馬新方,李 勇

(1.鄭州市婦幼保健院 ,河南鄭州 450053;2.河南中醫(yī)學(xué)院,河南鄭州 450008)

魚(yú)腥草(Houttuynia cordata Thunb.)又名蕺菜、側(cè)耳根,為三白草科蕺菜屬多年生草本植物,具有清熱解毒、消腫排膿、利尿通淋的作用,臨床上用于痰熱咳喘、熱淋等癥[1]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,魚(yú)腥草多糖具有較好的體外抗氧化活性,對(duì)羥自由基和超氧自由基有較明顯的清除作用[2],但有關(guān)體內(nèi)抗氧化活性的報(bào)道相對(duì)較少。本研究通過(guò)研究魚(yú)腥草多糖對(duì)超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSHPx)、丙二醛(MDA)的影響,來(lái)探討魚(yú)腥草多糖的體內(nèi)抗氧化活性。

1 材料與方法

1.1 動(dòng) 物

50只普通級(jí)昆明種小鼠,鼠齡 2個(gè)月,體質(zhì)量(20±2)g,雌雄各半,購(gòu)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào):醫(yī)動(dòng)字 20001號(hào)。

1.2 藥品、試劑與儀器

魚(yú)腥草,購(gòu)自河南鄭州張仲景大藥房,粉碎并過(guò)40目篩得到粗粉,密封備用。SOD、GSH-Px和MDA試劑盒,購(gòu)自南京建成生物工程研究所,批號(hào)20090502;其他試劑均為分析純。島津 UV-2001型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì);METTLER AE 240萬(wàn)分之一精密天平,梅特勒 -托利多上海儀器有限公司產(chǎn)品。

1.3 魚(yú)腥草多糖的提取

參照文獻(xiàn)[3],取魚(yú)腥草藥材粉末(過(guò) 40目篩) 1 kg,加 15倍量水,90℃水浴回流提取3次,每次提取3 h,過(guò)濾,合并提取液并濃縮至2 000 m L。加入95%乙醇至終濃度為 80%進(jìn)行醇沉,靜置過(guò)夜,傾倒上清液,沉淀離心,依次用無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚洗滌沉淀,沉淀,揮干乙醚,即得魚(yú)腥草多糖。

1.4 動(dòng)物分組與給藥

將小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng) 1周后,隨機(jī)分成空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、魚(yú)腥草多糖低劑量組(400μg/g)、魚(yú)腥草多糖中劑量組(800μg/g)及魚(yú)腥草多糖高劑量組(1 200μg/g)5組,每組10只。模型對(duì)照組和各藥物組小鼠每天頸背部皮下注射5%D-半乳糖0.5mL,空白對(duì)照組注射等量生理鹽水,每3 d稱(chēng)體質(zhì)量 1次。連續(xù)灌胃給藥 15 d,魚(yú)腥草各劑量組灌以相應(yīng)藥物、空白對(duì)照組及模型對(duì)照組給等量生理鹽水,每天小鼠給藥0.02m L/g。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)

末次給藥后24 h,處死動(dòng)物,分別取小鼠血液及肝組織(制備1%肝組織勻漿)。小鼠血清和肝組織SOD、GSH-Px及MDA測(cè)定按照試劑盒上方法進(jìn)行。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件處理。計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)(BZ_139_2138_999_2156_1045)±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示,組間比較采用t檢驗(yàn)。以 P＜0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 魚(yú)腥草多糖對(duì)小鼠肝組織SOD、GSH-Px、MDA的影響

與空白對(duì)照組對(duì)比,模型對(duì)照組SOD、GSH-Px活力下降,MDA水平升高,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01或 ＜0.05),提示造模成功。與模型對(duì)照組對(duì)比,魚(yú)腥草多糖高、中劑量組小鼠肝組織中 SOD和 GSH-Px活性增加,MDA水平降低,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05);魚(yú)腥草多糖低劑量組肝組織中SOD活性升高(P＜0.05)、MDA水平降低,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01),但GSHPx活性與模型對(duì)照組對(duì)比,差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)表 1。

表1 各組小鼠肝組織中SOD、GSH-Px、MDA水平對(duì)比 ±s

表1 各組小鼠肝組織中SOD、GSH-Px、MDA水平對(duì)比 ±s

注:與模型對(duì)照組對(duì)比,*P＜0.05,**P＜0.01。

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2.2 魚(yú)腥草多糖對(duì)小鼠血清SOD、GSH-Px的影響

從表 2可以看出,魚(yú)腥草多糖高、中劑量組小鼠血清中SOD和GSH-Px活性提高,與模型對(duì)照組對(duì)比,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01),而低劑量組兩指標(biāo)與模型對(duì)照組對(duì)比,差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表2 各組小鼠血清中SOD、GSH-Px水平對(duì)比 ±s

表2 各組小鼠血清中SOD、GSH-Px水平對(duì)比 ±s

注:與模型對(duì)照組對(duì)比,*P＜0.05,**P＜0.01。

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3 討 論

SOD和GSH-Px是機(jī)體重要的抗氧化酶,可保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整,能有效清除氧自由基,從而保護(hù)細(xì)胞免于氧化損傷。MDA是機(jī)體氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)失去平衡時(shí)產(chǎn)生的一種脂質(zhì)過(guò)氧化物,是反映脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的常用指標(biāo),可與磷脂、蛋白質(zhì)、核酸等形成穩(wěn)定的不溶性代謝終產(chǎn)物,含量異常增高會(huì)引起細(xì)胞損傷。抗氧化劑可直接清除體內(nèi)過(guò)剩自由基和脂質(zhì)過(guò)氧化物(如MDA),或通過(guò)增強(qiáng)體內(nèi)抗氧化酶(如SOD、GSH-Px)活力起增強(qiáng)抗氧化作用,有效地防止或減輕體內(nèi)自由基所導(dǎo)致的氧化損傷,增強(qiáng)機(jī)體免疫能力,延緩衰老。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,高、中劑量魚(yú)腥草多糖可以提高模型小鼠血清和肝組織中SOD、GSH-Px的活性,降低模型小鼠肝組織中MDA水平。此說(shuō)明魚(yú)腥草多糖具有明顯的抗氧化作用,值得進(jìn)一步研究與開(kāi)發(fā)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:一部[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:208.

[2]張建新.微波提取魚(yú)腥草水溶性多糖清除自由基特性的研究[J].食品科技,2006(8):115-117.

[3]楊云,馮衛(wèi)生,孟江,等.正交試驗(yàn)法優(yōu)選大棗渣多糖水煎煮提取工藝[J].中藥新藥與臨床藥理,2003,14(3): 200-202.