狀態(tài)。正常時肝內(nèi)脂肪僅占肝重的3～5%，超過7%即為脂肪肝[3]。而脂肪肝是多種病因的結(jié)果，同時也作為病因使脂肪肝向脂肪性肝炎、脂肪性肝硬化發(fā)展[4]。因此，可以認(rèn)為脂肪肝是肝纖維化及肝硬化的前期病變[5]。乙硫氨酸引起肝臟病變主要是脂肪變性，乙硫氨酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)與甲硫氨酸相似，后者為體內(nèi)甲基轉(zhuǎn)換的供體，乙硫氨酸與之競爭，取代甲基而提供乙基，使肝臟蛋白質(zhì)合成發(fā)生障礙，生成的RNA和蛋白質(zhì)含有乙基而非甲基基團(tuán)。由于蛋白質(zhì)合成發(fā)生障礙，擔(dān)負(fù)將甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)出肝臟的載體脂蛋白的復(fù)合物生成減少，結(jié)果甘油三酯蓄積于肝臟，引起脂肪肝[6]。

傣族傳統(tǒng)醫(yī)藥學(xué)具有2500多年的悠久歷史，傣族人民在長期的生活和醫(yī)療實踐中創(chuàng)立獨(dú)具民族和地域特色的傣醫(yī)藥基礎(chǔ)理論，其中傣醫(yī)雅解理論和雅解 (解藥)是傣醫(yī)藥最具特色的理論和方藥之一。“雅解”為傣語，意譯為解藥，系指能解除體內(nèi)各種毒素，平衡和協(xié)調(diào)“四塔五蘊(yùn)”和臟腑功能的一類傣醫(yī)方藥的統(tǒng)稱。傣雅解護(hù)肝方是從傣醫(yī)臨床文獻(xiàn)資料中收集整理的民族有效驗方，該方是具有調(diào)節(jié)體內(nèi)“四塔、五蘊(yùn)”功能，解除人體毒素，保護(hù)臟腑功能的解毒方。其中傣百解、葛根，性涼，入風(fēng)、火、水、土塔，調(diào)四塔，解酒毒、熱毒和其他毒，護(hù)臟腑為主藥，文尚海 (竹葉蘭)，性涼，入水塔，具有清火解毒之功，助主藥加強(qiáng)解毒排毒之功能。十大功勞性寒涼，能清熱利膽退黃;定心藤味甜，性寒涼，入土、火、風(fēng)塔，具有清熱利尿、利膽退黃之功，二者相輔以增強(qiáng)清熱利濕退黃之效。大黃藤，性寒涼，入四塔，有調(diào)四塔，解百毒，消疔瘡之作用。毫命 (姜黃)味苦、微辣，性平偏熱，入水、土、風(fēng)塔。具活血止痛，清火解毒之功。管底 (三葉蔓荊)根味苦、性涼，入風(fēng)、水、土塔，清火解毒，治瘡癤腫痛。奶子藤、甘草，性涼入四塔，具有清火解毒，補(bǔ)氣活血之功。全方合用具有調(diào)補(bǔ)四塔、清火解毒，保肝之作用。

實驗結(jié)果表明傣雅解護(hù)肝方高劑量、醇提組能明顯抑制模型小鼠LTC的升高 (p＜0.05);肝組織病理學(xué)檢查結(jié)果亦表明，傣雅解護(hù)肝方各劑量 (型)組與模型組比較能明顯減少脂肪空泡的數(shù)量，縮小脂變的面積，實驗結(jié)果提示該方對乙硫氨酸引起的小鼠肝臟脂肪蓄積有一定的預(yù)防作用。能抑制肝脂中總膽固醇的升高，表明其對脂肪輸出障礙 (脂肪代謝紊亂型脂肪肝)有一定的療效。

“雅解”在傣族地區(qū)應(yīng)用廣泛，療效確切，獨(dú)具特色。但傣醫(yī)“雅解”方藥為什么能“解毒”?其“解毒”的作用機(jī)理是什么?目前尚不清楚，與其相關(guān)的科學(xué)研究尚未開展。本研究以傣醫(yī)基礎(chǔ)理論為指導(dǎo)，采用藥理學(xué)的研究方法，對“傣雅解護(hù)肝方”藥理作用研究，結(jié)果表明傣醫(yī)“解”內(nèi)涵是豐富的，包涵了調(diào)節(jié)代謝有害物質(zhì)所引起“四塔五蘊(yùn)”和臟腑功能紊亂的作用和解除導(dǎo)致人體發(fā)病的各種毒素和有害物質(zhì)兩方面的作用。其作用機(jī)制可能與其調(diào)節(jié)動物血脂等作用有關(guān)。

本研究對闡明傣醫(yī)“雅解”方藥“解毒”作用的科學(xué)性及“雅解”方藥防治疾病的作用機(jī)制，進(jìn)一步深化、豐富和完善傣醫(yī)學(xué)理論，指導(dǎo)臨床應(yīng)用是有益的探索。

[1]李儀奎.中藥藥理實驗方法學(xué)[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，1991:36－38.

[2]林青，張超，等.去脂軟肝丸對實驗性脂肪肝肝脂的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2002，9(5):33－34.

[3]曾民德.脂肪肝.中華消化雜志，1999，19(2):120－122.

[4]祁培宏.脂肪肝及其中醫(yī)治療進(jìn)展.中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，1999，9(1):61.

[5]范建高.脂肪肝與肝纖維化的關(guān)系及其機(jī)制.國外醫(yī)學(xué)·消化分冊，1997，17(2):92.

[6]李儀奎主編.中藥藥理實驗方法學(xué)[M].上海，上海科學(xué)技術(shù)社，1991:462.