王紅麗,劉麗花

(河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部,河南鄭州 450000)

通氣聰耳丸是我院院內(nèi)制劑(注冊(cè)批件號(hào): 2004Z00774),由粉葛、丹參、川芎、全蝎等12味中藥組成,具有行氣開(kāi)竅功能,臨床用于治療耳鳴、耳聾、耳脹、耳閉等氣血虛瘀阻竅絡(luò)型疾病。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有其薄層鑒別。為了更好地控制該制劑的質(zhì)量,本文采用高效液相色譜法對(duì)葛根素的含量進(jìn)行測(cè)定,以期為該藥的質(zhì)量控制提供更有效的方法。

1 藥品、試劑與儀器

通氣聰耳丸(批號(hào) 090428,100106,100317)由醫(yī)院制劑室提供,中藥飲片由醫(yī)院中藥房提供。葛根素對(duì)照品,由中國(guó)生物制品檢定所提供,批號(hào)110752-200511;甲醇為色譜純;水為純凈水;其他化學(xué)試劑均為分析純。島津LC-10AT VP型高效液相色譜儀,產(chǎn)地日本;SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器,產(chǎn)地日本;CLASS-VP色譜工作站,產(chǎn)地日本;Aglient E-clipse XDB-C18色譜柱(4.6mm×250 mm,5μm),產(chǎn)地美國(guó);超聲波清洗器,昆山市超聲儀器有限公司產(chǎn)品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Aglient Eclipse XDB-C18柱(4.6mm× 250mm,5μm),流動(dòng)相為甲醇-水(25∶75),檢測(cè)波長(zhǎng)250 nm,流速1.0 m L/min,柱溫30℃,進(jìn)樣量10μL。理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000[1]。

2.2 供試品溶液的制備

取本品研細(xì),取約3 g,精密稱定,置50m L容量瓶中,加入30%乙醇超聲提取30min,過(guò)濾,取續(xù)濾液即得。進(jìn)樣前過(guò)微孔濾膜即可。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

取葛根素對(duì)照品適量,精密稱定,加 30%乙醇溶解,制成每1 mL含葛根素82μg的溶液,即得葛根素對(duì)照品溶液。

2.4 陰性對(duì)照試驗(yàn)

按處方比例稱取除葛根以外的其余藥材,按通氣聰耳丸制備工藝制備,按 2.2項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液。將供試品溶液、陰性對(duì)照溶液及葛根素對(duì)照品溶液分別注入液相色譜儀,按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果:陰性無(wú)干擾。見(jiàn)圖 1。

圖1 通氣聰耳丸色譜圖

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別精密吸取上述葛根素對(duì)照品溶液 2,4,6,8, 10,12,14μL,按上述色譜條件測(cè)定。以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程分別為Y=3.60×106X+4 371.47(γ=0.999 9)。結(jié)果表明,葛根素進(jìn)樣量在0.164～1.148μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn)

吸取同—份供試品溶液,連續(xù)進(jìn)樣 6次,按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果葛根素峰面積RSD為0.35%,表明方法精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品適量,按 2.3項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液,按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果:葛根素平均含量為0.34mg/g,RSD為0.22%。結(jié)果表明,方法重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液,按上述色譜條件分別于 0,2, 4,6,8測(cè)定葛根素面積積分值。結(jié)果:葛根素的RSD值為0.83%。結(jié)果表明,供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取同一供試品 (批號(hào)100317)6份,每份精密稱取1.5 g,分別加入82mg/L的葛根素對(duì)照品溶液6mL,按 2.2項(xiàng)下方法制得供試品溶液,進(jìn)樣測(cè)定,計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表 1。葛根素平均回收率為97.9%,RSD為1.7%(n=6)。

2.10 樣品含量測(cè)定

分別取 3批通氣聰兒樣品(090428,100106, 100317),按 2.2項(xiàng)下方法制得供試品溶液,進(jìn)樣測(cè)定,按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果:3批樣品中葛根素含量分別為0.28,0.41,0.34mg/g。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 討 論

筆者對(duì)供試品溶液的制備方法進(jìn)行了考察,分別是以30%乙醇加熱回流30min、30%乙醇超聲處理30m in、甲醇超聲30min。結(jié)果:30%乙醇加熱回流和超聲處理所得供試品葛根素含量差別不大,甲醇超聲處理提取率較低。鑒于超聲提取較為方便,且重復(fù)性好,故供試品采用 30%乙醇超聲處理方法提取制備供試品溶液。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:一部[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:272.