劉春忻 (齊齊哈爾醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院，黑龍江 齊齊哈爾 161006)

已有研究表明，在腫瘤的發(fā)生、浸潤和轉(zhuǎn)移的連續(xù)過程中涉及到多種癌基因。目前研究人員非常重視胃癌浸潤和轉(zhuǎn)移的相關蛋白和基因的調(diào)控研究〔1〕。研究顯示，胃癌的發(fā)生是多基因、多因素變異所致。本文檢測胃癌的腫瘤組織和轉(zhuǎn)移淋巴結中p53、c-erbB-2、nm23蛋白的表達，探討三者在胃癌轉(zhuǎn)移和浸潤中發(fā)揮的作用，以及是否具有協(xié)同作用。

1 資料與方法

1.1 資料

1.1.1 臨床對象 選擇2002年1月至2009年6月在我院住院診斷并手術切除的胃癌45例，其中男34例，女11例，年齡35～89〔平均(60.3±24.5)〕歲;早期15例，中期13例，晚期17例，所有患者均為浸潤性胃癌，按世界衛(wèi)生組織制定的標準進行組織分型，根據(jù)腫瘤細胞分化程度分為低分化組(黏液腺癌6例，印戒細胞癌5例、低分化腺癌10例)和高分化組(乳頭狀腺癌8例，管狀腺癌16例);均伴有淋巴結轉(zhuǎn)移。35例非胃癌患者，慢性胃炎伴重度不典型增生26例，胃息肉9例。所有患者包括胃癌組織、轉(zhuǎn)移的淋巴結以及非癌癥胃黏膜標本均常規(guī)經(jīng)4%甲醛固定、包埋，5μm厚切片待用。

1.1.2 試劑和儀器 鼠抗人p53單克隆抗體、鼠抗人c-erbB-2單克隆抗體(Santa Cruz產(chǎn)品);鼠抗人nm23單克隆抗體，批號:20101202(武漢博士德科技有限公司產(chǎn)品)。二氨基聯(lián)苯胺(DAB)酶底物顯色試劑盒，批號:20101201(武漢博士德科技有限公司產(chǎn)品)。恒溫水浴箱(上海方瑞儀器廠)，實驗用醫(yī)用微波爐(上海華舟壓敏膠制品有限公司)等。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 采用免疫組化 (SABC)法，乙二胺四乙酸(EDTA)修復液抗原修復組織切片，磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗。然后在標本上滴加正常山羊血清封閉液，室溫20 min。滴加Ⅰ抗 (p53、c-erbB-2、nm23)，4℃過夜。PBS沖洗。滴加生物素化二抗 (羊抗兔ⅠgG)。PBS沖洗。滴加試劑SABC，PBS沖洗，DAB顯色，蒸餾水洗。蘇木素復染、鹽酸酒精分化。梯度酒精脫水、二甲苯透明、滴樹膠封片，光學顯微鏡檢查〔2〕。

1.2.2 結果判定 p53蛋白陽性表達產(chǎn)物定位于細胞核中，核內(nèi)可見明顯的棕黃色顆粒。c-erbB-2表達產(chǎn)物定位于細胞質(zhì)或細胞膜，表現(xiàn)為有明顯的棕黃色顆粒;nm23表達產(chǎn)物以細胞質(zhì)棕黃色著色為陽性細胞顆粒。

1.2.3 圖像分析方法 采取p53、c-erbB-2、nm23光學顯微鏡圖像，通過Ⅰmage-Pro Plus7.0分析軟件圖像分析，每張切片均采用5個圖像測定血管組織陽性表達產(chǎn)物的積分光密度值(ⅠOD)，取平均值代表 p53、c-erbB-2、nm23 表達強度，ⅠOD 值越大表示陽性產(chǎn)物表達越強〔3〕。

1.3 統(tǒng)計學方法 應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料均以±s表示，各組數(shù)據(jù)進行方差齊性檢驗。

2 結果

2.1 p53、c-erbB-2、nm23在癌癥組織和非癌癥組織胃黏膜的表達變化 p53、c-erbB-2、nm23均在胃癌組織內(nèi)表達，且ⅠOD高表達，與非癌癥胃黏膜比較有顯著差異(P＜0.05)。見表1，圖1。

圖1 胃癌組織病理結果

表1 p53、cerbB-2、nm23在癌癥組織和非癌癥組織胃黏膜的表達變化(IOD，±s)

表1 p53、cerbB-2、nm23在癌癥組織和非癌癥組織胃黏膜的表達變化(IOD，±s)

與非癌癥組比較:1)P＜0.05

組別 n p53 c-erbB-2 nm23非癌癥組35 12.12±3.43 9.34±1.64 21.63±5.65癌癥組 45 55.32±14.471) 25.74±3.751) 59.37±12.481)

2.2 癌組織與轉(zhuǎn)移淋巴結組織p53、c-erbB-2、nm23的表達變化 患者轉(zhuǎn)移淋巴結中p53、c-erbB-2蛋白ⅠOD呈高表達，與原位癌組織ⅠOD比較有顯著差異，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。轉(zhuǎn)移淋巴結中nm23ⅠOD呈低表達，與原位癌組織ⅠOD比較有顯著差異，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表2，圖2。

表2 p53、cerbB-2、nm23在癌癥組織和轉(zhuǎn)移淋巴結的表達(IOD，±s，n=45)

表2 p53、cerbB-2、nm23在癌癥組織和轉(zhuǎn)移淋巴結的表達(IOD，±s，n=45)

與癌癥組織比較:1)P＜0.05

組別p53 c-erbB-2 nm23癌癥組織55.32±14.47 25.74±3.75 59.37±112.48轉(zhuǎn)移淋巴結 95.47±23.741) 63.37±14.75 32.64±10.431)

圖2 p53、c-erbB-2、nm23在胃癌組織與轉(zhuǎn)移淋巴組織的表達(×460)

3 討論

惡性腫瘤最基本的生物學特性通常是腫瘤細胞具備轉(zhuǎn)移和侵襲的能力，轉(zhuǎn)移和侵襲是惡性腫瘤威脅患者生命的主要原因。因此，探索腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲的發(fā)生機制及其活動規(guī)律，對惡性腫瘤的預后具有明顯的指導意義。腫瘤轉(zhuǎn)移(tumor metastasis)是指腫瘤細胞從其原發(fā)部位侵入體腔、血管或淋巴管，甚至靶器官或靶組織。腫瘤侵襲(tumor invasion)是指腫瘤細胞從原發(fā)部位沿組織間隙向外周組織侵襲的過程，其確定標準是腫瘤細胞是否突破基底膜。腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲是既不同又有聯(lián)系的兩個階段。

胃癌的分子生物學表明，在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程中，一些癌基因、抑癌基因會發(fā)生缺失和突變。p53基因位于17號染色體上，蛋白產(chǎn)物分子量為53 kD。野生型p53具有調(diào)節(jié)細胞凋亡及增殖的雙重作用，能維持細胞的正常生長，但不易檢測，在細胞內(nèi)保存期非常短。p53基因突變、缺失導致表達異常稱為突變型p53，保存時間相對較長〔4〕。多種腫瘤中p53均見過多表達，說明p53基因出現(xiàn)突變。本研究發(fā)現(xiàn)胃癌組織中p53蛋白表達的ⅠOD與非癌癥胃黏膜比較有顯著差異，提示胃癌患者的p53蛋白是高表達的。

c-erbB-2基因(又稱HER2/neu)一般定位于人17號染色體，糖蛋白產(chǎn)物為185 kD，即c-erbB-2蛋白(ERBB2)，c-erbB-2屬于受體酪氨酸激酶(RTK)Ⅰ家族，在正常條件下，c-erbB-2通過與其他RTKⅠ受體形成異二聚體激活，參與細胞調(diào)控，涉及到細胞凋亡、增殖、遷移。腫瘤組織中，c-erbB-2過表達，促進RTK調(diào)控網(wǎng)絡失控，增加了腫瘤轉(zhuǎn)化活性〔5〕。本研究顯示胃癌組織中c-erbB-2蛋白表達的ⅠOD與非癌癥胃黏膜比較有顯著差異，提示胃癌組織中c-erbB-2蛋白高表達。

人類nm23基因有兩個亞型，即nm23-H1和nm23-H2，定位于17號染色體。nm23基因是目前分離鑒定的一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，可定位于細胞質(zhì)和質(zhì)膜。在多種生物學過程均有此酶參與，包括細胞內(nèi)和細胞間信號傳遞等。研究顯示nm23蛋白在胃癌中與腫瘤的浸潤有關，血管內(nèi)癌栓的腫瘤組織有較強的免疫反應也支持這一觀點〔6〕。本研究顯示胃癌組織中nm23蛋白表達的ⅠOD與非癌癥胃黏膜比較有顯著差異，提示胃癌組織中nm23蛋白水平高表達。

研究發(fā)現(xiàn)，患者轉(zhuǎn)移淋巴結中p53、c-erbB-2蛋白呈高表達，與原位癌組織比較有顯著差異?？梢奵-erbB-2和p53在胃癌轉(zhuǎn)移過程中表達增加。轉(zhuǎn)移的淋巴結表達增強可能由于p53的突變失去了抑癌效果，損傷的DNA得不到修復，有利于其表達。通常p53突變及表達發(fā)生于早期胃癌，而c-erbB-2則發(fā)生于晚期胃癌。c-erbB-2蛋白在轉(zhuǎn)移的淋巴結也呈高表達，提示c-erbB-2與胃癌轉(zhuǎn)移關系更為密切，對胃癌的預后和鑒別診斷的評估有一定價值。nm23基因的突變和缺失與多種腫瘤的轉(zhuǎn)移有關〔7〕。本研究顯示轉(zhuǎn)移淋巴結中nm23呈低表達，與原位癌組織比較有顯著差異，反映出nm23基因在胃癌轉(zhuǎn)移方面起重要作用?？赡茉谵D(zhuǎn)移的淋巴結中nm23中的核苷二磷酸激酶能夠與G蛋白作用，通過細胞信號轉(zhuǎn)導，調(diào)節(jié)細胞增殖和分化。如果nm23出現(xiàn)缺失，通過細胞去分化，可發(fā)生淋巴結轉(zhuǎn)移?？梢娔[瘤的淋巴結轉(zhuǎn)移起到一定的抑制作用。

總之，p53、c-erbB-2、nm23在胃癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結中的檢測對胃癌鑒別診斷和預后具有一定臨床意義。通過幾種基因檢測與CT和超聲內(nèi)鏡相結合，有希望提高胃癌臨床分期的準確性，為合理選擇治療方案提供依據(jù)。

1 陳 斌，羅榮城，崔 斐，等.胃癌HER2/neu基因表達與預后的相關性〔J〕.南方醫(yī)科大學學報，2006;26(3):344-7.

2 賀 巖，張 磊，葉 菲，等.胃癌組織中p53基因突變和p53蛋白表達〔J〕.中國比較醫(yī)學雜志，2006;16(12):740-3.

3 賈明昭，夏 青，陳志偉.四物湯配方顆粒對骨髓抑制小鼠性激素及其受體影響的實驗研究〔J〕.天津醫(yī)藥，2009;37(7):578-80.

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5 陳永勝，關 麗，姚憲章，等.胃癌p53，c-erbB-2，p21，nm23基因表達的分布特點及其臨床意義〔J〕.中國實驗診斷學，2005;9(5):718-21.

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7 趙 茜，區(qū)穗芳，謝秀琴.p53及nm23在胃癌中的表達及其與淋巴結轉(zhuǎn)移的關系〔J〕.中國熱帶醫(yī)學，2007;7(5):689-90.