陳世佳

急性心肌梗死(AMI)是急性心肌缺血性壞死，是在冠狀動脈病變的基礎(chǔ)上發(fā)生冠狀動脈血供急劇減少或中斷，使相應(yīng)的心肌因持久性缺血而發(fā)生的局部壞死［12］。是內(nèi)科急診中常見的重癥病患之一。AMI發(fā)生后，如果在數(shù)小時(shí)內(nèi)得不到明確診斷及適當(dāng)?shù)闹委煟募【蜁毖?、缺氧造成不可逆的壞死，因此，早期診斷并及時(shí)有效的治療對減少心肌壞死、改善預(yù)后至關(guān)重要［14］。AMI發(fā)生后，心肌損傷的標(biāo)志物肌鈣蛋白I(CTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌紅蛋白(Mb)可迅速釋放到血液中，檢測這些標(biāo)志物可為AMI的診斷提供依據(jù)，檢測這些生化標(biāo)志物需要一定的儀器設(shè)備，有些實(shí)驗(yàn)室可能為因?yàn)槟承┰驎簳r(shí)不能開展這些項(xiàng)目的檢測，我們用肌鈣蛋白I、肌紅蛋白、肌酸激酶同工酶聯(lián)合檢測卡定性檢測AMI患者和健康體檢者血清中CTnI，Mb，CK-MB結(jié)果，同時(shí)與我們常規(guī)檢驗(yàn)的CK-MB結(jié)果比較，了解三聯(lián)檢測卡在診斷急性心肌梗死的診斷價(jià)值。旨在找到對實(shí)驗(yàn)條件要求不高，不需要特殊儀器設(shè)備、操作方便、實(shí)用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果快速、準(zhǔn)確的檢測CTnI，Mb，CK-MB的方法為臨床對AMI的診斷提供迅速準(zhǔn)確的檢驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 檢測對象 2009年6月至2010年6月我院住院患者已確診的AMI患者41例，其中，男35例，女6例，年齡25～86歲，民族為漢族;正常對照組為來我院的健康體檢者，21例，年齡31～59歲，其中男17例，女4例。

1.2 儀器、試劑 日立7020型全自動生化分析儀，奧斯邦CK-MB測定試劑(批號:090201;批號:091001);肌鈣蛋白I/肌紅蛋白/肌酸激酶同工梅CK-MB聯(lián)合檢測卡，北京九強(qiáng)生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品(批號:P8092420;批號:P9051903)。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集 AMI患者發(fā)病后6 h內(nèi)采集靜脈血及時(shí)分離血清，定性測定 CTnI、Mb、CK-MB。剩余血清分裝置-20℃冰存，常規(guī)工作時(shí)間定量檢測CK-MB。

1.3.2 定性測定CTnI、Mb、CK-MB 使用肌鈣蛋白I/肌紅蛋白/肌酸激酶同工梅CK-MB聯(lián)合檢測卡實(shí)驗(yàn)前，將試劑卡和樣本放置室溫;從錫薄紙包裝的缺口處取出檢測卡，放置到潔凈的平面上，加3滴樣本于樣本孔中;加樣后15 min內(nèi)讀取結(jié)果。結(jié)果讀取:陰性結(jié)果:控制區(qū)(C)出現(xiàn)一條紫色或玫瑰紅色帶，15 min內(nèi)試驗(yàn)區(qū)(T)不出現(xiàn)色帶。陽性結(jié)果:控制區(qū)和試驗(yàn)區(qū)15 min內(nèi)各出現(xiàn)一條紫色或玫瑰紅色帶，色帶深淺與檢測物濃度有關(guān)。無效結(jié)果:無論試驗(yàn)區(qū)有無色帶，控制區(qū)沒有出現(xiàn)色帶［13］。

1.3.3 定量測定CK-MB 用日立7020型全自動生化分析儀、奧斯邦試劑檢測。主要分析參數(shù)按照試劑說明書設(shè)置。CK-MB≥25IU/m l為陽性。

2 結(jié)果

2.1 肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)檢測結(jié)果見表1。

2.2 心肌三聯(lián)檢測卡定性檢測 41例AMA患者中CK-MB陽性9例，陰性32例，靈敏度21.95%，21例健康體檢者的血清CK-MB陽性1例，陰性20例，特異度95.24%，結(jié)果見表2。

表1 CTnI、Mb和CK-MB檢測結(jié)果(例，%)

表2 心肌三聯(lián)檢測上卡定性檢測

診斷試驗(yàn)評價(jià)指標(biāo)計(jì)算:

(1)靈敏度(SEN)=a/(a+c)=9/41=21.95%

(2)特異度(SPE)=d/(b+d)=20/21=95.24%

2.3 日立7020型全自動生化分析儀檢測 41例AMA患者中CK-MB陽性11例，陰性30例，靈敏度26.83%，21例健康體檢者的血清CK-MB陽性1例，陰性20例，特異度95.24%，結(jié)果見表3。

表3 日立7020型全自動生化分析儀檢測結(jié)果

診斷試驗(yàn)評價(jià)指標(biāo)計(jì)算:

(1)靈敏度(SEN)=a/(a+c)=11/41=26.83%

(2)特異度(SPE)=d/(b+d)=20/21=95.24%

2.4 兩種方法檢測CK-MB結(jié)果的比較，見表4。

表4 兩種方法檢測CK-MB結(jié)果的比較

心肌三聯(lián)檢測卡和日立7020型全自動生化分析儀檢測AMA患者的CK-MB陽性率無差別(P＞0.05)。

3 討論

肌鈣蛋白I、肌紅蛋白、肌酸激酶同工酶聯(lián)合檢測卡的實(shí)驗(yàn)原理是一步免疫顯色法，利用夾心法免疫系統(tǒng)結(jié)合分離層析技術(shù)進(jìn)行檢測。樣本中的肌鈣蛋白I、肌紅蛋白、肌酸激酶同工酶任何一個(gè)升高達(dá)到可檢測到的水平時(shí)，可與一種被染料標(biāo)記的特異性單克隆抗體結(jié)合，此復(fù)合物然后被實(shí)驗(yàn)區(qū)包被的特異性單克隆抗體捕獲，在薄膜上形成一條可見的紫紅色色帶，顏色深淺與樣本中分析物的濃度相關(guān)。任何情況質(zhì)控區(qū)均出現(xiàn)一條彩色色帶［13］。

肌鈣蛋白I、肌紅蛋白和肌酸激酶同工酶(CK-MB)是心肌的三種特異性蛋白，它們以及它們的復(fù)合物在發(fā)生心肌梗死后立即釋放到血液中，以發(fā)生心肌梗死后大約6～8 h直到10～15 d均可檢測到較高水平的標(biāo)記物［13］。

肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)聯(lián)合檢測卡的優(yōu)點(diǎn)是:可用于快速檢測。其實(shí)驗(yàn)是一種簡單、快速、易讀取結(jié)果的方法。不需要儀器設(shè)備，此檢測卡包被獨(dú)特的抗體，靈敏度高［13］。肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)聯(lián)合檢測卡用于定性檢測肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)，接收到標(biāo)本后約30 min左右便可得到檢測結(jié)果。其檢測局限性是未能達(dá)到定量檢測。目前，測定肌紅蛋白、肌鈣蛋白臨床普遍采用的是適用于各類生化自動分析儀的膠乳增強(qiáng)透射比濁法;CK-MB的測定當(dāng)前常規(guī)應(yīng)用較多的是電永法和免疫抑制法［10］，需要有一定的儀器設(shè)備，有條件的實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)可以進(jìn)行定量測定肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)。TRAGE，METER快速心肌梗死監(jiān)測儀可在20 min左右得出結(jié)果，一次檢測可同時(shí)測定肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CKMB)［7］。

我們用心肌三聯(lián)合檢測卡定性檢測了41例AMI患者血清中的肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)，結(jié)果顯示:CTnI陽性21例，陽性率為51.00%，Mb陽性36例，陽性率為87.80%，CK-MB陽性9例，陽性率為21.95%;敏感性以血清 Mb最高，CTnI次之，CK-MB 最低［8］，這可能原因是Mb是AMI的早期指標(biāo)，敏感性較高，升高時(shí)間早，發(fā)病后1～2 h MB濃度迅速增加，早于CK-MB和肌鈣蛋白，CK-MB出現(xiàn)于發(fā)病時(shí)間3～8 h，肌鈣蛋白出現(xiàn)于發(fā)病時(shí)間4～8 h［12］;我們用心肌三聯(lián)檢測卡定性檢測了21例健康體檢者血清中的肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)，結(jié)果顯示:Mb，CTnI，皆為陽性:0例，陽性率皆為0%，其可能原因是:健康體健者血清中Mb，CTnI的含量很低［9，13］，未達(dá)到陽性值水平，所以其檢測結(jié)果為陰性，即陽性0例，陽性率0%。CK-MB陽性1例，陽性率4.76%;我們用日立7020型全自動生化分析儀測定了41例AMI患者血清中CK-MB值(≥25IU/ML為陽性)，結(jié)果顯示:陽性11例，陽性率為26.83%。用三聯(lián)檢測卡檢測41例AMI患者血清中CK-MB所得的陽性結(jié)果(21.95%)與用日立7020檢測41例AMI患者血清中CK-MB所得的陽性結(jié)果(26.83%)，陽性率比較無差別(P＞0.05)。靈敏度基本相符，特異度相當(dāng)。用日立7020型全自動生化分析儀測定21例健康體檢者血清中的CK-MB值(大于等于25IU/ML為陽性)，結(jié)果顯示:健康體檢者陽性1例，陽性率為4.76%，對于用心肌三聯(lián)檢測卡檢測和用日立7020型全自動生化分析儀檢測健康體檢者血清中的CK-MB中的1例陽性結(jié)果，其可能原因是:心肌是唯一含CK-MB較多的器官，但CK-MB并不對心肌完全特異，在骨骼肌中也少量存在，外科手術(shù)和骨骼肌疾病時(shí)常出現(xiàn)假陽性［11］。本研究由于條件有限只是對心肌三聯(lián)檢測卡定性所得的CK-MB結(jié)果與用日立7020型全自動生化分析儀所測得的CK-MB結(jié)果進(jìn)行比較，未能對心肌三聯(lián)檢測卡定性所得的肌紅蛋白(Mb)，肌鈣蛋白I(CTnI)結(jié)果與定量檢測所得的結(jié)果進(jìn)行比較。我們從心肌三聯(lián)檢測卡說明書可以獲得某些信息:心肌三聯(lián)檢測卡三項(xiàng)指標(biāo)的靈敏度和臨界值如下:CTnI:1ng/m l;CK-MB:5ng/ml;Mb:70ng/ml［13］。精密度實(shí)驗(yàn):選取 3組不同患者群，使用三個(gè)不同批號產(chǎn)品進(jìn)行雙份實(shí)驗(yàn)。每個(gè)樣本做10次平行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明樣本的雙份檢測100%相符，不同批號的檢測結(jié)果100%的相符［13］。文獻(xiàn)報(bào)道心肌損傷早期標(biāo)志物Mb的判斷值為100μg/L，CK-MB的判斷值為6 μg/L，CTnI的判斷值為 1.0 ～3.5 ug/L［12］。說明心肌三聯(lián)檢測卡有很高的敏感性。本研究所得結(jié)果AMI發(fā)病6 h內(nèi)的Mb(87.0%)，CTnI(51.0%%)，CK-MB(21.95%)的敏感性與文獻(xiàn)報(bào)道的診斷敏感性Mb(90.2%)，CTnI(52.9%)，CKMB(27.45%)［8］略低，其可能原因是:由于肌紅蛋白，肌鈣蛋白，肌酸激酶同工酶在心肌損傷后釋放入血，在血中出現(xiàn)的濃度峰值時(shí)間不一樣，AMI時(shí)心肌損傷標(biāo)志物的時(shí)相變化，AMI診斷可應(yīng)用2類標(biāo)志物，一是早期標(biāo)志物(Mb和CK-MB)，在AMI發(fā)生6 h內(nèi)血中即升高;二是確診標(biāo)志物(CTnI)AMI發(fā)生后6～12 h血中升高［12］。在AMI時(shí)所有生化標(biāo)志物的敏感度都與時(shí)間有關(guān)，對于胸痛發(fā)作4 h以內(nèi)的患者，首先應(yīng)測定Mb水平，3 h后得到的血液標(biāo)本應(yīng)同時(shí)評價(jià)Mb和CTnI，所有陽性結(jié)果都可確認(rèn)為某一時(shí)間段內(nèi)同時(shí)測定肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)，所有陽性結(jié)果都可確認(rèn)AMI，所有陰性結(jié)果都 可排除心肌損傷，當(dāng)結(jié)果不一致時(shí)，需進(jìn)一步聯(lián)合檢查至胸痛發(fā)作后9 h，此時(shí)所有的生化標(biāo)志物都達(dá)到最大的敏感度［10］。

從本研究中我們得出結(jié)論:肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)都是心肌損傷的敏感性指標(biāo)，三者聯(lián)合檢測對早期診斷AMI有著較高的臨床價(jià)值。而使用肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)聯(lián)合檢測卡檢測實(shí)驗(yàn)是一種簡單，快速，易讀取結(jié)果的方法不需要儀器設(shè)備。肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)聯(lián)合檢測卡對AMI的診斷具有較高價(jià)值。

［1］ 賀紀(jì)明，石展鷹.心肌肌鈣蛋白．檢測在急性心肌梗死中的診斷價(jià)值．臨床醫(yī)學(xué)，2004，24(1):9-10．

［2］ 王冀琳．生化標(biāo)志物對急性心肌梗死的診斷價(jià)值．醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐，2007，20(5):519-521．

［3］ 朱偉，趙子彥，靳剛．急性心肌梗死診斷孤生物化學(xué)標(biāo)志物研究進(jìn)展．國外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊，2005，26(2):86-88．

［4］ 吳杏，伍貴富．急性心肌梗死的實(shí)驗(yàn)室檢查．新醫(yī)學(xué)，2005，36(11):630-631．

［5］ 任亞萍，唐愛國．急性心肌梗死的生化標(biāo)志物研究新進(jìn)展．實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2008，15(5):1657-1660．

［6］ 左鷹，賈瑞珍．心肌肌鈣蛋白I、肌鈣蛋白T、肌酸激酶同工酶MB早期診斷急性心肌梗死敏感性及特異性比較分析．中國綜合臨床，2001，17(2):97-98．

［7］ 顧國嶸，黃培志，童朝陽，等．生化標(biāo)志物快速檢測在急性心肌梗死早期診斷中的應(yīng)用評價(jià)．上海醫(yī)藥雜志，2002，25(12):746-748．

［8］ 賈永平，呂吉元，張寄南，等．四種新的心肌損傷標(biāo)記物在急性心肌梗死早期診斷中的比較研究．中國循環(huán)雜志，2002，17(1)(總第113期):27-29．

［9］ 梁日初，翁密霞．心肌肌鈣蛋白I早期診斷急性心肌梗死的價(jià)值．中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2002，12(16):66-67．

［10］ 葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜．全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程/中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司．第3版．南京:東南大學(xué)出版社，2006，10:444-447．

［11］ 鄭鐵生，鄒光楣，章堯，等．臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2004，1:53，251-256．

［12］ 叢玉隆，尹一兵，陳瑜，等．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)高級教程．北京:人民軍醫(yī)出版社，2010，6:723-726．

［13］ 北京九強(qiáng)生物技術(shù)有限公司．肌鈣蛋白I/肌紅蛋白/肌酸激酶同工酶聯(lián)合檢測卡說明書．

［14］ 張曉平．生化標(biāo)志物在急性心肌梗死早期診斷中的應(yīng)用進(jìn)展．檢驗(yàn)與臨床．中國醫(yī)師進(jìn)修雜志，2000，23(9):56-58．