李玉平，張 利，黎曉敏

（西南大學(xué) 動物科技學(xué)院，重慶 400715）

金銀花為忍冬科植物忍冬、紅腺忍冬、山銀花或毛花枝忍冬的干燥花蕾，在神農(nóng)本草經(jīng)中被列為上品，其性寒，味甘，有清熱解毒、涼散風(fēng)熱之功效[1]。用于治療溫病發(fā)熱、風(fēng)熱感冒、癰腫癤毒、熱毒血痢、痔漏便血等[2]。金銀花富含揮發(fā)油類、有機酸類化合物及黃酮類、三菇類、環(huán)烯醚菇類、醇類、微量元素等活性成分，且具有廣譜抗菌、抗病毒、抗腫瘤、增強免疫及解熱抗炎、利膽、保肝、降脂、抗生育、止血、抗?jié)兊榷喾N藥理作用[3]。

植物多糖是一類重要的生物活性物質(zhì)，具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、抗輻射、延緩衰老及抗感染等多種作用，且對機體的毒副作用小[4]。近年來研究較多的活性多糖有銀杏多糖、黃芪多糖、桑枝皮多糖、香菇多糖、雪茶多糖、枸杞多糖、靈芝多糖等[5－11]。以往對金銀花的研究主要集中在綠原酸、黃酮類等小分子物質(zhì)上，對于金銀花大分子物質(zhì)多糖的研究較少。

近年來，許多學(xué)者從金銀花中提取了多糖，并對金銀花多糖的結(jié)構(gòu)及其生物活性進行了一系列的研究。本文針對近年來金銀花多糖的提取方法、分離純化、結(jié)構(gòu)分析以及生物學(xué)活性的研究成果加以概述，為金銀花資源的進一步開發(fā)及其藥理作用提供理論依據(jù)。

1 金銀花多糖的提取

多糖提取采用的方法主要有熱水提取法、酸提取法、堿提取法、超聲波提取法、微波提取法和酶提取法等，近年來研究最多的提取方法是熱水提取法和超聲波提取法。

1.1 熱水提取法

熱水提取法是傳統(tǒng)提取多糖的一種方法，也是目前最常用的一種方法。該方法的基本原理是相似相溶原則，根據(jù)大多數(shù)多糖在熱水中溶解度較大的性質(zhì)進行提取。該法具有設(shè)備簡單、操作方便、適用面廣等優(yōu)點，但存在操作時間長、收率低、需多次反復(fù)操作、能耗較高等缺點。通過對金銀花多糖的提取工藝進行優(yōu)化后，可使金銀花多糖的提取率有所提高。

張玉等采用熱水提取金銀花粗多糖，氯仿、石油醚等除去脂溶性雜質(zhì)，Sevag法除蛋白，最后用乙醇將其從水提物中沉淀析出，分離、干燥得出金銀花多糖，試驗中以金銀花多糖的提取率和含量為指標(biāo)，對浸提時間、浸提溫度、氯仿萃取次數(shù)和所用乙醇濃度等因素進行單因素試驗，采用正交試驗法篩選出了最佳的提取條件，即50 g金銀花中加入水1.5 L，提取3次，浸提時間2 h，浸提溫度90℃，50mL氯仿萃取3次，乙醇濃度為80%，結(jié)果多糖提取率為4.78%，金銀花多糖相對百分含量為78.10%[12]。鄧慶華用正交試驗法優(yōu)化金銀花多糖水提醇沉法的提取工藝，通過對浸提溫度、時間、料液比和浸提次數(shù)4個因素進行單因素試驗，用苯酚－硫酸法測定多糖含量，考察了這些因素對金銀花多糖提取率的影響。結(jié)果顯示，最佳提取條件溫度為90℃、料液比1∶10、浸提2次、每次60min，得出金銀花粗多糖樣品中糖的含量為24%[13]。劉光海等對金銀花1 kg采用熱水法提取，4倍量的無水乙醇沉淀來制備金銀花粗多糖，用Sevag試劑法除去蛋白來獲得相對純的精制多糖，苯酚－硫酸法測定多糖含量，結(jié)果為提取粗多糖251.4 g，獲得精制粗多糖39.4 g，而且精制后金銀花粗多糖純度大大提高，多糖的含量由61.27%升至80.54%[14]。

1.2 超聲波提取法

超聲波提取法是目前應(yīng)用較多的方法。超聲波是一種高頻機械波，頻率為15～60 kHZ，超聲波能產(chǎn)生空化作用、熱效應(yīng)、機械作用等，這些作用促進了有效成分的溶解，加快了有效成分進入介質(zhì)，并與介質(zhì)充分混合，可加速提取過程，提高提取率。研究表明，超聲法具有快速安全、簡單、成本低、不被破壞等優(yōu)點，與傳統(tǒng)的熱水浸提法相比，多糖提取率高，提取時間短，從而提高了產(chǎn)品數(shù)量和質(zhì)量。

楊凡等采用傳統(tǒng)水煎煮法和超聲波法提取金銀花多糖，試驗中分別對兩種提取方法的提取工藝進行優(yōu)化，同時也將超聲波預(yù)處理與傳統(tǒng)水煎煮法結(jié)合起來提取多糖，進而比較各種方法的多糖提取率，試驗結(jié)果表明，出水提取法在溫度為90℃，料液比為1∶15，蒸餾水提取4次，提取時間為2.5 h時可以獲得最佳提取效果，而超聲波法在料液比為1∶15，超聲時間為120 min時，多糖提取率為16.8%，超聲波預(yù)處理與傳統(tǒng)水煎煮法相結(jié)合最佳試驗條件為超聲預(yù)處理時間9min，料液比1∶1.5，溫度90℃，提取時間45min。試驗結(jié)果表明，將超聲預(yù)處理與傳統(tǒng)水煎煮法相結(jié)合可以將金銀花多糖提取率提高43.9%，并縮短提取時間50%[15]。趙鵬等采用響應(yīng)面法優(yōu)化金銀花多糖超聲提取工藝，研究了超聲時間、液料比、提取次數(shù)和提取溫度對多糖產(chǎn)出率的影響，最終確定金銀花多糖提取工藝的最佳條件為溫度75℃、時間43min、液料比為23∶1、提取2次，得出多糖提取率達到3.263%，進而表明超聲法與傳統(tǒng)水提取法相比，最大的特點是提取時間縮短約2/3，所得金銀花多糖提取率也有了一定程度的提高[16]。

2 金銀花多糖的分離純化

多糖的純化就是指去除粗多糖中的雜質(zhì)而獲得單一多糖組分。一般將獲得的粗多糖除去共存雜質(zhì)、蛋白質(zhì)等非多糖組分，再對多糖組分進行分級。多糖分離純化的方法很多，常用有分步沉淀法、陰離子交換柱層析法、凝膠色譜法等。對于金銀花多糖的分離純化、組成分析的研究報道比較少。

李爾春對提取的金銀花粗多糖去蛋白、經(jīng)DEAE—52離子交換纖維素柱色譜和SePhedexG－100凝膠柱色譜分離出FL—C1，F(xiàn)L—D1，F(xiàn)L—D2 3種組分，采用SePhadexG－200凝膠柱色譜和高效凝膠滲透色譜法對所分離組分純度進行純度鑒定，表明FL—C1，F(xiàn)L—D1兩種組分均為單一組分[17]。殷洪梅等采用Sevag法、酶法和酶－Sevag法對金銀花多糖提取物進行脫蛋白處理，進行脫蛋白方法的研究，結(jié)果顯示Sevag法、酶法、酶－Sevag法的蛋白脫除率分別為85.72%、73.28%、84.50%，而多糖的損失率是56.57%、31.22%、29.35%，結(jié)論是酶－Sevag法去蛋白效果最好[18]。

3 金銀花多糖的組成和結(jié)構(gòu)分析

鄧慶華在用正交試驗法優(yōu)化金銀花多糖水提取沉淀的提取工藝的過程中，通過氣相色譜法測定了樣品中的單糖組成，結(jié)果表明，金銀花待測樣含有鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖及葡萄糖等單糖。對待測樣品進行了分子量分布的觀察，顯示分子量分布范圍比較寬[13]。李爾春對金銀花多糖分離純化后，采用氣相色譜分析和紅外光譜分析對所分離組分進行單糖組成分析，結(jié)果表明FL—C1由葡萄糖（Glu）、半乳糖（Gal）、核糖（Rib）、阿拉伯糖（Ara）、木糖（Xyl）、果糖（Fru）組成。FL—D1由葡萄糖（Glu）、半乳糖（Gal）、木糖（Xyl）、阿拉伯糖（Ara）、鼠李糖（Rha）組成。FL—D2由葡萄糖（Glu）、半乳糖（Gal）、甘露糖（Man）、核糖（Rib）、阿拉伯糖（Ara）、木糖（xyl）、果糖（Fru）組成[17]。

4 金銀花多糖的生物學(xué)活性

多糖是生物體內(nèi)一類重要的信息分子，具有增強免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗突變、降血脂、降血糖、抗病毒、抗凝血、抗?jié)儭⒖寡趸榷喾N生物活性。雖然金銀花多糖研究較少，但作為多糖類物質(zhì)，具有與其他多糖相似的生物活性。

林雄平等利用水提法從金銀花和苦丁茶中提取水溶性多糖，用圓形紙片法對7種常見的食品腐敗菌（即枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、普通變形桿菌、啤酒酵母、桔青霉、黑曲霉）進行抑菌活性研究，并測定其最小抑菌濃度。結(jié)果顯示，金銀花多糖提取物對金黃色葡萄球菌和啤酒酵母的抑菌圈直徑分別達18.2和16.0mm，最小抑菌濃度（MIC）都在 5～30mg·mL－1。表明金銀花和苦丁茶多糖提取物具有一定程度的抗細菌與抗真菌活性，且抗細菌活性比抗真菌活性強[19]。李爾春通過金銀花多糖在體外和體內(nèi)抗氧化作用來研究其抗氧化的生物活性，結(jié)果顯示，金銀花粗多糖的總還原力隨著濃度的增加逐步升高，并與多糖濃度有很好的相關(guān)性，同時金銀花多糖對PMS—NADH—NBT系統(tǒng)產(chǎn)生的超氧自由基有顯著的抑制作用。對小鼠體內(nèi)抗氧化作用的研究則通過測定血清或組織中的超氧化物歧化酶（SOD）活性、過氧化氫酶（CAT）活性、丙二醛（MDA）含量、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH－Px）活性等指標(biāo)來評價多糖的抗氧化活性，結(jié)果表明，金銀花多糖提取物可以顯著提高受試小鼠血清、肝臟及腦組織中SOD、CAT、GSH－Px的活性，顯著降低血清、肝臟、腦組織內(nèi)MDA含量，說明金銀花多糖提取物有顯著的抗氧化活性[17]。殷洪梅等采用正交試驗設(shè)計方法優(yōu)選金銀花多糖的最佳提取工藝，利用Sevag－酶法除去蛋白，并將得到的多糖對小鼠進行遲發(fā)型超敏反應(yīng)，對環(huán)磷酸腺胺致免疫低下組進行血清溶血素試驗和臟器指數(shù)試驗，進而研究多糖的免疫活性。試驗結(jié)果表明，金銀花多糖具有明顯的免疫增強作用，且藥效和劑量相關(guān)[20]。

5 小 結(jié)

隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，多糖的各種生物活性已得到廣泛關(guān)注，其生物活性強、毒副作用小，且具有抑菌、抗氧化和免疫增強的作用，因此對金銀花多糖進行深入研究具有十分重要的意義和開發(fā)應(yīng)用價值，近年來對金銀花多糖的研究還存在很多不足，主要表現(xiàn)在用于提取金銀花多糖的方法較多，但是所獲多糖含量不太高，需要選擇其他的提取方法，對現(xiàn)用提取方法進行不斷改善，對各方法的提取工藝進行優(yōu)化篩選，進而提高多糖產(chǎn)出率；含量測定方法大多為測定總糖的比色法，不能如實地反映多糖含量，需要進一步矯正；用現(xiàn)有提取方法所得到的金銀花多糖多為粗品，含較多雜質(zhì)，仍需進一步純化，這就要對分級純化的方法進行研究；金銀花多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)還不明確，構(gòu)效關(guān)系尚不清楚，有待進一步研究；藥理活性研究也主要停留在行為學(xué)、器官和組織水平，活性機理不清楚，需要深入研究。因此，金銀花多糖提取方法的篩選和純化工藝、多糖的構(gòu)效關(guān)系以及生物活性的深入研究應(yīng)該作為今后的主要研究方向。

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