劉青,袁鋒,王碧雪,王仁峰

(大連海洋大學(xué)遼寧省水生生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,遼寧大連116023)

強(qiáng)壯箭蟲的染色體核型分析

劉青,袁鋒,王碧雪,王仁峰

(大連海洋大學(xué)遼寧省水生生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,遼寧大連116023)

以強(qiáng)壯箭蟲Sagitta crassa為試驗(yàn)材料,采用秋水仙素溶液浸泡、冷滴片、空氣干燥及Giemsa染色等方法,對(duì)其染色體核型進(jìn)行了分析。結(jié)果表明:強(qiáng)壯箭蟲有9對(duì)染色體,其中6對(duì)為中部著絲點(diǎn)染色體(M);1對(duì)為亞中部著絲點(diǎn)染色體(SM);2對(duì)為端著絲粒染色體(T);其核型公式為2n=18=12M+2SM+ 4T。文中還比較了兩種箭蟲的染色體核型的差異。

強(qiáng)壯箭蟲;染色體;核型

有關(guān)浮游動(dòng)物染色體的研究,國(guó)外主要集中在20世紀(jì)70年代以后,其中對(duì)橈足類染色體的研究最多,如Goswami等[1-3]先后對(duì)60多種橈足類的染色體進(jìn)行了研究。國(guó)內(nèi)關(guān)于浮游動(dòng)物染色體的研究不多,截至2009年僅對(duì)20種浮游動(dòng)物的染色體數(shù)目及組型進(jìn)行了研究[4-13],其中鹵蟲1種[5],水母類4種[5],橈足類7種[6-8],枝角類7種[4,9-12]。關(guān)于毛顎動(dòng)物染色體的研究,僅見對(duì)百陶箭蟲Sagitta bedoti的研究報(bào)道[13]。強(qiáng)壯箭蟲隸屬于毛顎動(dòng)物門、箭蟲綱,主要分布于北太平洋西部,是黃、渤海浮游動(dòng)物的優(yōu)勢(shì)種[14]。毛顎動(dòng)物屬于肉食性動(dòng)物,以橈足類等小型浮游動(dòng)物為食,同時(shí)它又是許多游泳生物的優(yōu)質(zhì)餌料,在海洋生態(tài)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)與功能中起著重要的調(diào)控作用。但在毛顎動(dòng)物的進(jìn)化地位和系統(tǒng)分類中常出現(xiàn)混亂的現(xiàn)象[15]。本試驗(yàn)中,作者對(duì)強(qiáng)壯箭蟲Sagitta crassa的染色體組型進(jìn)行了研究,旨在為解決毛顎動(dòng)物的分類學(xué)中的某些疑難問題及了解強(qiáng)壯箭蟲的遺傳學(xué)背景提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 材料

強(qiáng)壯箭蟲于2010年4月采自大連市黑石礁海區(qū)。采回樣品后立即在體式解剖鏡下進(jìn)行分類鑒定。選取健壯無畸形的個(gè)體在室內(nèi)暫養(yǎng)一周,并投喂蒙古裸腹溞。試驗(yàn)前挑選活力強(qiáng),體長(zhǎng)為11～ 15 mm的個(gè)體20條,先饑餓12 h,使其排空消化道內(nèi)的食物殘?jiān)?/p>

1.2 方法

1.2.1 體細(xì)胞染色體標(biāo)本的制備 選取10條活力強(qiáng)且通體透明、消化道內(nèi)無食物殘留的蟲體,置于含體積分?jǐn)?shù)為0.04%秋水仙素的海水溶液中30 h,再?gòu)闹羞x取5條活力強(qiáng)的個(gè)體置于0.1 mol/L的KCl溶液中,4℃下低滲處理120 min。取出蟲體,在新配制且在4℃下預(yù)冷的卡諾氏液(φ(無水甲醇)∶φ(冰乙酸)=3∶1)中固定3次,前2次每隔5 min更換固定液,第3次固定后放入冰箱(-20℃)中冷凍12 h。將蟲體轉(zhuǎn)移至潔凈預(yù)冷的表面皿中,在解剖鏡下迅速切除尾節(jié),挑除卵巢。將去除尾節(jié)與卵巢的蟲體轉(zhuǎn)入-20℃下預(yù)冷的體積分?jǐn)?shù)為60%的冰乙酸中,然后切成2～3 mm長(zhǎng)度的小段浸泡軟化30 min。軟化完畢后用移液槍小心吹打數(shù)次,使細(xì)胞分散成細(xì)胞懸液。吸取細(xì)胞懸液在預(yù)冷的玻片上方約50 cm處進(jìn)行滴片,然后置于酒精燈下微烤,烤干后在體積分?jǐn)?shù)為10%的Giemsa染液(用pH為6.8的磷酸緩沖液稀釋)中染色40 min。用凈水小心沖去染液,在空氣中干燥后用中性樹脂封片。

1.2.2 精巢染色體的制備 取制備體細(xì)胞染色體標(biāo)本余下的尾節(jié)在體積分?jǐn)?shù)為60%預(yù)冷的冰乙酸中軟化10 min。用解剖針小心撕裂尾腔,輕輕擠壓尾腔,使腔內(nèi)成團(tuán)的精細(xì)胞流出,再用移液槍輕輕

吹打使細(xì)胞分散均勻,滴片染色,方法同體細(xì)胞染色體制備。

1.2.3 染色體核型分析 在Olympus顯微鏡下觀察,選擇染色體分散良好、形態(tài)清晰的分裂相進(jìn)行顯微照相。統(tǒng)計(jì)體細(xì)胞、精巢細(xì)胞分裂相染色體數(shù)目。選取清晰的照片,使用Photoshop軟件進(jìn)行染色體測(cè)量[16],根據(jù)染色體大小依次編號(hào)并排列成核型圖。按以下公式計(jì)算所測(cè)染色體的相對(duì)長(zhǎng)度、臂比值和著絲點(diǎn)指數(shù),并按Levan等[17]的標(biāo)準(zhǔn)劃分染色體形態(tài)類型。

2 結(jié)果

2.1 染色體數(shù)目

在顯微鏡下檢查強(qiáng)壯箭蟲體細(xì)胞染色體分散較好的分裂相有56個(gè)。從表1可見:其染色體眾數(shù)為18條的細(xì)胞有29個(gè),占51.8%;少于18條的細(xì)胞數(shù)有25個(gè),占44.6%;多于18條的有2個(gè),占3.6%?；谝陨蠑?shù)據(jù)初步確定,強(qiáng)壯箭蟲的二倍體染色數(shù)目為2n=18。

從表2可見,共統(tǒng)計(jì)強(qiáng)壯箭蟲精巢細(xì)胞分裂相有137個(gè),其染色體眾數(shù)為9的細(xì)胞有42個(gè),占30.7%;染色體數(shù)為18的細(xì)胞有11個(gè),占8.0%。這也證明強(qiáng)壯箭蟲的二倍體染色數(shù)目為2n=18; 21個(gè)細(xì)胞染色體為36個(gè)的4n分裂相,占15.3%。

表1 強(qiáng)壯箭蟲體細(xì)胞的染色體數(shù)目Tab.1 The chromosome number in body cells in Sagitta crassa

表2 強(qiáng)壯箭蟲精巢細(xì)胞的染色體數(shù)目Tab.2 The chromosome number of testis cells in Sagitta crassa

2.2 染色體核型

測(cè)定并分析10個(gè)分裂相的染色體核型(圖1、2),按照Levan[17]分類標(biāo)準(zhǔn),強(qiáng)壯箭蟲9對(duì)染色體可分為三組類型:6對(duì)為中部著絲點(diǎn)染色體(M), 1對(duì)為亞中部著絲點(diǎn)染色體(SM),2對(duì)為端部著絲點(diǎn)染色體(T)。故強(qiáng)壯箭蟲的核型公式為2n= 18=12M+2SM+4T。表3中的編號(hào)是按染色體的相對(duì)長(zhǎng)度從大到小排列而成。

表3 強(qiáng)壯箭蟲的染色體核型分析測(cè)量Tab.3 Measurements of karyotypes in Sagitta crassa

圖1 強(qiáng)壯箭蟲的體細(xì)胞核型Fig.1 Metaphase chromosome and karoytype in body cells in Sagitta crassa

圖2 強(qiáng)壯箭蟲的次級(jí)精母細(xì)胞核型Fig.2 Metaphase chromosome and karoytypes in the secondary spermatocytes

3 討論

3.1 毛顎動(dòng)物染色體核型的制備方法

目前有關(guān)毛顎動(dòng)物核型的研究報(bào)道很少,主要是由于制備毛顎動(dòng)物染色體標(biāo)本比較困難。目前常用于染色體核型分析的動(dòng)物細(xì)胞主要有四種:首先是用植物凝集素(PHA)處理動(dòng)物后取得的血細(xì)胞,常用于魚類、小鼠等脊椎動(dòng)物;其次是胚胎細(xì)胞,常用于不易取得血液的小型動(dòng)物,如蝦、蟹等甲殼類;再是動(dòng)物新生組織細(xì)胞,常用于那些具有高度再生能力的動(dòng)物,如渦蟲、水蛭等;最后是體細(xì)胞,常用于世代周期短、體細(xì)胞分裂頻率高的小型動(dòng)物,如浮游生物中的枝角類與橈足類。

強(qiáng)壯箭蟲的體型較小,成體為1～2 cm,無血液循環(huán)系統(tǒng),常用的制備具有大量分裂期細(xì)胞的方法均不適用。因此,制備具有高分裂比例的細(xì)胞群是該類動(dòng)物核型分析的關(guān)鍵。多次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),采用降低秋水仙素濃度、延長(zhǎng)處理時(shí)間的方法會(huì)提高處于分期細(xì)胞的比例,但長(zhǎng)時(shí)間處理可能會(huì)導(dǎo)致染色體高度螺旋,不利于核型分析。本試驗(yàn)中采用低秋水仙素濃度(體積分?jǐn)?shù)為0.04%)并浸泡30 h的處理方法。由于處理時(shí)間長(zhǎng),得到的分裂相大部分染色體高度濃縮,可用于染色體計(jì)數(shù),但若對(duì)染色體組進(jìn)行分帶染色等進(jìn)一步的核型分析,還需要改進(jìn)制片方法。在制備強(qiáng)壯箭蟲精巢染色體標(biāo)本時(shí),要挑選尾腔中有大量的性細(xì)胞團(tuán)隨尾腔液一起流動(dòng)的個(gè)體,此類個(gè)體精巢發(fā)育處于第三時(shí)期,精巢細(xì)胞分裂旺盛,制片效果最好。另外,值得一提的是,在精巢染色體中還觀測(cè)到21個(gè)細(xì)胞染色體為36個(gè)的4n分裂相,占15.3%(圖3)。由于制備精巢染色體標(biāo)本時(shí)采用的是整個(gè)尾節(jié),因此,這部分分裂相除了初級(jí)精母細(xì)胞外還可能含有體細(xì)胞。

3.2 與其它毛顎動(dòng)物核型分析的比較

本試驗(yàn)結(jié)果表明,強(qiáng)壯箭蟲染色體數(shù)目為2n= 18,這與Bone等[18]在《毛顎動(dòng)物生物學(xué)》中記述的肥胖箭蟲S.enflata染色體數(shù)目(2n=18)一致。

曹文清等[13]對(duì)百陶箭蟲染色體的核型進(jìn)行了分析,結(jié)果為2n=16,與強(qiáng)壯箭蟲接近。進(jìn)一步比較強(qiáng)壯箭蟲與百陶箭蟲的核型,發(fā)現(xiàn)兩者核型非常相似。百陶箭蟲的8對(duì)染色體中,5對(duì)為中部著絲點(diǎn)染色體;1對(duì)為亞中部著絲點(diǎn)染色體;2對(duì)為亞端部著絲點(diǎn)染色體。即兩者都有一條亞中部著絲點(diǎn)染色體,兩條端部或亞端部著絲點(diǎn)染色體,僅相差一條中部著絲點(diǎn)染色體。

圖3 強(qiáng)壯箭蟲出現(xiàn)的4n分裂相Fig.3 Metaphase tetraploid chromosome in Sagitta crassa

毛顎動(dòng)物的結(jié)構(gòu)特殊,同種個(gè)體隨環(huán)境變化常發(fā)生明顯的形態(tài)變化,其進(jìn)化地位、系統(tǒng)分類常出現(xiàn)混亂現(xiàn)象[15],強(qiáng)壯箭蟲染色體數(shù)目與肥胖箭蟲一致,核型與百陶箭蟲接近。這顯示了彼此間的親緣關(guān)系,同時(shí)也顯示了種間的差異。當(dāng)然,地理位置和生活環(huán)境的改變會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物染色體出現(xiàn)多態(tài)現(xiàn)象。對(duì)毛顎動(dòng)物箭蟲綱的各種類進(jìn)行進(jìn)一步的核型分析研究,將有助于解決毛顎動(dòng)物分類學(xué)中的某些疑難問題,這是一項(xiàng)非常有意義的工作。

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Analysis of chromosome karyotypes in Chaetognath Sagitta crassa

LIU Qing,YUAN Feng,WANG Bi-xue,WANG Ren-feng
(Key Laboratory of Hydrobiology in Liaoning Province,Dalian Ocean University,Dalian 116023,China)

The chromosome karyotypes of Chaetognath Sagitta crassa,a popular zooplankton species in the Yellow Sea and the Bohai Sea,were studied in the samples collected in Heshijiao bay in April of 1995 by means of cooldropping method.The results showed that the metaphase chromosome number of the samples were found n=9,2n= 18,with karyotypic formula 2n=12M+2SM+4T.A comparison,analysis and discussion on the chromosome karyotypes of the Chaetognaths Sagitta crassa and Sagitta enflata were submitted.

Sagitta crassa;chromosome;karyotype

2095-1388(2011)03-0260-04

Q178.53;Q343.2

A

2010-08-18

遼寧省教育廳創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(2008T022)

劉青(1965-),女,副教授。E-mail:liuqing@dlou.edu.cn