亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        骨髓間充質干細胞移植對大鼠腦缺血再灌注損傷的修復作用

        2011-04-12 22:53:37許長春郭云霞許科鵬
        實用醫(yī)藥雜志 2011年2期
        關鍵詞:神經細胞腦缺血骨髓

        許長春,郭云霞,許科鵬

        腦卒中已成為人類致死、致殘的重要原因之一。其發(fā)病率有逐年上升的趨勢。其中以缺血性卒中最為常見。傳統(tǒng)觀念認為腦缺血引起缺血區(qū)神經元不可逆死亡。梗死區(qū)周邊的成熟神經元不能再生來彌補死亡的神經元,因此導致腦缺血預后不佳。最近的研究表明,骨髓間充質干細胞(MSCs)在某些內在機制和微循環(huán)影響下具有類似胚胎干細胞的高度分化能力,具有取材簡單,來源豐富,可從患者自身獲得而不存在組織相容性的問題,治療時可避免長期應用免疫抑制劑對患者的損害,這為細胞移植治療腦缺血損傷提供了可能。

        1 材料與方法

        1.1 動物及分組 成年雄性SD大鼠(上海實驗動物中心提供)34只,質量270~320 g,模型制作過程中淘汰4只,30只腦缺血模型大鼠隨機分為MSCs移植組,缺血對照組各15只。

        1.2 MSCs的分離培養(yǎng)及鑒定 采用文獻[1]方法,麻醉狀態(tài)下取SD大鼠雙側股骨和脛骨,用DHank’s液沖洗骨髓腔收取骨髓,以密度為1.082 g/L的percoll淋巴細胞分離液密度梯度離心法分離出骨髓單個核細胞,移到含10%FBS的DMEM-LG培養(yǎng)基中,結合貼壁法以1.0×104個/ml的細胞密度接種培養(yǎng),按 1∶2進行擴增傳代(1~3代)。選取生長良好的原代及1、2、3代細胞,用0.25%胰蛋白酶室溫消化、離心,收集培養(yǎng)好的大鼠MSCs,將Hoeschst 33342加入大鼠MSCs培養(yǎng)基混懸液中,終質量濃度為50 μg/ml,于37℃培養(yǎng)箱中避光共同培養(yǎng)24 h,然后用 D-Hank’s液洗滌 3次以去除未結合的Hoeschst33342,并收集已結合Hoeschst33342的細胞,用不含胎牛血液的細胞培養(yǎng)液DMEM-LG將細胞制成細胞懸液。

        1.2.1 大鼠腦缺血再灌注(MCAO)模型制作 參照文獻[2]的方法,用直徑0.32 nm的尼龍線插入大鼠右側頸動脈,深度為20~22 mm,阻斷右側大腦中動脈,120 min后將尼龍線拔出。

        1.2.2 MSCs移植 建立MCAO模型24 h后移植組于頸內動脈給予MSCS,懸浮液200 μl,細胞數為2×106個,對照組頸內動脈給與MSCs移植組同等體積的生理鹽水作為對照。

        1.2.3 神經損害嚴重程度評分(NSS) 參照文獻[3]的方法,分別于移植后1、7、14、21 d對MSCs移植組及缺血對照組大鼠進行NSS,主要是運動,感覺功能,平衡能力及生理反射;總分為18分,正常為0分,分值越高其神經損害越嚴重。

        1.2.4 免疫組化驗測 于MSCs移植后1、7、14、21 d各組隨機處死2只大鼠,4%多聚甲醛500 ml左心室灌注后,斷頭取腦,置4%多聚甲醛后固定24 h,冠狀位切取以缺血區(qū)域為中心的包括側腦室室管膜下區(qū)、基底節(jié)區(qū)的厚度2 mm的腦組織標本,石蠟包埋,連續(xù)切片,片厚5 μm,進行HE染色后鏡檢。

        1.2.5 統(tǒng)計學方法 檢測數據先求出組內均數±標準差,組間比較采用t檢驗。

        2 結 果

        2.1 MSCs的鑒定方法與分化 將所培養(yǎng)細胞經流式細胞儀檢測。發(fā)現MSCs表面標記物CD29、CD44呈陽性表達,而CD14、CD34呈陰性表達,說明試驗中分離培養(yǎng)的細胞非造血干細胞而為MSCs。經免疫組化分析,各代細胞90%表達Nestin陽性進一步證實是MSCs(胞質中出現大量的標黃色顆粒物)。

        2.2 光鏡下觀察結果 各組均可見到明顯梗死灶,位于基底節(jié)、皮質下白質和皮層,缺血區(qū)神經細胞明顯減少,可見神經細胞變性、壞死呈胞體皺縮,核固縮碎裂溶解,胞漿濃縮紅染,神經纖維輸送,間質水腫明顯,炎癥細胞浸潤。根據標記發(fā)現MSCs主要存在于腦皮質、皮質下等處。通過標記發(fā)現MSCs移植后1d在海馬、皮質及小腦等部位部分MSCs細胞即可表達神經元標記物神經元特異性核蛋白,且隨著移植時間的延長,標記的細胞數目增多。

        2.3 NSS變化 MSCs移植后,1、7 d NSS與對照組比較無顯著性差異 (7.8±1.4 vs 7.9±1.1,6.8±1.2 vs 6.9±1.2;P>0.05), 但 14、21 d 移植組 NSS 均明顯低于對照組 (5.0±1.2 vs 6.2±1.3,4.6±1.4 vs 5.9±1.0;P<0.05)。

        3 討 論

        骨髓間充質干細胞是存在于骨髓中的一種非造血干細胞,具有多向分化潛能,可以分化為多種造血以外的組織細胞,特別是中胚層和外胚層來源的組織細胞。缺血性腦卒中現有的溶栓抗凝等治療手段仍存在很大的局限性,不能根本改善腦梗死的預后。新近的研究表明,骨髓間充質干細胞可在一定的條件分化為神經元樣細胞、星型膠質細胞等[4]。從而為神經系統(tǒng)疾病的治療提供新的手段。動物實驗證明神經干細胞移植可以在一定程度上修復腦缺血損傷,使神經功能得到明顯改善,這說明神經干細胞移植是治療神經功能損傷的有效手段,但由于神經干細胞數量很少,體外培養(yǎng)很難擴增,并且存在移植變異排斥等問題,從而使其應用受到很大的限制。而MSCs從骨髓中分離得到取材容易,且對健康無害,體外分離培養(yǎng)能快速擴增,可以自體移植而且不存在免疫排斥反應等問題。因此,MSCs在神經系統(tǒng)疾病的治療中占有越來越重要的地位。

        本實驗中,筆者用MSCs頸內動脈移植治療大鼠缺血性損傷,大鼠的神經功能恢復明顯優(yōu)于對照組,MSCs移植組神經細胞變性、壞死數量明顯減少,炎癥細胞減少,水腫減輕,以上情況提供了行為學上和病理學上的實驗依據,說明以MSCs治療缺血性腦損傷是切實有效的。

        一般認為MSCs對腦缺血再灌注損傷的保護主要有以下幾種機制:①作為干細胞,MSCs可能在腦組織中分化為神經元樣細胞和神經膠質樣細胞,替代發(fā)生壞死和凋亡的神經細胞,從而起到腦保護作用,但是分化的比率較低,分別為1%和8%,如此少量的分化細胞能發(fā)揮多大的神經替代功能有待進一步的研究;②MSCs激活了存在于皮質下區(qū)的神經干細胞(NSC)[5],被激活的內源性NSC進一步定向分化為神經細胞起到腦保護作用;③MSCs進入腦組織內部可分泌和(或)促進神經細胞分泌神經營養(yǎng)因子、血管內皮生長因子、神經生長因子和干細胞生長因子等[6],這一機制已得到公認。

        [1]Friedenstein AJ,Gorskaja JF,Kulagina NN.Fibroblast precursors in normal and irradiated mouse hematopoietic organs[J].Exploration of Haematol,1976,4(5):267-274.

        [2]Chen J,Sanberg PR,Li Y,et al.Intravenous administration of human umbilical cord blood reduces behavioral deficits after stroke in rats[J].Stroke,2001,32:2682.

        [3]Chen J,Li Y,Wang L,et al.Therapeutic benefit of intravenous administration of bone marrow stronal cells after cerebral ischemia in rats[J].Stroke,2001,32:1005-1011.

        [4]ZHANG Hua-biao,XU Yu-ming,ZHANG Su-ming.The experimental study on rat mesenchymal stem cells induced to differentiate into nerve-like cells in vitro[J]Chinese Journal of Neuroimmunology and Neurology,2003,10(4):276.

        [5]Sato K,Iwai M,Nagano I,et al.Temporal and spacial changes of BrdU immunoreactivity in amygdala kindling development.Neurol Res,2002,24:593.

        [6]Chen X,Li Y,Wang L,et al.Ischemic rat brain extracts induce human marrow stromal cell growth factor production.Neuropathology,2002,22:275.

        猜你喜歡
        神經細胞腦缺血骨髓
        Ancient stone tools were found
        熊果酸減輕Aβ25-35誘導的神經細胞氧化應激和細胞凋亡
        中成藥(2021年5期)2021-07-21 08:39:04
        宮頸癌術后調強放療中骨髓抑制與骨髓照射劑量體積的關系
        贊美骨髓
        文苑(2018年18期)2018-11-08 11:12:42
        骨髓穿刺涂片聯合骨髓活檢切片在骨髓增生異常綜合征診斷中的應用
        原花青素對腦缺血再灌注損傷后腸道功能的保護作用
        血必凈對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用及其機制
        細胞外組蛋白與腦缺血再灌注損傷關系的初探
        操控神經細胞“零件”可抹去記憶
        Hoechst33342/PI雙染法和TUNEL染色技術檢測神經細胞凋亡的對比研究
        五月天精品视频在线观看| 熟女中文字幕一区二区三区| 国产成人精品亚洲日本在线观看 | 按摩师玩弄少妇到高潮av| 久久久久亚洲av片无码| 久久国产精品二国产精品| 久久精品国产只有精品96| 久久国产精品色av免费看| 国色天香中文字幕在线视频| 欧美aa大片免费观看视频| 92精品国产自产在线观看48页| 国产视频在线观看一区二区三区| 在线播放五十路熟妇| 久久精品国内一区二区三区| 欧美中出在线| 亚洲岛国一区二区三区| 精品国产av一区二区三区| 亚洲AV日韩AV永久无码电影| 亚洲av熟女天堂系列| 国产精品狼人久久影院软件介绍| 爆乳熟妇一区二区三区霸乳| 狠狠色狠狠色综合| 少妇极品熟妇人妻高清| 欧美黑人xxxx性高清版| 少妇人妻av一区二区三区| 国产精品久久久爽爽爽麻豆色哟哟| 夫妇交换刺激做爰视频| 99riav精品国产| 开心五月骚婷婷综合网| 巨人精品福利官方导航| 国产在视频线精品视频www666| 国产精品国产三级在线专区| 性高朝久久久久久久3小时| 色伦专区97中文字幕| 久久91精品国产91久| 在线播放国产自拍av| 亚洲国产精品ⅴa在线观看| 久久精品免费无码区| 亚洲免费精品一区二区| 日韩精品成人无码专区免费| 久久麻豆精品国产99国产精|