肖琦，夏繼飛，何家惠

（1. 江蘇省農業(yè)科學院獸醫(yī)研究所，江蘇南京210014；2. 南京農業(yè)大學，江蘇南京210095；3. 江蘇省農業(yè)科學院國家獸用生物制品工程技術研究中心，江蘇南京210014）

下期預告：我國的養(yǎng)鴨業(yè)具有悠久的歷史。進入20世紀80年代，飼養(yǎng)量平均每年以5%～8%的速度遞增。2004年我國肉鴨的出欄量超過24億只，鴨肉產量約530萬噸，占世界肉鴨總產量的70%左右，成年蛋鴨的存欄量達到3億～4億只，鴨蛋年產量達到553萬噸，約占我國禽蛋總產量的20.3%。隨著養(yǎng)鴨數量的增加，疫病也越來越多。為此下期“禽病防制”欄目將以“鴨病”做主題策劃，歡迎各界同行來稿，分享自己的經驗和心得。

傳染性喉氣管炎（ILT）是由傳染性喉氣管炎病毒引起的一種急性、接觸性上部呼吸道傳染病，以呼吸困難、咳出血樣粘液、喉部和氣管黏膜水腫出血并導致糜爛為主要特征，可致感染雞的死亡和產蛋率下降，各種日齡和品種的雞均可感染，May等1925年在美國首次報道本病，現已遍及世界許多養(yǎng)雞地區(qū)。本病在雞群內傳播快、發(fā)病急，發(fā)病率較高，在我國較多地區(qū)發(fā)生和流行，嚴重危害養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展。

一、病原

雞ILTV屬于皰疹病毒Ⅰ型，是一種有囊膜、二十面體對稱的雙股DNA病毒，具有皰疹病毒的核衣殼及立體形態(tài)的典型形態(tài)。

ILTV在形態(tài)上分為未成熟型和成熟型兩種。成熟的病毒粒子呈球型，其直徑為195～250 nm。未成熟型病毒主要在胞核空泡和胞漿空泡內，直徑約為100 nm。病毒主要存在于病雞的氣管及其滲出物中，肝、脾和血液中較少見。對雞和其它常用試驗動物的紅細胞無凝集特性。傳染性喉氣管炎不同的病毒株的致病力和抗原性均有差異，被認為僅有一個血清型，由于病毒株毒力上的差異，對雞的致病力不同，給本病的防控帶來一定的困難。

本病毒對脂溶劑、熱以及各種消毒劑均敏感。對外界環(huán)境的抵抗力不強。乙醚處理24 h失去傳染性；55℃時10～15 min滅活，未經冷藏的雞氣管組織中的病毒37℃,44 h、絨毛尿囊膜中的病毒25℃,5 h均可被破壞；凍干或-20℃～-60℃下可長期保存毒力。獸醫(yī)上常用的消毒藥如3%來蘇兒、3%甲醛或1%堿液1 min 可殺死。

二、流行病學

在自然條件下，本病主要侵害雞，各種年齡及品種的雞均可感染。但以成年雞癥狀最為典型。病雞、康復后的帶毒雞與無癥狀的帶毒雞是主要的傳染源。本病經呼吸道及眼傳染，也可經消化道感染。呼吸道分泌物污染的飼料及用具可成為傳播媒介。因為被感染的雞胚在出殼前死亡，所以種蛋蛋內及蛋殼上的病毒不能傳播。由于康復后的帶毒雞與無癥狀帶毒雞的存在，本病難以撲滅，并可呈地區(qū)性流行。

本病一年四季均可發(fā)生，秋冬寒冷季節(jié)多發(fā)。雞群擁擠、通風不良、維生素缺少等，都可促進本病發(fā)生和傳播。本病一旦傳入雞群，則可迅速傳開，感染率可達90%～100%。致死率波動較大，一般為5%～70%，平均在10%～20%，最急性型一般為50%～70%，急性型一般在10%～30%，慢性死亡率一般為5%。更為嚴重的是，本病治愈后，病愈雞可以長期散毒，據報道，約有2%的病愈雞，可帶毒2年之久。

三、臨床癥狀

本病自然感染的潛伏期為6 ～ 12 d，人工氣管接種后 2 ～ 4 d雞只即可發(fā)病。潛伏期的長短與病毒株的毒力有關。

發(fā)病初期，常有數只病雞突然死亡?；茧u初期有鼻液，半透明狀，眼流淚，伴有結膜炎，其后表現為特征的呼吸道癥狀，呼吸時發(fā)出濕性啰音，咳嗽，有喘鳴音，病雞蹲伏地面或棲架上，每次吸氣時頭和頸部向前向上、張口、盡力吸氣的姿勢，有喘鳴叫音。嚴重病例，高度呼吸困難，痙攣咳嗽，可咳出帶血的粘液，可污染喙角、顏面及頭部羽毛。在雞舍墻壁、墊草、雞籠、雞背羽毛或鄰近雞身上沾有血痕。若分泌物不能咳出堵住時，病雞可窒息死亡。病雞食欲減少或消失，迅速消瘦，雞冠發(fā)紫，有時還排出綠色稀糞。最后多因衰竭死亡。產蛋雞的產量迅速減少（可達35%）或停止，康復后1～2個月才能恢復。

最急性病例病雞可于24 h左右死亡，多數5～10 d或更長，不死者多經8～10 d恢復，有的可成為帶毒雞。

有些毒力較弱的毒株引起發(fā)病時，流行比較緩和，發(fā)病率低，癥狀較輕。病雞只是無精打采，生長緩慢，產蛋減少，有結膜炎、眶下竇炎、鼻炎及氣管炎等癥狀出現。病程較長，長的可達1個月。死亡率一般較低，在2%左右，大部分病雞可以耐過。若有細菌繼發(fā)感染和應激因素存在時，死亡率則會增加。

四、病理變化

本病的主要典型病變在氣管和喉部組織。病初黏膜充血、腫脹、高度潮紅，有粘液，進而黏膜發(fā)生變性、出血和壞死，氣管中含血粘液或血凝塊，氣管管腔變窄，病程2～3 d后有黃白色纖維素性干酪樣假膜。病雞由于劇烈咳嗽和痙攣性呼吸，可以咳出分泌物和混血凝塊以及脫落的上皮組織，病情嚴重時，炎癥也可波及到支氣管、肺和氣囊等部，甚至上行至鼻腔和眶下竇。病雞的肺一般正?；蛴蟹纬溲靶^(qū)域的炎癥變化。

患病雞多為急性死亡，通常無明顯病理變化。少數慢性死亡的雞只，剖檢可見鼻孔中蓄積粘性滲出物，喉頭、氣管內有卡他性或卡他出血性滲出物，滲出物呈血凝塊狀堵塞喉腔和氣管，有的有呈灰黃色纖維素性干酪樣物附著于喉頭周圍，堵塞喉腔，特別是堵塞喉裂部；鼻腔和眶下竇黏膜發(fā)生卡他性或纖維素性炎，充血、腫脹，散布小點狀出血點；氣管上部的氣管環(huán)出血；卵巢異常，卵泡變形、變軟、充血、出血。少數雞胃、肝、腸、心等實質器官有瘀血現象。

病理組織學檢查時，氣管上皮細胞混濁腫脹，細胞水腫，纖毛脫落，氣管黏膜和黏膜下層可見淋巴細胞、組織細胞和漿細胞浸潤，黏膜細胞變性。病毒感染后12 h時，在氣管、喉頭黏膜上皮細胞核內可見嗜酸性包涵體，出現臨床癥狀48 h內包涵體最多。病毒接種雞胚組織細胞12 h時后可見到核內包涵體。

五、實驗室診斷

雞傳染性喉氣管炎的臨診癥狀和病理變化與某些呼吸道傳染病，如雞新城疫、傳染性支氣管炎有些相似，易發(fā)生誤診。因此，對本病應進行幾方面的檢查，綜合診斷。

1.現場診斷。本病常突然發(fā)生，傳播快，成年雞發(fā)生最多；發(fā)病率高，死亡率因飼養(yǎng)條件不同而差別較大。臨床癥狀較為典型：張口呼吸、喘氣、有啰音，咳嗽時可咳出帶血的粘液，有頭向前向上吸氣姿勢。剖檢死雞時，可見氣管呈卡他性和出血性炎癥病變，以后者為特征，氣管內還可見到數量不等的血凝塊。

2.病毒分離、鑒定?？梢詫⒑?、氣管及其滲出物磨碎，用生理鹽水1:5～1:10稀釋，離心后取上清液加適量青霉素、鏈霉素處理后，在室溫下作用 30 min，取 0.1 ～ 0.2 ml接種9～12日齡雞胚絨毛尿囊膜上或尿囊腔，48 h后，絨毛尿囊膜上可見到痘斑樣壞死病灶，在周圍細胞內可檢出核內包涵體。用雞胚絨毛尿囊膜的痘斑制成乳劑離心后，取其上清液與傳染性喉氣管炎的抗血清做瓊脂擴散試驗，24 h后可出現明顯的沉淀線。病毒接種在雞胚腎細胞單層培養(yǎng)，24 h后出現細胞病變，可檢出多核細胞（合胞體）、核內包涵體和壞死病變。在病的初期（1～5 d），用氣管和眼結膜組織，經固定、姬姆薩氏染色，可見上皮細胞核內包涵體。據報道，在60份樣品中包涵體檢出率為57%，病毒分離率為72%。

3.動物接種實驗診斷。病雞的氣管分泌物或組織懸液，經喉頭或鼻腔或氣管接種易感雞和雉雞，2～5 d可出現典型的傳染性喉氣管炎癥狀和病變。

傳染性喉氣管炎的診斷應區(qū)別于傳染性支氣管炎、支原體病、傳染性鼻炎、雞新城疫、黏膜型雞痘、維生素A缺乏等。感染傳染性喉氣管炎的病雞呼吸困難程度比其他幾種疾病嚴重，常常痙攣性咳嗽，咳出帶血的粘液懸掛于雞籠或墻壁上，而其它幾種患病雞無咳血現象。

六、防控

雞傳染性喉氣管炎病屬于急性呼吸道傳染病，發(fā)病急，死亡快。發(fā)病后，要做到早發(fā)現，早治療，但目前尚無特異的治療方法，因此，采用加強飼養(yǎng)管理、注重疫苗防疫等綜合性防控措施，效果較好。

（一） 飼養(yǎng)管理對飼養(yǎng)管理用具及雞舍定期消毒，注意雞舍通風與保暖，提供雞群適宜的生長環(huán)境、溫度、濕度和飼養(yǎng)密度。滿足雞體營養(yǎng)需要，提供適宜的蛋白質、能量、維生素、礦物質、氨基酸，提高雞體的免疫能力。對來歷不明的雞要隔離觀察，可放數只易感雞與其同養(yǎng)，觀察2周，不發(fā)病，證明不帶毒，這時方可混群飼養(yǎng)。

雞傳染性喉氣管炎病毒同其他皰疹病毒科的病毒一樣，康復帶毒雞與病雞都是嚴重的傳染源，臨床治愈的雞可長期帶毒并不斷向外界環(huán)境排毒，因此病愈雞不可和易感雞混群飼養(yǎng)，最好將病愈雞淘汰。雞場一旦發(fā)生雞傳染性喉氣管炎病疫情，全場所有雞都要按發(fā)病的輕重嚴格進行分群隔離。發(fā)生過雞傳染性喉氣管炎病的雞場，務必要把該疾病的預防列入正規(guī)的免疫程序。

雞自然感染傳染性喉氣管炎病毒后可產生堅強的免疫力，一般可獲得至少1年以上甚至終生免疫。易感雞接種疫苗后可獲得半年至1年不等的保護力。母源抗體可通過卵傳給子代，但其保護作用甚差，也不干擾雞的免疫接種。

已發(fā)病的雞場，對發(fā)病雞舍尚未出現癥狀的雞和其他雞舍的育成雞及產蛋雞用ILT弱毒疫苗，采用滴鼻、點眼（也有用飲水）的方法進行免疫接種。常用的免疫程序是：蛋雞和種雞第一次免疫在35日齡～45日齡，第二次免疫在90日齡。發(fā)病雞場的糞便要及時清除，死雞送遠處深埋，并對全場雞舍、所有用具及周圍環(huán)境用消毒劑徹底消毒。但不能用自然強毒接種，它不僅可使本病疫源長期存在，還可能散布其他疫病。

（二） 疫苗防疫目前國內外預防傳染性喉氣管炎通常采用的疫苗都是弱毒疫苗，但所有的弱毒疫苗都存在以下缺點：（1）疫苗毒力普遍偏強，接種后反應大，接種后會使機體的細胞免疫和體液免疫功能降低，易導致機體發(fā)病。（2）與強毒株一樣，弱毒疫苗株也能引起潛伏感染，潛伏感染的雞將終生帶毒。（3）疫苗病毒可以由接種雞傳染給非接種雞，在雞與雞，雞群與雞群之間的傳播過程中毒力返強，從而成為新的感染源，嚴重者可引起本病的暴發(fā)。所以，養(yǎng)雞場在沒有傳染性喉氣管炎存在時，盡量不要使用疫苗，也不要將未接種疫苗的雞和已接種疫苗的雞混養(yǎng)在一起。

鑒于常規(guī)疫苗的這些特點，研制新型安全且有效的基因工程疫苗用于本病的防控十分必要，目前國內外常見的基因工程疫苗有如下幾種。

1.亞單位疫苗。York等研究發(fā)現亞單位疫苗能刺激機體產生強烈的免疫應答和免疫保護，對ILTV強毒攻擊的保護率高達83%，但是由于其制備和免疫成本較高至今仍未廣泛應用。

2.病毒活載體重組疫苗。目前國內已開發(fā)出商品化的病毒活載體重組疫苗，該疫苗將ILTV gB基因插入雞痘病毒載體中獲得rFPVILTVgB重組雞痘病毒，該疫苗可以對SPF雞和商品雞提供100%的免疫保護，并已完成重組病毒的遺傳穩(wěn)定性評價、疫苗的安全性試驗與最小免疫劑量測定、同居感染試驗、免疫持續(xù)期試驗、雞痘母源抗體對重組雞痘疫苗免疫效果的影響等試驗，是理想的活載體重組疫苗候選株，于2005年獲得中華人民共和國新獸藥注冊證書，并商品化。

3.基因工程缺失疫苗。ILTV基因組中含有大量的病毒復制非必須基因，如TK、dUTPase、UL0基因等，國內外有研究將替代基因插入到這些基因位點中，構建基因工程缺失疫苗。其中，有些研究獲得的疫苗可以減輕患病雞的癥狀，有些可以保護雞群免受病毒致死性的攻擊，也有些可以保護雞抵抗ILTV和其他病原，這些都可以作為基因工程疫苗的候選株。特別是UL10基因缺失和UL0基因缺失的ILTV突變病毒，有望成為預防本病的有效疫苗。

4.DNA疫苗。一直以來，DNA疫苗在機體內表達量較低，單獨使用不足以產生有效的免疫保護效果，極大的限制了DNA疫苗誘導產生免疫應答的程度。因此，目前DNA疫苗應用的關鍵問題是如何增強其免疫效果，提高誘導機體免疫應答效率。

孟松樹等構建了ILTV的gB、gD、gC真核表達質粒，并采用CPG佐劑進行了聯(lián)合基因免疫的研究。試驗發(fā)現，ILTV DNA疫苗能有效刺激機體產生特異性體液免疫和細胞介導免疫，保護機體抵抗ILTV強毒的攻擊；CPG DNA佐劑對ILTV DNA疫苗具有免疫增強作用。

邵攀峰等選用重組真核表達質粒pIL-18為ILTV重組DNA疫苗pgB的免疫佐劑，在ILT的免疫過程中，pIL-18可以明顯的增強DNA疫苗pgB的誘導細胞免疫作用，有效地提高了雞傳染性性喉氣管炎病毒DNA疫苗的免疫保護力。