尹 嶺，張笑明，李 莉，趙秀梅

(解放軍總醫(yī)院醫(yī)學(xué)信息情報研究所，北京 100853)

茶油對兔血脂及動脈粥樣硬化的影響

尹 嶺，張笑明，李 莉，趙秀梅

(解放軍總醫(yī)院醫(yī)學(xué)信息情報研究所，北京 100853)

目的：研究茶油對血脂水平和動脈粥樣硬化(AS)形成的影響。方法：32只新西蘭大白兔，隨機(jī)分為4組：對照組(飼喂普通飼料)和3個實驗油組(分別飼喂添加茶油、花生油或橄欖油的高脂飼料)，各飼喂兩個月。在實驗前、實驗1個月和實驗2個月時檢測血脂。實驗結(jié)束時，處死動物，取主動脈、心臟和肝臟標(biāo)本，做病理組織切片，觀察組織形態(tài)學(xué)的變化，用圖像分析軟件測量血管粥樣變化的程度。結(jié)果：喂高脂飼料的3組大白兔的血脂水平均明顯高于普通飼料對照組(P＜0.01)。茶油組甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)均較花生油組低，但統(tǒng)計學(xué)均無顯著性差異(P＞0.05)。喂高脂飼料實驗組的大白兔主動脈、冠狀動脈都有不同程度的動脈硬化?；ㄉ徒M主動脈血管內(nèi)膜增生最為明顯，形成的動脈粥樣斑塊最大，主動脈狹窄最嚴(yán)重處占到血管的35%～70%，而茶油組和橄欖油組主動脈血管內(nèi)膜增生較花生油組低，動脈硬化程度輕，主動脈狹窄最嚴(yán)重處只占整個血管的5%～15%?；ㄉ徒M的肝細(xì)胞空泡樣改變明顯，呈中度脂肪肝病理改變；而茶油組和橄欖油組肝細(xì)胞空泡樣改變很輕。結(jié)論：茶油對高脂飼料誘發(fā)的肝脂肪變性和動脈粥樣硬化的形成有抑制作用，其作用效果與橄欖油相比無顯著差異。

茶油；脂肪肝；動脈粥樣硬化；血脂

動脈粥樣硬化是心腦血管病的危險因素之一。在動脈粥樣硬化的致病因素中，飲食營養(yǎng)因素具有重要的作用，越來越多的證據(jù)表明膳食脂肪與動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展有著非常密切的關(guān)系[1]。地中海地區(qū)居民攝入大量富含單不飽和脂肪酸(MUFAs)的橄欖油，其血膽固醇(TC)水平和冠心病(CHD)的發(fā)病率較歐美國家低。就此開展了大量研究[2]，結(jié)果表明橄欖油可降低正常人和病人血清中甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的趨勢。目前，世界衛(wèi)生組織已將橄欖油推薦為對人體心血管健康有益的保健型食用油[3]。有學(xué)者對我國自然資源中特有的茶油進(jìn)行了檢測[4-5]，發(fā)現(xiàn)茶油與橄欖油的脂肪酸組成非常相近，不飽和脂肪酸含量高。本實驗的目的是研究國產(chǎn)茶油對血脂代謝的影響和動脈硬化的干預(yù)作用，探討茶油是否具有比其他食用油更好的保健功能，為茶油的開發(fā)利用提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

新西蘭大白兔32只，體質(zhì)量2.5～3.0kg，由解放軍總醫(yī)院動物中心提供。

茶油由綠冠公司提供，橄欖油(歐麗薇蘭牌，意大利進(jìn)口)和花生油從商場自購。

普通飼料(玉米面35%、麥皮15%、草粉25%、豆麩18%、石粉1%、磷酸氫鈣1.5%、酵母粉1%、食鹽0.5%、植物油1%、維生素和微量元素2%) 北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司。

高脂飼料：在每100kg普通飼料中加入0.8kg膽固醇、2.5kg蛋黃粉，同時每1kg飼料內(nèi)分別加3種實驗用油(茶油、花生油、橄欖油)16.47mL。

膽固醇(TC)試劑盒、甘油三酯(TG)試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)試劑盒 瑞士羅氏公司；無水乙醇、甲醛 北京化學(xué)試劑公司；蘇木素、伊紅等均為分析純。

HIACHI 7600全自動生化分析儀 日本日立公司；TDL-5臺式離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠；Olympus BH-2落射顯微鏡 日本Olympus公司；LEITZ-1516石臘切片機(jī)；CCD彩色顯微攝像、錄像系統(tǒng)、Image-Pro圖像分析軟件 美國Media Cybernetics公司。

1.2 實驗分組

32只大白兔適應(yīng)性飼養(yǎng)10d后隨機(jī)分4組即茶油組、花生油組、橄欖油組和對照組，每組8只。茶油組、花生油組、橄欖油組分別飼喂添加各種實驗油的高脂飼料；對照組飼喂普通飼料，實驗持續(xù)飼喂兩個月。

1.3 測試指標(biāo)

1)實驗期間每周稱體質(zhì)量一次并觀察兔的一般狀態(tài)。

2)在實驗前、實驗1個月和實驗2個月時從耳靜脈抽血用比色法檢測血脂水平(由解放軍總醫(yī)院生化科測定)，采血前12h禁食，不禁水。

3)組織病理學(xué)觀察：實驗結(jié)束后處死大白兔，取主動脈、心和肝等臟器，置入10%福爾馬林固定，經(jīng)脫水、透明、包埋制作病理組織切片，HE染色，觀察組織形態(tài)的變化，用圖像分析系統(tǒng)測量血管粥樣硬化斑塊占整個血管腔的百分比。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

實驗數(shù)據(jù)以(x±s)表示，用t檢驗進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 一般狀態(tài)和體質(zhì)量的變化

表1 實驗各組大白兔體質(zhì)量的變化(x±s，n=8)Table 1 Change in body weight of 4 rabbit groups (x±s，n=8) kg

實驗前，各組兔的活動正常，皮毛光澤，反應(yīng)靈活。飼喂1個月后花生油組有兩只兔精神狀態(tài)差、倒毛，皮毛失去光澤。由表1可知，各組兔的體質(zhì)量隨喂養(yǎng)時間的延長不斷增長，以花生油組大白兔的體質(zhì)量增加較快，但各組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

2.2 血脂水平的變化

表2 實驗前各組兔血清血脂水平(x±s，n=8)Table 2 Change in serum lipid in rabbits before experiment (x±s，n=8)

如表2所示，喂養(yǎng)高脂飼料前，實驗各組兔血清TG、TC、LDL-C和HDL-C的水平非常接近，與對照組比較無差異。

如表3 所示，喂養(yǎng)高脂飼料1個月后，3種食用油組兔血清的TG、TC、LDL-C和HDL-C的水平均較對照組增高，與對照組比較有極顯著差異(P＜0.01)。表明食用3種油高脂飼料1個月后，高脂飼料組的大白兔都造成了高血脂癥。其中花生油組的血脂水平最高，橄欖油組的TG、TC、LDL-C水平較低，與花生油組比較有顯著性差異(P＜0.05)，兩組間HDL-C比較差異不顯著。茶油組的血脂水平也較花生油組低，但無顯著性差異(P＞0.05)。

表3 食用高脂飼料1個月兔血脂水平的變化(x±s，n=8)Table 3 Change in serum lipid in rabbits after 1-month treatment (x±s，n=8)

表4 食用高脂飼料兩個月兔血脂水平的變化(x±s，n=8)Table 4 Change in serum lipid in rabbits after 2-month treatment (x±s，n=8)

如表4 所示，隨著飼養(yǎng)時間的延長，喂高脂飼料兩個月后，3種實驗油組兔的血脂水平繼續(xù)增高，與對照組比較有極顯著差異(P＜0.01)。表明血脂增高與食用油脂飼料的時間有正相關(guān)性的趨勢。花生油組的血脂水平高于橄欖油組和茶油組，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，3個實驗油組間無顯著性差異(P＞0.05)。但也可從結(jié)果的數(shù)據(jù)看出，橄欖油和茶油有預(yù)防血脂升高的趨勢。

2.3 肝臟脂肪的變性

圖1 肝臟組織形態(tài)學(xué)變化(HE, ×100)Fig.1 Morphological change of liver (HE, ×100)

由HE染色可見，3組高脂飼料的大白兔肝臟都有不同程度脂肪變性(圖1a～c)，表現(xiàn)為肝細(xì)胞腫脹，肝細(xì)胞胞漿內(nèi)充滿大小不等的脂滴，空泡樣改變，肝竇數(shù)量減少。其中以花生油組的肝細(xì)胞脂肪變性最為明顯，呈中度脂肪肝改變；茶油組和橄欖油組肝細(xì)胞脂肪變性很輕，為輕度脂肪肝表現(xiàn)。正常組肝小葉中心靜脈周圍肝細(xì)胞索排列正常，肝小葉分辨清晰，呈放射狀排列，胞漿胞核著色均勻，肝細(xì)胞無脂肪變性(圖1d)。

2.4 動脈血管的形態(tài)學(xué)變化

圖2 主動脈血管的形態(tài)學(xué)變化(HE, ×100)Fig.2 Morphological change of aorta (HE, ×100)

圖3 冠狀動脈的形態(tài)學(xué)變化(HE, ×100)Fig.3 Morphological change of coronary artery (HE, ×100)

病理組織切片的形態(tài)學(xué)觀察，3組高脂飼料動物與正常對照組比較，主動脈、冠狀動脈都有不同程度的動脈硬化(圖2～3)。表現(xiàn)為血管內(nèi)膜增厚，泡沫細(xì)胞多，有不同程度的血管狹窄。其中以花生油組動脈硬化較為明顯，主動脈血管狹窄最重，內(nèi)膜增生、形成的粥樣硬化斑塊最大的占血管腔面積35%～70%；茶油組主動脈血管內(nèi)膜增生較花生油組低，動脈硬化程度輕，主動脈狹窄最嚴(yán)重處只占血管腔5%～15%；橄欖油組與茶油組類似，主動脈狹窄最嚴(yán)重處只占整個血管的4%～16%。組織學(xué)差異主要表現(xiàn)在主動脈和冠狀動脈，且內(nèi)膜增生程度隨喂養(yǎng)時間延長而增大。

3 討 論

膳食中大量的脂肪攝取是導(dǎo)致高脂血癥、引起動脈粥樣硬化的主要因素。通過改善膳食脂肪結(jié)構(gòu)，減少膽固醇及飽和脂肪酸的攝入，增加不飽和脂肪酸的攝入，可以預(yù)防高血脂癥的形成，減少冠心病的發(fā)生率和死亡率。

已有研究[5]證實我國特產(chǎn)植物油——茶油和橄欖油的脂肪酸組成非常接近。因此本實驗采用在常規(guī)制作兔血管粥樣硬化的飼料中添加3種食用油(茶油、花生油和橄欖油)喂養(yǎng)大白兔制備高血脂及動脈粥樣硬化的模型，研究3種實驗油對脂質(zhì)代謝及動脈粥樣硬化形成的影響。結(jié)果喂養(yǎng)高脂飼料1個月后，3組高脂飼料喂養(yǎng)的兔血清TG、TC和LDL-C的水平均較對照組增高，與對照組比較有極顯著差異(P＜0.01)。表明食用3種高脂飼料一個月后，實驗各組的大白兔都造成了高血脂癥。3種實驗油組間比較，茶油組和橄欖油組的血脂水平低于花生油組，但無統(tǒng)計學(xué)意義。病理組織形態(tài)學(xué)觀察，可見3組高脂飼料大白兔主動脈、冠狀動脈都有不同程度的動脈硬化?；ㄉ徒M主動脈血管內(nèi)膜增生明顯，主動脈狹窄最嚴(yán)重處占到血管腔的35%～70%，而茶油組和橄欖油組主動脈血管內(nèi)膜增生較花生油組低，動脈硬化程度輕，主動脈狹窄最嚴(yán)重處只占整個血管腔的5%～15%?；ㄉ徒M的肝細(xì)胞空泡樣改變明顯，呈中度脂肪肝病理改變；而茶油組和橄欖油組肝細(xì)胞空泡樣改變很輕。

營養(yǎng)學(xué)家把茶油與其他幾種食用油菜籽油、花生油進(jìn)行了動物和人體實驗，發(fā)現(xiàn)它們對血脂的作用并不一致，茶油組顯示出了選擇性的降脂作用[6-9]。結(jié)果顯示LDL-C值菜籽油組增加明顯、花生油組次之，而茶油組最低。60d時HDL-C數(shù)值中茶油組最高，高于菜籽油組，花生油組最低。有學(xué)者[10-11]還研究了豬油、茶油及氧化茶油對小鼠抗氧化能力和血脂代謝的影響。結(jié)果豬油組TG、TC、LDL-C均顯著高于茶油組，HDL-C顯著降低。

本實驗中食用油作用時間較短，動物例數(shù)也少，結(jié)果只顯示出茶油和橄欖油有減緩血脂升高的趨勢。但從病理組織形態(tài)學(xué)觀察證實，茶油對高脂飼料誘發(fā)的肝脂肪變性和動脈粥樣斑塊的形成有抑制作用，其作用效果與橄欖油相同，明顯好于花生油。說明茶油可作為我國人民的主要保健性食用油，值得推廣和應(yīng)用。

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Effect of Tea-seed Oil on Serum Lipid Level and Atherosclerosis Formation in Rabbits

YIN Ling，ZHANG Xiao-ming，LI Li，ZHAO Xiu-mei
(Institute of Medical Information, Chinese PLA General Hospital, Beijing 100853, China)

Objective: To investigate the effect of tea-seed oil on serum lipid metabolism and atherosclerosis (AS) formation. Methods: Totally 32 New Zealand rabbits were randomly divided into four groups. The rabbits in the control group were fed with normal diet and those in other three groups were fed with three kinds of high cholesterol diets containing tea-seed oil, peanut oil and olive oil, respectively, for 2 consecutive months. The serum lipid in each group was measured at 0, 1 and 2 months. At the end of the experiment, all animals were sacrificed and the aorta, heart and liver were harvested for histological examination. The morphological change was observed and the atherosclerosis status was measured by using Image-pro plus software. Results: The serum lipid levels in three experiment groups were significantly higher (P＜0.01) than that in the control group. The levels of triglycerides (TG), cholesterol (TC) and low-density lipoprotein (LDL) in the tea-seed oil group were lower than those in the peanut oil group, but there was no significant difference (P＞0.05) between these indices. Morphological observations revealed atherosclerosis formation in coronary artery and aorta in the three experiment groups. The aortic intimal hyperplasia and atherosclerotic plaque in the peanut oil group were larger than those in the tea-seed oil and olive oil group. The aortic stenosis rate in the peanut oil group was 35%-70%, whereas only 5%-15% in the tea-seed oil group and olive oil group. In addition, the most serious hepatic steatosis was observed in the peanut oil group. The vacuolar change in liver cells clearly showed a pathological feature of moderate fatty liver, but a slight change in pathological feature observed for the tea oil and olive oil groups. Conclusion: Tea-seed oil can inhibit therosclerosis and hepatic steatosis induced by high fat diet, which displays the same pharmaceutical effect as olive oil.

tea-seed oil；fatty liver；atherosclerosis；serum lipid

R151

A

1002-6630(2011)07-0289-04

2010-07-29

國家林業(yè)局重點(diǎn)科研課題(2007-11)

尹嶺(1955—)，男，主任醫(yī)師，教授，博士，研究方向為神經(jīng)病學(xué)。E-mail：mei212829@163.com