李成軍 馬丹丹 祝友朋 王國(guó)忠 (齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院，黑龍江 齊齊哈爾 161006)

阿司匹林具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗癌、抗風(fēng)濕作用〔1〕、還能防治心腦血管疾病〔2，3〕，是老年人常用的藥物。但是，阿司匹林有損傷胃腸道黏膜的副作用〔4〕，10% ～25%長(zhǎng)期服用阿司匹林患者可發(fā)生消化性胃潰瘍〔5〕，老年人消化性潰瘍的發(fā)病有逐年增高的趨勢(shì)〔6〕。阿司匹林通過(guò)抑制環(huán)加氧酶導(dǎo)致前列腺素生成減少引起消化性潰瘍的研究已比較清楚，最近報(bào)道生長(zhǎng)因子在潰瘍的修復(fù)中起重要作用〔7〕。但是，阿司匹林對(duì)胃黏膜生長(zhǎng)因子的影響與潰瘍愈合的關(guān)系尚未進(jìn)行深入研究。本研究探討了阿司匹林對(duì)表皮生長(zhǎng)因子(EGF)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)的影響與胃黏膜血流的關(guān)系以及對(duì)潰瘍愈合的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 選用雄性清潔級(jí)Wistar大鼠，體重180～210 g，由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。Motic Med 6.0數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析儀、組織血流量檢測(cè)儀和光學(xué)顯微鏡都為日本產(chǎn)品，LRH-250-A型生化培養(yǎng)箱為中國(guó)產(chǎn)品。阿司匹林為美國(guó)Alfa Aesar公司產(chǎn)品，EGF和VEGF一抗為博奧森生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，它們的酶標(biāo)二抗以及DAB顯色試劑盒都是康為世紀(jì)生物科技有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 乙酸胃潰瘍模型復(fù)制與分組 乙醚麻醉大鼠，腹部手術(shù)將胃拉出腹腔，將內(nèi)徑6 mm的塑料管緊貼于胃體與幽門交界處血管少的部位，注入100%(V/V)的乙酸75μl，25 s后移除乙酸，縫合腹壁〔8〕。模型復(fù)制后第8天隨機(jī)分為模型組:在8～15 d每日只禁食5 h，不做任何處理;鹽水組:在8～15 d每日禁食4 h后，用灌胃法給每只大鼠生理鹽水2 ml，然后再禁食1 h;阿司匹林組:在8～15 d每日禁食4 h后，用灌胃法給阿司匹林50 mg/kg體重，然后再禁食1 h。在第16天收集標(biāo)本進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)。

1.2.2 潰瘍面積的檢測(cè) 按公式1/4(潰瘍長(zhǎng)徑×潰瘍寬徑)×π計(jì)算，π取值為3.14。

1.2.3 黏膜下組織微血管數(shù)的檢測(cè) 在光學(xué)顯微鏡下放大200倍，計(jì)數(shù)HE染色切片肉芽組織中已形成血管腔結(jié)構(gòu)的毛細(xì)血管作為微血管數(shù)，每組隨機(jī)取4個(gè)標(biāo)本做切片，每張切片隨機(jī)取2個(gè)視野，結(jié)果表示為個(gè)/高倍視野(個(gè)/HP)。

1.2.4 EGF和VEGF的檢測(cè) 用免疫組織化學(xué)Elivison二步法檢測(cè)。EGF一抗1∶100稀釋，VEGF一抗1∶150稀釋，二抗都是1∶150稀釋，用DAB顯色試劑盒顯色。然后每組隨機(jī)取4張

切片，每張切片隨機(jī)取2個(gè)視野，用數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析儀檢測(cè)其積分光密度。

1.2.5 胃黏膜血流(GMBF)的檢測(cè) 采用氫氣清除法檢測(cè)潰瘍邊緣血流，以正常大鼠相應(yīng)部位GMBF作對(duì)照，以百分比變化表示(%)〔9〕。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，所得數(shù)據(jù)用±s表示，組間差異用單因素方差分析中的最小顯著差法(LSD)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 各組潰瘍面積 阿司匹林組潰湯面積為(11.88±2.56)mm2，明顯高于模型組和鹽水組〔(8.37±3.03)mm2，(9.14±2.48)mm2，P ＜0.05〕。見圖1。

2.2 各組EGF和VEGF表達(dá)的差異 阿司匹林組潰瘍邊緣黏膜組織EGF和VEGF的積分光密度較模型組及鹽水組明顯減低(P＜0.01)。見表1，圖2。

2.3 各組肉芽組織微血管數(shù)和GMBF的差異 阿司匹林組微血管數(shù)和GMBF較其他組減少(P＜0.01)，見表2。

圖1 各組潰瘍部位病理學(xué)觀察(HE，×100)

表1 各組EGF和VEGF的積分光密度的差異(±s，n=8)

表1 各組EGF和VEGF的積分光密度的差異(±s，n=8)

與阿司匹林組比較:1)P＜0.01，下表同

組別EGF VEGF模型組 13.99±4.611) 28.43±6.451)鹽水組 16.28±5.041) 32.53±4.821)阿司匹林組7.41±3.84 19.45±5.27

圖2 各組EGF和VEGF表達(dá)的差異(DAB，×400)

表2 各組微血管數(shù)和GMBF的差異(±s，n=8)

表2 各組微血管數(shù)和GMBF的差異(±s，n=8)

組別 微血管數(shù)GMBF模型組 14.63±3.851) 79.28±4.621)鹽水組 12.01±2.561) 83.29±5.191)阿司匹林組7.88±3.52 69.68±7.79

3 討論

胃潰瘍是由于黏膜侵襲因素和黏膜自身防御-修復(fù)因素之間失衡所致〔10〕。阿司匹林是胃黏膜的重要侵害因素。用100%的乙酸75μl復(fù)制的大鼠胃潰瘍，在第3天潰瘍面積約為27 mm2，然后潰瘍逐漸愈合，至第8天潰瘍面積約為17 mm2〔8〕。本研究表明潰瘍正在進(jìn)行愈合，而阿司匹林組潰瘍邊緣黏膜結(jié)構(gòu)紊亂，表明阿司匹林是胃黏膜的重要侵害因素而抑制潰瘍愈合。EGF和VEGF在潰瘍的修復(fù)中具有重要作用，參與黏膜細(xì)胞和血管的再生〔11，12〕。本結(jié)果表明阿司匹林可能通過(guò)抑制EGF和VEGF的表達(dá)而抑制潰瘍愈合。GMBF在潰瘍的修復(fù)中起重要作用〔13〕，可為黏膜提供氧和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，以促進(jìn)胃黏膜細(xì)胞再生。表明阿司匹林抑制EGF和VEGF導(dǎo)致微血管生成減少和黏膜血流降低，抑制了潰瘍的愈合?？傊?，阿司匹林通過(guò)抑制EGF和VEGF的表達(dá)導(dǎo)致微血管生成減少和黏膜血流降低，抑制了潰瘍的愈合，因此，在應(yīng)用阿司匹林的同時(shí)，應(yīng)重視增加GMBF藥物的應(yīng)用，以防止阿司匹林對(duì)胃黏膜的損害。

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