劉小青 李 玉 徐光輝 (連云港市第一人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，江蘇 連云港 222000)

乳腺癌是中國(guó)婦女近年來(lái)增長(zhǎng)幅度最大的惡性腫瘤之一。Ki67是較為肯定的核增殖標(biāo)志，其表達(dá)、變化可反映腫瘤的增殖活性〔1〕。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在腫瘤組織血管形成中發(fā)揮重要作用，與腫瘤生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，本研究用SP免疫組化法檢測(cè)乳腺癌組織及乳腺良性病變中Ki67及VEGF的表達(dá)，探討其與臨床因素之間的相關(guān)性及臨床意義。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本及主要試劑 所有49例標(biāo)本均來(lái)自本院2007年5月至2008年9月住院擬手術(shù)的病人，入院前均無(wú)放化療治療史，并取得患者同意簽署組織樣本使用同意書。其中Ⅰ期13例，Ⅱ期24例，Ⅲ期12例，并設(shè)乳腺良性疾病對(duì)照20例。Ki67、VEGF一抗及SP試劑盒均購(gòu)自Ⅰnvitrogen公司;

1.2 方法 石蠟切片常規(guī)脫蠟，高壓煮沸2 min進(jìn)行抗原熱修復(fù)處理，3%H2O2孵育5 min以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性，PBS沖洗 3 min/3次，加入一抗 Ki67、VEGF，4℃過(guò)夜，PBS沖洗3 min/3次加入二抗孵育1 h，PBS沖洗，加DAB顯色，自來(lái)水充分沖洗，梯度酒精脫水，二甲苯透明，封片。陽(yáng)性結(jié)果呈棕黃色或棕褐色顆粒，不同生物學(xué)指標(biāo)在細(xì)胞中的著色部位不同，Ki67及VEGF陽(yáng)性細(xì)胞分別為細(xì)胞核顯色和細(xì)胞質(zhì)顯色，Ki67、VEGF切片隨機(jī)觀察5個(gè)中倍視野(×200)，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，將各視野中陽(yáng)性細(xì)胞的平均百分比作為該切片的陽(yáng)性細(xì)胞百分比。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件 χ2檢驗(yàn)及Spearman相關(guān)分析進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果

2.1 Ki67、VEGF在乳腺癌組織中陽(yáng)性表達(dá) 見(jiàn)圖1。

2.2 Ki67及VEGF在乳腺組織中的陽(yáng)性表達(dá)情況 49例乳腺癌標(biāo)本，Ki67陽(yáng)性37例，VEGF陽(yáng)性者34例，而在20例乳腺良性病變組織中Ki67及VEGF陽(yáng)性分別為4例及2例，乳腺癌組織中Ki67、VEGF的表達(dá)率與乳腺良性病變組織比較差異顯著(P＜0.01)。

圖1 乳腺癌組織Ki67、VEGF表達(dá)(DAB，×100)

表1 Ki67、VEGF陽(yáng)性表達(dá)與乳腺癌臨床病理的關(guān)系

2.3 Ki67、VEGF的表達(dá)與乳腺癌臨床病理的關(guān)系 見(jiàn)表1，Ki67的表達(dá)與乳腺癌的臨床分期有關(guān)(P＜0.05)，與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況無(wú)關(guān)(P＞0.05)，VEGF與臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況均有關(guān)(P＜0.05)。

3 討論

Ki67抗原最早在1983年由德國(guó)學(xué)者Gerdes等在霍奇金淋巴瘤源性細(xì)胞系中，使用鼠單克隆抗體抗核抗原的研究中發(fā)現(xiàn)，隨后以Gerdes所在學(xué)校的名稱Kiel Universily命名，Ki67是目前較為肯定的核增殖標(biāo)記物，它在細(xì)胞周期的G1后期開始表達(dá)，S期和G2期表達(dá)增加，在M期達(dá)到高峰，有絲分裂結(jié)束后迅速降解，且不表達(dá)于DNA修復(fù)狀態(tài)的細(xì)胞〔2〕。

目前在乳腺癌中關(guān)于Ki67探討的焦點(diǎn)集中在該指標(biāo)能否作為乳腺癌預(yù)測(cè)及預(yù)后判斷的指標(biāo)，既往的多個(gè)研究表明Ki67與多種腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移、及預(yù)后有關(guān)〔3～5〕。Klintman 等〔6〕在2010年研究報(bào)告表明Ki67是雌激素受體陽(yáng)性及組織病理分級(jí)2級(jí)的淋巴結(jié)陰性乳腺癌患者的預(yù)后因素，并提出Ki67也許成為病理分級(jí)的補(bǔ)充指標(biāo)。在本研究中，乳腺癌組織中Ki67的陽(yáng)性率為75.5%，與其他學(xué)者的報(bào)道相近，Ki67在乳腺癌組織與乳腺良性病變組織中的表達(dá)差異顯著，并且本研究還顯示了Ki67的表達(dá)與腫瘤臨床分期呈正相關(guān)，隨著臨床分期的增高，Ki67的陽(yáng)性率明顯增高，表明Ki67與乳腺癌的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)相關(guān)。本研究還顯示了Ki67的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況無(wú)關(guān)，但因本研究樣本例數(shù)較少，還需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步探討。

VEGF是血管生成的主要調(diào)控因子，特異性的作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞的有絲分裂，是近年來(lái)活躍于腫瘤研究中的熱點(diǎn)，抗腫瘤血管生成的分子靶向藥物在不少實(shí)體瘤的治療中取得了較好的效果，這表明腫瘤中VEGF存在異常表達(dá)，本研究中乳腺癌組織中VEGF的陽(yáng)性率為69.4%，VEGF的表達(dá)率與乳腺良性病變組織比較差異顯著，VEGF與臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況均有關(guān)。這符合惡性腫瘤發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移的生物學(xué)規(guī)律。更有學(xué)者〔7〕報(bào)道了在乳腺癌中Ki67和VEGF的表達(dá)存在正相關(guān)關(guān)系。

1 Papantoniou VJ，Souvatzoglou MA，Valotassiou VJ，et al.Relationship of cell proliferation(Ki67)to99mTc-(v)DMSA uptake in breast cancer〔J〕.Breast Cancer Res，2004;6(2):56-62.

2 Beresford MJ，Wilson GD，Makris A.Measuring proliferation in breast cancer:practicalities and applications〔J〕.Breast Cancer Res，2006;8:216.

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5 Tut VM，Braithwaite kL，Angus B，et al.Cyclin D1 expression in transitional cell carcinoma of the bladder:correlation with p53，waf1，pRb and Ki67〔J〕.Br JCancer，2001;84(2):270-5.

6 Klintman M，Bendahl PO，Grabau D，et al.The prognostic value of Ki67 is dependent on estrogen receptor status and histological grade in premenopausal patients with node-negative breast cancer〔J〕.Mod Pathol，2010;23(2):251-9.

7 Nakopoulou L，Stefanaki K，Panayotopoulou E，et al.Expression of the vascular endothelial growth factor receptor-2/Flk-1 in breast carcinomas:correlation with proliferation〔J〕.Hum Pathol，2002;33(11):1061-3.