龐琳娜,張江安,于建斌,甄 希,徐文博

鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院皮膚科鄭州 450052

#通訊作者,男,1962年5月生,博士,教授,主任醫(yī)師,研究方向:皮膚腫瘤,E-mail:yjbdoctor@sina.com

干細胞再生因子 Bm i-1是一種轉(zhuǎn)錄抑制因子,屬于轉(zhuǎn)錄因子多梳基因家族,在胚胎發(fā)育、神經(jīng)干細胞及白血病干細胞的維持和自我更新過程中發(fā)揮關(guān)鍵的調(diào)控作用[1-3]。近年研究[4-6]表明,Bmi-1的高表達與多種腫瘤干細胞的自我更新及腫瘤的侵襲性關(guān)系密切。增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)是真核生物復(fù)制復(fù)合體的重要成分,具有協(xié)調(diào)DNA復(fù)制、調(diào)控細胞周期等多種生物學(xué)功能,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展和惡性程度相關(guān)[7-9]。作者應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測惡性黑素瘤(malignantmelanome,MM)、皮內(nèi)痣組織中Bmi-1及PCNA蛋白的表達情況,探討二者在MM發(fā)生發(fā)展中的意義。

1 材料與方法

1.1 標本收集 從鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科2007年 1月至 2009年 9月存檔蠟塊中挑選病理診斷明確、臨床資料完整的標本共66例。其中MM 36例[男 19例,女17例,年齡 32～87(61.4±12.9)歲,病程4.0～28.0(15.7±7.1)個月;26例皮膚原發(fā)性黑素瘤,10例皮膚及皮外轉(zhuǎn)移性黑素瘤],皮內(nèi)痣 30例[男 14例,女 16例,年齡 8～72(25.34± 22.81)歲,病程3.0～58.0(30.9±15.0)個月]。所有病例術(shù)前均未行化療或其他治療。

1.2 Bmi-1及PCNA的免疫組化SP法檢測 鼠抗人Bmi-1單克隆抗體(即用型)購自美國Upstate公司,PCNA單克隆抗體(即用型)、SP-9000免疫組化試劑盒和AEC顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。按照說明書步驟操作。用PBS液代替一抗作空白對照,用已知的陽性片作為陽性對照。光學(xué)顯微鏡下觀察組織標本的著色程度。Bmi-1與PCNA蛋白陽性表達均定位于細胞核內(nèi),呈紅色顆粒狀。高倍鏡下取 4個不同的視野,計數(shù)細胞總數(shù)及陽性細胞數(shù)[10]。按陽性細胞所占的百分比計分:陽性細胞率 ＜10%為 1分,10%～為 2分,50%～為3分,75%～為4分;按染色的強弱程度計分:陰性染色計為 1分,弱染色計為 2分,中等強度染色計為 3分,強染色計為 4分。根據(jù)二者的乘積判斷結(jié)果,＞4分為陽性表達。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 16.0進行分析,應(yīng)用χ2檢驗、Fisher精確概率法比較MM和皮內(nèi)痣組織中Bmi-1、PCNA蛋白陽性表達率,應(yīng)用列聯(lián)系數(shù)rP分析MM組織中Bm i-1與PCNA蛋白表達的關(guān)聯(lián)性。檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 2種組織中Bmi-1及PCNA蛋白的表達 Bmi-

1和PCNA蛋白主要在腫瘤細胞的胞核中表達,見圖1。MM、皮內(nèi)痣組織中Bm i-1蛋白的陽性表達率分別為61.1%(22/36)、20.0%(6/30),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=11.323,P=0.001);PCNA蛋白的陽性表達率分別為80.6%(29/36)、10.0%(3/30),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=32.614,P＜0.001)。原發(fā)性黑素瘤和轉(zhuǎn)移性黑素瘤組織中Bmi-1蛋白的陽性表達率分別為57.3%(15/26)和70.0%(7/10)、Bmi-1蛋白的陽性表達率分別為73.1%(19/26)和100.0%(10/10),差 異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.706和0.155)。

圖1 2種組織中Bm i-1及PCNA蛋白的表達

2.2 MM組織中Bm i-1與PCNA蛋白表達的關(guān)聯(lián)性 見表1。

表1 MM組織中Bm i-1及PCNA陽性表達的關(guān)聯(lián)性 例

3 討論

作者的研究結(jié)果顯示,MM組織中Bmi-1蛋白的表達高于皮內(nèi)痣組織,與文獻[11]報道結(jié)果一致。原發(fā)性黑素瘤和轉(zhuǎn)移性黑素瘤組織中Bmi-1蛋白的陽性表達率差異無統(tǒng)計學(xué)意義,提示 Bmi-1與MM轉(zhuǎn)移可能沒有直接關(guān)系,但由于病例數(shù)偏少,尚需進一步證實。另一方面,由于 Bmi-1已作為干細胞標志在多種腫瘤干細胞表達,該課題組前期的研究結(jié)果已提示干細胞標志物CD133、Nestin和CD 44以及腫瘤多藥耐藥基因 ABCG2[10-13]均在 MM中高表達,結(jié)合該研究再次提示 MM中可能存在腫瘤干細胞。

該研究結(jié)果顯示,MM組織中PCNA的陽性表達率高于皮內(nèi)痣組織,但原發(fā)性黑素瘤與轉(zhuǎn)移性黑素瘤組織間其陽性表達率差異無統(tǒng)計學(xué)意義,提示二者之間的細胞增殖程度類似。

另外,該研究結(jié)果還顯示MM組織中Bmi-1與PCNA蛋白的表達有關(guān),也即Bmi-1的高表達與腫瘤細胞的增生活躍相一致。因此推測Bmi-1和PCNA參與了MM的發(fā)生發(fā)展。

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