陳世佳

急性心肌梗死(AMI)是急性心肌缺血性壞死，是在冠狀動脈病變的基礎(chǔ)上發(fā)生冠狀動脈血供急劇減少或中斷，使相應的心肌因持久性缺血而發(fā)生的局部壞死［12］。是內(nèi)科急診中常見的重癥病患之一。AMI發(fā)生后，如果在數(shù)小時內(nèi)得不到明確診斷及適當?shù)闹委煟募【蜁毖?、缺氧造成不可逆的壞死，因此，早期診斷并及時有效的治療對減少心肌壞死、改善預后至關(guān)重要［14］。AMI發(fā)生后，心肌損傷的標志物肌鈣蛋白I(CTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌紅蛋白(Mb)可迅速釋放到血液中，檢測這些標志物可為AMI的診斷提供依據(jù)，檢測這些生化標志物需要一定的儀器設備，有些實驗室可能為因為某些原因暫時不能開展這些項目的檢測，我們用肌鈣蛋白I、肌紅蛋白、肌酸激酶同工酶聯(lián)合檢測卡定性檢測AMI患者和健康體檢者血清中CTnI，Mb，CK-MB結(jié)果，同時與我們常規(guī)檢驗的CK-MB結(jié)果比較，了解三聯(lián)檢測卡在診斷急性心肌梗死的診斷價值。旨在找到對實驗條件要求不高，不需要特殊儀器設備、操作方便、實用，實驗結(jié)果快速、準確的檢測CTnI，Mb，CK-MB的方法為臨床對AMI的診斷提供迅速準確的檢驗依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 檢測對象 2009年6月至2010年6月我院住院患者已確診的AMI患者41例，其中，男35例，女6例，年齡25～86歲，民族為漢族;正常對照組為來我院的健康體檢者，21例，年齡31～59歲，其中男17例，女4例。

1.2 儀器、試劑 日立7020型全自動生化分析儀，奧斯邦CK-MB測定試劑(批號:090201;批號:091001);肌鈣蛋白I/肌紅蛋白/肌酸激酶同工梅CK-MB聯(lián)合檢測卡，北京九強生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品(批號:P8092420;批號:P9051903)。

1.3 方法

1.3.1 標本采集 AMI患者發(fā)病后6 h內(nèi)采集靜脈血及時分離血清，定性測定 CTnI、Mb、CK-MB。剩余血清分裝置-20℃冰存，常規(guī)工作時間定量檢測CK-MB。

1.3.2 定性測定CTnI、Mb、CK-MB 使用肌鈣蛋白I/肌紅蛋白/肌酸激酶同工梅CK-MB聯(lián)合檢測卡實驗前，將試劑卡和樣本放置室溫;從錫薄紙包裝的缺口處取出檢測卡，放置到潔凈的平面上，加3滴樣本于樣本孔中;加樣后15 min內(nèi)讀取結(jié)果。結(jié)果讀取:陰性結(jié)果:控制區(qū)(C)出現(xiàn)一條紫色或玫瑰紅色帶，15 min內(nèi)試驗區(qū)(T)不出現(xiàn)色帶。陽性結(jié)果:控制區(qū)和試驗區(qū)15 min內(nèi)各出現(xiàn)一條紫色或玫瑰紅色帶，色帶深淺與檢測物濃度有關(guān)。無效結(jié)果:無論試驗區(qū)有無色帶，控制區(qū)沒有出現(xiàn)色帶［13］。

1.3.3 定量測定CK-MB 用日立7020型全自動生化分析儀、奧斯邦試劑檢測。主要分析參數(shù)按照試劑說明書設置。CK-MB≥25IU/m l為陽性。

2 結(jié)果

2.1 肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)檢測結(jié)果見表1。

2.2 心肌三聯(lián)檢測卡定性檢測 41例AMA患者中CK-MB陽性9例，陰性32例，靈敏度21.95%，21例健康體檢者的血清CK-MB陽性1例，陰性20例，特異度95.24%，結(jié)果見表2。

表1 CTnI、Mb和CK-MB檢測結(jié)果(例，%)

表2 心肌三聯(lián)檢測上卡定性檢測

診斷試驗評價指標計算:

(1)靈敏度(SEN)=a/(a+c)=9/41=21.95%

(2)特異度(SPE)=d/(b+d)=20/21=95.24%

2.3 日立7020型全自動生化分析儀檢測 41例AMA患者中CK-MB陽性11例，陰性30例，靈敏度26.83%，21例健康體檢者的血清CK-MB陽性1例，陰性20例，特異度95.24%，結(jié)果見表3。

表3 日立7020型全自動生化分析儀檢測結(jié)果

診斷試驗評價指標計算:

(1)靈敏度(SEN)=a/(a+c)=11/41=26.83%

(2)特異度(SPE)=d/(b+d)=20/21=95.24%

2.4 兩種方法檢測CK-MB結(jié)果的比較，見表4。

表4 兩種方法檢測CK-MB結(jié)果的比較

心肌三聯(lián)檢測卡和日立7020型全自動生化分析儀檢測AMA患者的CK-MB陽性率無差別(P＞0.05)。

3 討論

肌鈣蛋白I、肌紅蛋白、肌酸激酶同工酶聯(lián)合檢測卡的實驗原理是一步免疫顯色法，利用夾心法免疫系統(tǒng)結(jié)合分離層析技術(shù)進行檢測。樣本中的肌鈣蛋白I、肌紅蛋白、肌酸激酶同工酶任何一個升高達到可檢測到的水平時，可與一種被染料標記的特異性單克隆抗體結(jié)合，此復合物然后被實驗區(qū)包被的特異性單克隆抗體捕獲，在薄膜上形成一條可見的紫紅色色帶，顏色深淺與樣本中分析物的濃度相關(guān)。任何情況質(zhì)控區(qū)均出現(xiàn)一條彩色色帶［13］。

肌鈣蛋白I、肌紅蛋白和肌酸激酶同工酶(CK-MB)是心肌的三種特異性蛋白，它們以及它們的復合物在發(fā)生心肌梗死后立即釋放到血液中，以發(fā)生心肌梗死后大約6～8 h直到10～15 d均可檢測到較高水平的標記物［13］。

肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)聯(lián)合檢測卡的優(yōu)點是:可用于快速檢測。其實驗是一種簡單、快速、易讀取結(jié)果的方法。不需要儀器設備，此檢測卡包被獨特的抗體，靈敏度高［13］。肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)聯(lián)合檢測卡用于定性檢測肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)，接收到標本后約30 min左右便可得到檢測結(jié)果。其檢測局限性是未能達到定量檢測。目前，測定肌紅蛋白、肌鈣蛋白臨床普遍采用的是適用于各類生化自動分析儀的膠乳增強透射比濁法;CK-MB的測定當前常規(guī)應用較多的是電永法和免疫抑制法［10］，需要有一定的儀器設備，有條件的實驗室已經(jīng)可以進行定量測定肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)。TRAGE，METER快速心肌梗死監(jiān)測儀可在20 min左右得出結(jié)果，一次檢測可同時測定肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CKMB)［7］。

我們用心肌三聯(lián)合檢測卡定性檢測了41例AMI患者血清中的肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)，結(jié)果顯示:CTnI陽性21例，陽性率為51.00%，Mb陽性36例，陽性率為87.80%，CK-MB陽性9例，陽性率為21.95%;敏感性以血清 Mb最高，CTnI次之，CK-MB 最低［8］，這可能原因是Mb是AMI的早期指標，敏感性較高，升高時間早，發(fā)病后1～2 h MB濃度迅速增加，早于CK-MB和肌鈣蛋白，CK-MB出現(xiàn)于發(fā)病時間3～8 h，肌鈣蛋白出現(xiàn)于發(fā)病時間4～8 h［12］;我們用心肌三聯(lián)檢測卡定性檢測了21例健康體檢者血清中的肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)，結(jié)果顯示:Mb，CTnI，皆為陽性:0例，陽性率皆為0%，其可能原因是:健康體健者血清中Mb，CTnI的含量很低［9，13］，未達到陽性值水平，所以其檢測結(jié)果為陰性，即陽性0例，陽性率0%。CK-MB陽性1例，陽性率4.76%;我們用日立7020型全自動生化分析儀測定了41例AMI患者血清中CK-MB值(≥25IU/ML為陽性)，結(jié)果顯示:陽性11例，陽性率為26.83%。用三聯(lián)檢測卡檢測41例AMI患者血清中CK-MB所得的陽性結(jié)果(21.95%)與用日立7020檢測41例AMI患者血清中CK-MB所得的陽性結(jié)果(26.83%)，陽性率比較無差別(P＞0.05)。靈敏度基本相符，特異度相當。用日立7020型全自動生化分析儀測定21例健康體檢者血清中的CK-MB值(大于等于25IU/ML為陽性)，結(jié)果顯示:健康體檢者陽性1例，陽性率為4.76%，對于用心肌三聯(lián)檢測卡檢測和用日立7020型全自動生化分析儀檢測健康體檢者血清中的CK-MB中的1例陽性結(jié)果，其可能原因是:心肌是唯一含CK-MB較多的器官，但CK-MB并不對心肌完全特異，在骨骼肌中也少量存在，外科手術(shù)和骨骼肌疾病時常出現(xiàn)假陽性［11］。本研究由于條件有限只是對心肌三聯(lián)檢測卡定性所得的CK-MB結(jié)果與用日立7020型全自動生化分析儀所測得的CK-MB結(jié)果進行比較，未能對心肌三聯(lián)檢測卡定性所得的肌紅蛋白(Mb)，肌鈣蛋白I(CTnI)結(jié)果與定量檢測所得的結(jié)果進行比較。我們從心肌三聯(lián)檢測卡說明書可以獲得某些信息:心肌三聯(lián)檢測卡三項指標的靈敏度和臨界值如下:CTnI:1ng/m l;CK-MB:5ng/ml;Mb:70ng/ml［13］。精密度實驗:選取 3組不同患者群，使用三個不同批號產(chǎn)品進行雙份實驗。每個樣本做10次平行實驗。結(jié)果表明樣本的雙份檢測100%相符，不同批號的檢測結(jié)果100%的相符［13］。文獻報道心肌損傷早期標志物Mb的判斷值為100μg/L，CK-MB的判斷值為6 μg/L，CTnI的判斷值為 1.0 ～3.5 ug/L［12］。說明心肌三聯(lián)檢測卡有很高的敏感性。本研究所得結(jié)果AMI發(fā)病6 h內(nèi)的Mb(87.0%)，CTnI(51.0%%)，CK-MB(21.95%)的敏感性與文獻報道的診斷敏感性Mb(90.2%)，CTnI(52.9%)，CKMB(27.45%)［8］略低，其可能原因是:由于肌紅蛋白，肌鈣蛋白，肌酸激酶同工酶在心肌損傷后釋放入血，在血中出現(xiàn)的濃度峰值時間不一樣，AMI時心肌損傷標志物的時相變化，AMI診斷可應用2類標志物，一是早期標志物(Mb和CK-MB)，在AMI發(fā)生6 h內(nèi)血中即升高;二是確診標志物(CTnI)AMI發(fā)生后6～12 h血中升高［12］。在AMI時所有生化標志物的敏感度都與時間有關(guān)，對于胸痛發(fā)作4 h以內(nèi)的患者，首先應測定Mb水平，3 h后得到的血液標本應同時評價Mb和CTnI，所有陽性結(jié)果都可確認為某一時間段內(nèi)同時測定肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)，所有陽性結(jié)果都可確認AMI，所有陰性結(jié)果都 可排除心肌損傷，當結(jié)果不一致時，需進一步聯(lián)合檢查至胸痛發(fā)作后9 h，此時所有的生化標志物都達到最大的敏感度［10］。

從本研究中我們得出結(jié)論:肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)都是心肌損傷的敏感性指標，三者聯(lián)合檢測對早期診斷AMI有著較高的臨床價值。而使用肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)聯(lián)合檢測卡檢測實驗是一種簡單，快速，易讀取結(jié)果的方法不需要儀器設備。肌鈣蛋白I(CTnI)、肌紅蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)聯(lián)合檢測卡對AMI的診斷具有較高價值。

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