李玉平，張 利，黎曉敏

（西南大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，重慶 400715）

金銀花為忍冬科植物忍冬、紅腺忍冬、山銀花或毛花枝忍冬的干燥花蕾，在神農(nóng)本草經(jīng)中被列為上品，其性寒，味甘，有清熱解毒、涼散風(fēng)熱之功效[1]。用于治療溫病發(fā)熱、風(fēng)熱感冒、癰腫癤毒、熱毒血痢、痔漏便血等[2]。金銀花富含揮發(fā)油類、有機(jī)酸類化合物及黃酮類、三菇類、環(huán)烯醚菇類、醇類、微量元素等活性成分，且具有廣譜抗菌、抗病毒、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫及解熱抗炎、利膽、保肝、降脂、抗生育、止血、抗?jié)兊榷喾N藥理作用[3]。

植物多糖是一類重要的生物活性物質(zhì)，具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、抗輻射、延緩衰老及抗感染等多種作用，且對(duì)機(jī)體的毒副作用小[4]。近年來(lái)研究較多的活性多糖有銀杏多糖、黃芪多糖、桑枝皮多糖、香菇多糖、雪茶多糖、枸杞多糖、靈芝多糖等[5－11]。以往對(duì)金銀花的研究主要集中在綠原酸、黃酮類等小分子物質(zhì)上，對(duì)于金銀花大分子物質(zhì)多糖的研究較少。

近年來(lái)，許多學(xué)者從金銀花中提取了多糖，并對(duì)金銀花多糖的結(jié)構(gòu)及其生物活性進(jìn)行了一系列的研究。本文針對(duì)近年來(lái)金銀花多糖的提取方法、分離純化、結(jié)構(gòu)分析以及生物學(xué)活性的研究成果加以概述，為金銀花資源的進(jìn)一步開發(fā)及其藥理作用提供理論依據(jù)。

1 金銀花多糖的提取

多糖提取采用的方法主要有熱水提取法、酸提取法、堿提取法、超聲波提取法、微波提取法和酶提取法等，近年來(lái)研究最多的提取方法是熱水提取法和超聲波提取法。

1.1 熱水提取法

熱水提取法是傳統(tǒng)提取多糖的一種方法，也是目前最常用的一種方法。該方法的基本原理是相似相溶原則，根據(jù)大多數(shù)多糖在熱水中溶解度較大的性質(zhì)進(jìn)行提取。該法具有設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、適用面廣等優(yōu)點(diǎn)，但存在操作時(shí)間長(zhǎng)、收率低、需多次反復(fù)操作、能耗較高等缺點(diǎn)。通過(guò)對(duì)金銀花多糖的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化后，可使金銀花多糖的提取率有所提高。

張玉等采用熱水提取金銀花粗多糖，氯仿、石油醚等除去脂溶性雜質(zhì)，Sevag法除蛋白，最后用乙醇將其從水提物中沉淀析出，分離、干燥得出金銀花多糖，試驗(yàn)中以金銀花多糖的提取率和含量為指標(biāo)，對(duì)浸提時(shí)間、浸提溫度、氯仿萃取次數(shù)和所用乙醇濃度等因素進(jìn)行單因素試驗(yàn)，采用正交試驗(yàn)法篩選出了最佳的提取條件，即50 g金銀花中加入水1.5 L，提取3次，浸提時(shí)間2 h，浸提溫度90℃，50mL氯仿萃取3次，乙醇濃度為80%，結(jié)果多糖提取率為4.78%，金銀花多糖相對(duì)百分含量為78.10%[12]。鄧慶華用正交試驗(yàn)法優(yōu)化金銀花多糖水提醇沉法的提取工藝，通過(guò)對(duì)浸提溫度、時(shí)間、料液比和浸提次數(shù)4個(gè)因素進(jìn)行單因素試驗(yàn)，用苯酚－硫酸法測(cè)定多糖含量，考察了這些因素對(duì)金銀花多糖提取率的影響。結(jié)果顯示，最佳提取條件溫度為90℃、料液比1∶10、浸提2次、每次60min，得出金銀花粗多糖樣品中糖的含量為24%[13]。劉光海等對(duì)金銀花1 kg采用熱水法提取，4倍量的無(wú)水乙醇沉淀來(lái)制備金銀花粗多糖，用Sevag試劑法除去蛋白來(lái)獲得相對(duì)純的精制多糖，苯酚－硫酸法測(cè)定多糖含量，結(jié)果為提取粗多糖251.4 g，獲得精制粗多糖39.4 g，而且精制后金銀花粗多糖純度大大提高，多糖的含量由61.27%升至80.54%[14]。

1.2 超聲波提取法

超聲波提取法是目前應(yīng)用較多的方法。超聲波是一種高頻機(jī)械波，頻率為15～60 kHZ，超聲波能產(chǎn)生空化作用、熱效應(yīng)、機(jī)械作用等，這些作用促進(jìn)了有效成分的溶解，加快了有效成分進(jìn)入介質(zhì)，并與介質(zhì)充分混合，可加速提取過(guò)程，提高提取率。研究表明，超聲法具有快速安全、簡(jiǎn)單、成本低、不被破壞等優(yōu)點(diǎn)，與傳統(tǒng)的熱水浸提法相比，多糖提取率高，提取時(shí)間短，從而提高了產(chǎn)品數(shù)量和質(zhì)量。

楊凡等采用傳統(tǒng)水煎煮法和超聲波法提取金銀花多糖，試驗(yàn)中分別對(duì)兩種提取方法的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，同時(shí)也將超聲波預(yù)處理與傳統(tǒng)水煎煮法結(jié)合起來(lái)提取多糖，進(jìn)而比較各種方法的多糖提取率，試驗(yàn)結(jié)果表明，出水提取法在溫度為90℃，料液比為1∶15，蒸餾水提取4次，提取時(shí)間為2.5 h時(shí)可以獲得最佳提取效果，而超聲波法在料液比為1∶15，超聲時(shí)間為120 min時(shí)，多糖提取率為16.8%，超聲波預(yù)處理與傳統(tǒng)水煎煮法相結(jié)合最佳試驗(yàn)條件為超聲預(yù)處理時(shí)間9min，料液比1∶1.5，溫度90℃，提取時(shí)間45min。試驗(yàn)結(jié)果表明，將超聲預(yù)處理與傳統(tǒng)水煎煮法相結(jié)合可以將金銀花多糖提取率提高43.9%，并縮短提取時(shí)間50%[15]。趙鵬等采用響應(yīng)面法優(yōu)化金銀花多糖超聲提取工藝，研究了超聲時(shí)間、液料比、提取次數(shù)和提取溫度對(duì)多糖產(chǎn)出率的影響，最終確定金銀花多糖提取工藝的最佳條件為溫度75℃、時(shí)間43min、液料比為23∶1、提取2次，得出多糖提取率達(dá)到3.263%，進(jìn)而表明超聲法與傳統(tǒng)水提取法相比，最大的特點(diǎn)是提取時(shí)間縮短約2/3，所得金銀花多糖提取率也有了一定程度的提高[16]。

2 金銀花多糖的分離純化

多糖的純化就是指去除粗多糖中的雜質(zhì)而獲得單一多糖組分。一般將獲得的粗多糖除去共存雜質(zhì)、蛋白質(zhì)等非多糖組分，再對(duì)多糖組分進(jìn)行分級(jí)。多糖分離純化的方法很多，常用有分步沉淀法、陰離子交換柱層析法、凝膠色譜法等。對(duì)于金銀花多糖的分離純化、組成分析的研究報(bào)道比較少。

李爾春對(duì)提取的金銀花粗多糖去蛋白、經(jīng)DEAE—52離子交換纖維素柱色譜和SePhedexG－100凝膠柱色譜分離出FL—C1，F(xiàn)L—D1，F(xiàn)L—D2 3種組分，采用SePhadexG－200凝膠柱色譜和高效凝膠滲透色譜法對(duì)所分離組分純度進(jìn)行純度鑒定，表明FL—C1，F(xiàn)L—D1兩種組分均為單一組分[17]。殷洪梅等采用Sevag法、酶法和酶－Sevag法對(duì)金銀花多糖提取物進(jìn)行脫蛋白處理，進(jìn)行脫蛋白方法的研究，結(jié)果顯示Sevag法、酶法、酶－Sevag法的蛋白脫除率分別為85.72%、73.28%、84.50%，而多糖的損失率是56.57%、31.22%、29.35%，結(jié)論是酶－Sevag法去蛋白效果最好[18]。

3 金銀花多糖的組成和結(jié)構(gòu)分析

鄧慶華在用正交試驗(yàn)法優(yōu)化金銀花多糖水提取沉淀的提取工藝的過(guò)程中，通過(guò)氣相色譜法測(cè)定了樣品中的單糖組成，結(jié)果表明，金銀花待測(cè)樣含有鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖及葡萄糖等單糖。對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行了分子量分布的觀察，顯示分子量分布范圍比較寬[13]。李爾春對(duì)金銀花多糖分離純化后，采用氣相色譜分析和紅外光譜分析對(duì)所分離組分進(jìn)行單糖組成分析，結(jié)果表明FL—C1由葡萄糖（Glu）、半乳糖（Gal）、核糖（Rib）、阿拉伯糖（Ara）、木糖（Xyl）、果糖（Fru）組成。FL—D1由葡萄糖（Glu）、半乳糖（Gal）、木糖（Xyl）、阿拉伯糖（Ara）、鼠李糖（Rha）組成。FL—D2由葡萄糖（Glu）、半乳糖（Gal）、甘露糖（Man）、核糖（Rib）、阿拉伯糖（Ara）、木糖（xyl）、果糖（Fru）組成[17]。

4 金銀花多糖的生物學(xué)活性

多糖是生物體內(nèi)一類重要的信息分子，具有增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗突變、降血脂、降血糖、抗病毒、抗凝血、抗?jié)?、抗氧化等多種生物活性。雖然金銀花多糖研究較少，但作為多糖類物質(zhì)，具有與其他多糖相似的生物活性。

林雄平等利用水提法從金銀花和苦丁茶中提取水溶性多糖，用圓形紙片法對(duì)7種常見的食品腐敗菌（即枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、普通變形桿菌、啤酒酵母、桔青霉、黑曲霉）進(jìn)行抑菌活性研究，并測(cè)定其最小抑菌濃度。結(jié)果顯示，金銀花多糖提取物對(duì)金黃色葡萄球菌和啤酒酵母的抑菌圈直徑分別達(dá)18.2和16.0mm，最小抑菌濃度（MIC）都在 5～30mg·mL－1。表明金銀花和苦丁茶多糖提取物具有一定程度的抗細(xì)菌與抗真菌活性，且抗細(xì)菌活性比抗真菌活性強(qiáng)[19]。李爾春通過(guò)金銀花多糖在體外和體內(nèi)抗氧化作用來(lái)研究其抗氧化的生物活性，結(jié)果顯示，金銀花粗多糖的總還原力隨著濃度的增加逐步升高，并與多糖濃度有很好的相關(guān)性，同時(shí)金銀花多糖對(duì)PMS—NADH—NBT系統(tǒng)產(chǎn)生的超氧自由基有顯著的抑制作用。對(duì)小鼠體內(nèi)抗氧化作用的研究則通過(guò)測(cè)定血清或組織中的超氧化物歧化酶（SOD）活性、過(guò)氧化氫酶（CAT）活性、丙二醛（MDA）含量、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH－Px）活性等指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)多糖的抗氧化活性，結(jié)果表明，金銀花多糖提取物可以顯著提高受試小鼠血清、肝臟及腦組織中SOD、CAT、GSH－Px的活性，顯著降低血清、肝臟、腦組織內(nèi)MDA含量，說(shuō)明金銀花多糖提取物有顯著的抗氧化活性[17]。殷洪梅等采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法優(yōu)選金銀花多糖的最佳提取工藝，利用Sevag－酶法除去蛋白，并將得到的多糖對(duì)小鼠進(jìn)行遲發(fā)型超敏反應(yīng)，對(duì)環(huán)磷酸腺胺致免疫低下組進(jìn)行血清溶血素試驗(yàn)和臟器指數(shù)試驗(yàn)，進(jìn)而研究多糖的免疫活性。試驗(yàn)結(jié)果表明，金銀花多糖具有明顯的免疫增強(qiáng)作用，且藥效和劑量相關(guān)[20]。

5 小 結(jié)

隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，多糖的各種生物活性已得到廣泛關(guān)注，其生物活性強(qiáng)、毒副作用小，且具有抑菌、抗氧化和免疫增強(qiáng)的作用，因此對(duì)金銀花多糖進(jìn)行深入研究具有十分重要的意義和開發(fā)應(yīng)用價(jià)值，近年來(lái)對(duì)金銀花多糖的研究還存在很多不足，主要表現(xiàn)在用于提取金銀花多糖的方法較多，但是所獲多糖含量不太高，需要選擇其他的提取方法，對(duì)現(xiàn)用提取方法進(jìn)行不斷改善，對(duì)各方法的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化篩選，進(jìn)而提高多糖產(chǎn)出率；含量測(cè)定方法大多為測(cè)定總糖的比色法，不能如實(shí)地反映多糖含量，需要進(jìn)一步矯正；用現(xiàn)有提取方法所得到的金銀花多糖多為粗品，含較多雜質(zhì)，仍需進(jìn)一步純化，這就要對(duì)分級(jí)純化的方法進(jìn)行研究；金銀花多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)還不明確，構(gòu)效關(guān)系尚不清楚，有待進(jìn)一步研究；藥理活性研究也主要停留在行為學(xué)、器官和組織水平，活性機(jī)理不清楚，需要深入研究。因此，金銀花多糖提取方法的篩選和純化工藝、多糖的構(gòu)效關(guān)系以及生物活性的深入研究應(yīng)該作為今后的主要研究方向。

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