金 戈 明海霞 董曉麗 (甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000)

心氣虛證類似于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的心血管疾病，可以具有不同程度的心功能不全，西醫(yī)強(qiáng)心、營養(yǎng)心肌治療效果欠佳。中藥治療心氣虛證雖有報(bào)道，但多屬臨床總結(jié)性質(zhì)，缺乏系統(tǒng)深層次的研究。本課題組應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)中藥復(fù)方，由人參、黃芪、丹參、紅花、川芎組成，在傳統(tǒng)中醫(yī)益氣活血治療的基礎(chǔ)上，增加了通脈行氣藥，以祛瘀行血，調(diào)整心肌的供血狀態(tài)，改善心肌舒縮功能;從分子生物學(xué)的角度闡述中醫(yī)中藥治療心功能不全的新理論，也為益氣活血中藥應(yīng)用于臨床治療提供理論依據(jù)。本文主要探討該中藥方劑對家兔心氣虛證一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素(ET)及血液流變學(xué)的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 健康雜種家兔，蘭州生物制品研究所提供，體重(2.5±0.2)kg，雄性。動物合格證號:醫(yī)動字第14-004。

1.1.2 試劑 膽固醇晶體(BR)，上海新興化學(xué)試劑有限公司提供(批號:960912);牛血清白蛋白晶體，杭州江濱生物技術(shù)有限公司提供(批號:20050302);25%氨基甲酸乙酯(25%烏拉坦)，上?；瘜W(xué)試劑供應(yīng)站提供(批號:9902032);20ⅠU肝素，先鋒醫(yī)藥股份有限公司(批號:H20040044)。蒸餾水、0.9%NaCl，甘肅中醫(yī)學(xué)院生命醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。NO測定試劑盒，南京建成生物工程研究所(批號:20050919);ET放免藥盒，解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所(批號:20050919)。

1.1.3 儀器 LG-R-80血液黏度計(jì)(北京中勤世帝科學(xué)儀器有限公司，甘肅中醫(yī)學(xué)院科研實(shí)驗(yàn)中心提供);旋渦混勻器，臺式離心機(jī)(XYJ80-2型)(金壇市恒豐儀器廠生產(chǎn)，甘肅中醫(yī)學(xué)院生命醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供);37℃恒溫水浴鍋(鄭州機(jī)甫儀器廠生產(chǎn)，甘肅中醫(yī)學(xué)院生命醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供);微量式移液器(芬蘭，甘肅中醫(yī)學(xué)院生命醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供)。

1.1.4 藥品 人參、黃芪、丹參、紅花、川芎購自甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院(每劑藥物含量依次為 10 g、30 g、30 g、10 g、10 g)。天王補(bǔ)心丸(濃縮丸)，蘭州佛慈制藥股份有限公司提供(批號:20040823，國藥準(zhǔn)字:Z62020800)

1.2 方法

1.2.1 家兔心氣虛證模型的建立 家兔32只。(1)高脂飲食法:每日將BR拌入基礎(chǔ)飼料中，清晨喂服，每只1 g/d，持續(xù)2 w(以后喂基礎(chǔ)飼料)。(2)免疫定向損傷法:牛血清白蛋白結(jié)晶以生理鹽水溶解成10%溶液，經(jīng)Seize漏斗過濾，于高脂飲食開始后第2周的第1天按250 mg/kg的劑量，一次性耳靜脈注射〔1〕。2個(gè)月后家兔體內(nèi)變態(tài)反應(yīng)產(chǎn)生，造模成功。

1.2.2 中藥的制備 每5劑藥加5倍蒸餾水煎煮1 h，紗布過濾，濾渣重復(fù)煎煮1次(人參單獨(dú)文火久煎1.5 h后兌入上述藥液中)，合并2次濾液濃縮。以上煎煮共分4次完成?？偭繛? 800 ml(相當(dāng)于含生藥1 g/ml)。冰箱冷藏，用時(shí)復(fù)溫。

1.2.3 分組與給藥 造模成功32只家兔，平均分為4組:(1)造模組;(2)小劑量治療組:造模后當(dāng)天以4.2 g/kg(換算系數(shù)為0.07/1.5 kg)的益氣活血中藥灌胃，1次/d，連續(xù)7 d;(3)大劑量治療組:造模后當(dāng)天以8.4 g/kg的該中藥灌胃，用藥持續(xù)時(shí)間同小劑量組;(4)陽性對照組:造模后當(dāng)日以0.63 g/kg(換算系數(shù)同上，相當(dāng)于中劑量治療組的藥量)的天王補(bǔ)心丸(濃縮丸，每8丸相當(dāng)于原藥材3 g)灌胃，用藥持續(xù)時(shí)間同上。生理鹽水組:家兔8只，不造模，當(dāng)日以等容量生理鹽水代替中藥灌胃，用藥持續(xù)時(shí)間同上。

1.2.4 觀察指標(biāo) 各組家兔分別在造模、灌胃完成后第2天進(jìn)行指標(biāo)的測定。經(jīng)右側(cè)頸總動脈插管做各組左室血流動力學(xué)檢測后，持配7號針頭的10 ml注射器，于胸壁心跳最明顯處，將針頭刺入心臟，取出5 ml血液，迅速拔出針頭。采用化學(xué)比色法檢測NO水平。按照同樣的方法心臟取血采用非平衡放免法檢測ET水平。于清晨用7號針頭在家兔頸靜脈取血后(采血前1 d禁高脂飲食)沿管壁緩慢注入抗凝管中，輕輕顛倒混勻，以避免產(chǎn)生泡沫和防止血液離體后凝固。進(jìn)行血液流變學(xué)的檢測應(yīng)在采血后靜置20 min再進(jìn)行為宜;每組采血時(shí)間應(yīng)保持一致。全血黏度和血漿黏度用LG-R-80血液黏度計(jì)測定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Office Excel統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以±s表示。用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 各組家兔NO指標(biāo)水平比較 造模組的NO含量〔(1.533± 0.29) μmol/L〕低 于 生 理 鹽 水 組 〔(4.330±0.21)μmol/L〕，且與各組比較均有顯著性差異(P＜0.01)。經(jīng)益氣活血中藥治療后NO含量有所上升。大劑量組〔(18.576± 1.18)μmol/L〕與 小 劑 量 組 〔(15.934 ±1.13)μmol/L〕比較差異顯著(P＜0.01)。大劑量治療組與陽性對照組〔(15.697±1.32)μmol/L〕比較差異顯著(P＜0.01)。小劑量治療組與陽性對照組比較亦無顯著性差異。

2.2 各組家兔ET指標(biāo)的變化 造模組的ET含量〔(1 830.023±239.916)pg/ml〕高于生理鹽水組〔(983.1±106.054)pg/ml〕，且與各組比較均有顯著性差異(P＜0.01)。經(jīng)益氣活血中藥治療后其ET的含量有所下降。大劑量治療組〔(741.034±95.539)pg/ml〕與陽性對照組〔(956.847 ±103.273)pg/ml〕比較有顯著性差異(P＜0.01)。小劑量治療組〔(836.621±100.141)pg/ml〕與陽性對照組比較亦有顯著性差異(P＜0.05)，且大劑量治療組與小劑量組比較無顯著性差異。

2.3 各組家兔血液流變學(xué)指標(biāo)的變化 造模組的血液流變學(xué)指標(biāo)高于生理鹽水組，除血漿黏度外其余指標(biāo)與各組比較均有顯著性差異(P＜0.05)。經(jīng)益氣活血中藥治療后其血液流變學(xué)指標(biāo)有所下降。大劑量治療組與陽性對照組比較有顯著性差異(P＜0.01)。小劑量治療組中的全血黏度(中切、高切)、紅細(xì)胞比容與陽性對照組比較差異顯著(P＜0.01)，且大劑量治療組與小劑量組比較差異顯著(P＜0.01)。見表1。

表1 各組家兔血液流變學(xué)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)(±s，n=8)

表1 各組家兔血液流變學(xué)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)(±s，n=8)

與生理鹽水組比較:1)P＜0.01;與大劑量組比較:2)P＜0.01;與小劑量組比較:3)P＜0.01;與陽性對照組比較:4)P＜0.01

組別 全血黏度低切(1 mPa/s) 中切(30 mPa/s) 高切(200 mPa/s ) 血漿黏度(100 mPa/s) 紅細(xì)胞比容(HCT)生理鹽水組 7.07±0.23 4.50±0.151)3.65±0.18 1.09±0.10 0.37±0.04大劑量治療組 7.26±0.35 5.03±0.211) 3.88±0.25 1.15±0.14 0.43±0.10小劑量治療組 8.67±0.111)2) 5.75±0.161)2) 5.43±0.091)2) 1.41±0.101)2) 0.50±0.031)2)陽性對照組 8.34±0.651)2) 5.36±0.181)2)3) 4.78±0.141)2)3) 1.32±0.121)2) 0.45±0.031)2)3)造模組 9.19±0.421)2)3)4) 6.57±0.211)2)3)4) 5.89±0.191)2)3)4) 1.45±0.141)2)4) 0.57±0.061)2)3)4)

3 討論

心氣虛證是指心脈鼓動無力致心悸氣短、舌淡，動則加重，甚則脈微欲絕為主的一組證候群〔2〕。類似于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的心血管疾病，可以具有不同程度的慢性左心功能不全，但在內(nèi)容上又不完全等同，西醫(yī)目前沒有安全有效的治療方法。中醫(yī)認(rèn)為:“氣行則血行，氣滯則血瘀”。若心氣虛衰，帥血無力，其血非瘀即阻，故心氣虛導(dǎo)致血瘀，血瘀又可耗傷心氣，心氣虛與血瘀互為因果，影響著疾病的發(fā)生、發(fā)展。因此心氣虛的治療不僅要補(bǔ)益心氣以行血，同時(shí)也要活血化瘀以行血。本實(shí)驗(yàn)取人參補(bǔ)氣，黃芪增加心肌收縮力，降低血液黏稠度，改善異常血液流變學(xué)指標(biāo)。丹參擴(kuò)張冠狀動脈，抗動脈粥樣硬化;改善心功能;降低血液黏度，改善微循環(huán)及抑制血小板聚集等作用。紅花活血祛瘀，通調(diào)血脈，以減輕心臟后負(fù)荷，還可擴(kuò)張冠狀動脈，減慢心率。川芎活血行氣，有擴(kuò)張冠狀動脈，降低心肌耗氧量〔3〕，降低外周阻力的作用;可抑制血小板聚集與激活，降低全血黏度及紅細(xì)胞比容，減少血漿纖維蛋白原的產(chǎn)生，對抗血小板活化因子，預(yù)防血栓形成〔4〕。

血液流變學(xué)是從細(xì)胞和分子水平上研究血液成分的流變特性。正常的血液流變性是保證組織器官血液灌注以維持其正常代謝活動的重要條件。血液流變性異常所引起的血流動力學(xué)異常及微循環(huán)障礙是很多疾病發(fā)病的病理基礎(chǔ)〔5〕。現(xiàn)代血液流變學(xué)的研究已從單純的血液黏度、血小板功能等檢測發(fā)展為血-血管內(nèi)皮功能-血液流動的宏觀和微觀相結(jié)合的研究，且結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理化檢查如內(nèi)皮細(xì)胞分泌的生物活性因子如ET、NO等進(jìn)行綜合判斷。血液宏觀流變特征主要包括全血液黏度，它是最基本的流變學(xué)指標(biāo)。微觀流變特征主要包括紅細(xì)胞變形性、聚集性等。血液黏度為血液流動阻力的主要參數(shù)，它隨切變率的變化而變化，其高低主要取決于血中有形成分和大分子物質(zhì)的多少，以及細(xì)胞的聚集性和變形性能力的大小。高剪切率下的血液黏度反映紅細(xì)胞變形時(shí)的血液黏度，它是血流較快時(shí)的血黏度，其主要由紅細(xì)胞變形性和血漿黏度決定〔6〕。中剪切率下的血液黏度則反映紅細(xì)胞解聚。低剪切率下的血液黏度反映紅細(xì)胞聚集的血液黏度，是血流較慢時(shí)的血黏度，主要由紅細(xì)胞聚集性和血漿黏度決定;血漿黏度主要取決于纖維蛋白原的多少。紅細(xì)胞比容升高主要受紅細(xì)胞變形能力下降的影響而改變血液流動性，造成微循環(huán)有效灌注量降低，發(fā)生血管阻塞。

血液流變學(xué)異常能引起組織缺血、缺氧及代謝紊亂和功能失調(diào)，使心臟負(fù)荷增加，心輸出量減少，微循環(huán)灌注減少。同時(shí)，它也會引起機(jī)體功能性或器質(zhì)性障礙，引起腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)活化、去甲腎上腺素分泌增多，微循環(huán)收縮狹窄，阻力增高而引起血壓升高直至并發(fā)心、腦血管病的發(fā)生。目前血液流變學(xué)的改變及脂代謝紊亂是公認(rèn)的兩大可控制的心腦血管疾病的重要因素〔7〕。但血液流變學(xué)指標(biāo)對疾病缺乏特異性，它的改變提示體內(nèi)存在誘發(fā)病灶，結(jié)合其他檢查方法能進(jìn)一步確定疾病的誘因，起到輔助診斷的作用。從這個(gè)意義上講，血液流變學(xué)檢查是其他任何檢測方法不能替代的，尤其是心腦血管疾病〔8〕。因此，采取必要的措施降低血液黏滯性，可以起到早期預(yù)防、早期診斷和早期治療的效果，并可有效防止心腦血管疾病的發(fā)生。

NO是血管內(nèi)皮細(xì)胞合成的一種酶催化的生物活性物質(zhì)，有擴(kuò)張血管、抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖和血小板聚集〔9〕、防止血栓形成和改善微循環(huán)灌注等方面的作用，可使局部血管擴(kuò)張。NO具有心肌保護(hù)作用。它在體參與神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用，但其對心血管系統(tǒng)的作用最為主要。各種心血管疾病均可顯著損害血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，導(dǎo)致內(nèi)皮依賴性血管舒張功能障礙，NO合酶(NOS)表達(dá)異常。NOS的某種輔助因子異常及超氧離子對NO的破壞增加等因素可導(dǎo)致NO減少。如果其生成不足或過量，可以引起心血管系統(tǒng)疾病，故NO與心氣虛關(guān)系尤為密切〔10〕。它在血中的含量與心功能不全的嚴(yán)密程度密切相關(guān)〔11〕。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示:造模組家兔血漿中的NO含量低于正常組，經(jīng)益氣活血中藥治療后可使血漿中NO含量明顯增高。且益氣活血中藥大劑量升高血漿NO含量的療效明顯優(yōu)于天王補(bǔ)心丸，并且隨著該藥物劑量的增加療效有所提高。

ET是血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的一種強(qiáng)有力的血管收縮肽，通過激活鈣通道增加鈣離子內(nèi)流，促進(jìn)血管平滑肌收縮。在內(nèi)皮損傷時(shí)，其合成或釋放增加，并與其在血管平滑肌細(xì)胞上的受體結(jié)合，調(diào)節(jié)血管緊張度而使血管收縮。

健全的血管內(nèi)皮細(xì)胞是維持血管張力、調(diào)節(jié)血壓的基礎(chǔ)，基礎(chǔ)狀態(tài)下血管阻力由NO控制。NO合成不足引起高血壓、動脈粥樣硬化等心血管疾病。長期NO合成不足不僅不能有效擴(kuò)張血管，還加劇了ET的縮血管作用，使血壓升高;NO相對缺乏導(dǎo)致抑制腎素作用下降，抑制平滑肌增生和血小板黏附與聚集能力降低，促進(jìn)高血壓的維持與血栓的形成。ET和NO之間存在著相互促進(jìn)或相互抑制的復(fù)雜關(guān)系，共同調(diào)節(jié)著心肌、血管的舒縮狀態(tài)和平滑肌細(xì)胞的增殖情況，直接或間接影響著心功能〔12〕。本實(shí)驗(yàn)通過免疫定向損傷法造成心氣虛證家兔內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，結(jié)果顯示:正常組家兔血漿中的ET含量低于造模組，兩組比較有明顯差異。經(jīng)益氣活血中藥治療后其血漿中ET含量明顯下降，且其大、小劑量治療組的下降程度高于天王補(bǔ)心丸。

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