宋曉榮,千智斌,姬明麗

1)新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室新鄉(xiāng) 453003 2)新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)室新鄉(xiāng) 453003

△女,1963年7月生,本科,副教授,研究方向:基本節(jié)律性呼吸發(fā)生調(diào)劑機(jī)制,E-mail:sxrong308@163.com

丙泊酚由于起效快、清除迅速和不良反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn)近年來(lái)被廣泛應(yīng)用于臨床麻醉,但存在抑制呼吸的不良反應(yīng),表現(xiàn)為潮氣量減少,清醒狀態(tài)時(shí)可使呼吸頻率增加及靜脈注射常發(fā)生呼吸暫停等現(xiàn)象[1]。尼可剎米臨床上常用做非特異性呼吸興奮劑,可直接興奮延髓呼吸中樞,也可通過(guò)刺激頸動(dòng)脈體和主動(dòng)脈體化學(xué)感受器反射性興奮呼吸中樞,提高呼吸中樞對(duì) CO2的敏感性,增加中樞吸氣驅(qū)動(dòng)[2]。為明確尼可剎米對(duì)丙泊酚所引起的呼吸中樞抑制有無(wú)拮抗作用,作者采用新生大鼠延髓腦片,通過(guò)記錄腦片產(chǎn)生的基本節(jié)律性呼吸放電觀察尼可剎米對(duì)丙泊酚的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與試劑 SD大鼠 6只,日齡 1～3 d,體質(zhì)量(4.7±0.9)g,雌雄不限,由新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。尼可剎米、丙泊酚購(gòu)自Sigma公司,其余試劑為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 離體延髓腦片標(biāo)本的制作 參考Suzue[3]的方法制作大鼠離體延髓-脊髓標(biāo)本。大鼠用乙醚麻醉后在 C3～C4節(jié)段斷頭,在延髓-腦橋間迅速橫斷腦干,去除顱骨及腦橋以上的腦組織,剪開(kāi)延髓背側(cè)顱骨,小心分離至 C1～C2段脊髓,游離出延髓-脊髓,完整保留舌下神經(jīng)根。整個(gè)過(guò)程均在持續(xù)充以體積分?jǐn)?shù)95%O2和5%CO2的0℃改良Kreb's液(MKS)中進(jìn)行,3min內(nèi)完成標(biāo)本制作。迅速將標(biāo)本頭端向上移至切片槽內(nèi),腹側(cè)面朝向刀刃,刀刃朝向頭端傾斜20°,在閂前 600μm至閂后 100μm間切下延髓腦片(含舌下神經(jīng)根)。將腦片置于灌流槽內(nèi),以MKS(2～4 mL/m in)持續(xù)灌流,保持pH 7.35～7.45,溫度 27～29℃。用內(nèi)含銀-氯化銀的吸附電極加以負(fù)壓吸附舌下神經(jīng)根,將呼吸相關(guān)節(jié)律性放電活動(dòng)(RRDA)經(jīng)直流前置放大器放大后輸入BL-420F生物信號(hào)采集和處理系統(tǒng)進(jìn)行記錄和分析。

1.3 分組與處理及觀測(cè)指標(biāo) 6個(gè)穩(wěn)定記錄到RRDA的新生大鼠延髓腦片標(biāo)本先用MKS灌流腦片15min(T0),后用含40μmol/L丙泊酚的MKS灌流腦片20 min(T1),然后洗脫,待RRDA基本恢復(fù)后用含40μmol/L丙泊酚加5 mg/L尼可剎米的MKS灌流腦片20 min(T2),記錄3個(gè)給藥階段舌下神經(jīng)根RRDA,分析RRDA吸氣時(shí)程(TI)、放電幅度積分(IA)和呼吸周期(RC)的變化。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0進(jìn)行分析。應(yīng)用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析比較 3個(gè)給藥階段 TI、IA和RC的差異,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

3個(gè)給藥階段TI、IA和RC比較結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 3個(gè)給藥階段TI、IA和RC比較(n=6)

3 討論

該研究是在離體的延髓腦片上進(jìn)行的。雖然離體腦片失去了高位中樞的調(diào)節(jié)作用,缺少了在體時(shí)的外周反饋性輸入,它的環(huán)境溫度也不同于在體動(dòng)物的腦脊液溫度,并且腦片上舌下神經(jīng)的放電周期明顯長(zhǎng)于在體動(dòng)物的呼吸周期,但兩者呼吸運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的活動(dòng)形式極為相仿[4];而且,延髓腹側(cè)不同類別呼吸神經(jīng)元的空間分布和沖動(dòng)發(fā)放的時(shí)序先后都與在體情況相似[5]。這些均表明離體延髓腦片對(duì)于研究呼吸節(jié)律的產(chǎn)生和調(diào)節(jié)機(jī)制是良好的簡(jiǎn)化標(biāo)本。作者在預(yù)實(shí)驗(yàn)中使用6個(gè)延髓腦片標(biāo)本,以MKS灌流70min,分別在10、20、30、40、50和60min時(shí)測(cè)量連續(xù)6個(gè)RRDA的TI、IA和RC,重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析顯示不同時(shí)間點(diǎn) 3個(gè)指標(biāo)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明該實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ头€(wěn)定可靠。

丙泊酚的麻醉作用是通過(guò)激活 γ-氨基丁酸 A (GABAA)受體而實(shí)現(xiàn),激活GABAA受體對(duì)新生大鼠延髓腦片基本節(jié)律性呼吸放電有抑制作用[6]。臨床劑量的丙泊酚可增強(qiáng)GABAA受體的氯離子傳導(dǎo),使神經(jīng)元超級(jí)化,從而抑制神經(jīng)元的興奮性而達(dá)到麻醉效果[7]。也有報(bào)道[8]丙泊酚可抑制神經(jīng)元鈉電流。該研究結(jié)果示丙泊酚可縮短TI,降低 IA,延長(zhǎng)RC,說(shuō)明丙泊酚對(duì)呼吸放電有抑制作用,與上述文獻(xiàn)相符。研究[9]顯示,尼可剎米可通過(guò) ROS促使PKC的活性增加,PKC抑制GABAA受體活性從而產(chǎn)生興奮作用;此外,尼可剎米可增加新生大鼠海馬神經(jīng)元鈉電流[10]。該研究結(jié)果顯示尼可剎米可使IT、IA升高,恢復(fù)到正常水平,而對(duì)RC無(wú)影響,說(shuō)明尼可剎米可能通過(guò)上述機(jī)制拮抗了丙泊酚對(duì)延髓腦片RRDA的抑制作用。

綜上所述,丙泊酚對(duì)新生大鼠延髓呼吸中樞有抑制作用,尼可剎米可部分拮抗該抑制作用。

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