周林甫,康濤,孫東,張?jiān)葡?楊毅寧,粟秀初,史明,趙鋼#

1.第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科,西安710032;2.蘭州軍區(qū)臨潼療養(yǎng)院理療科,陜西臨潼710600

隱球菌性腦膜炎是由新型隱球菌及其變種所致的中樞神經(jīng)系統(tǒng)亞急性或慢性炎性疾病。近年來(lái),由于激素、抗生素及免疫抑制劑的廣泛應(yīng)用、艾滋病的流行[1],其發(fā)病率明顯升高。病毒性腦炎也是一種臨床比較常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病,嚴(yán)重威脅人類的生命健康。中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病的鑒別診斷受到多種因素的制約,難以滿足準(zhǔn)確診斷的需求,造成該類疾病死亡率居高不下。

神經(jīng)系統(tǒng)與免疫系統(tǒng)之間有密切的聯(lián)系,中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染時(shí),體內(nèi)多種細(xì)胞因子的分泌水平可能發(fā)生變化,目前相關(guān)研究報(bào)道較少。本研究應(yīng)用液相芯片技術(shù)檢測(cè)新型隱球菌性腦膜炎及病毒性腦炎患者腦脊液中白細(xì)胞介素(interleukin,IL)-6、IL-10和腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的含量和變化,并就其臨床價(jià)值進(jìn)行初步探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我科2006年1月～2010年5月收治的新生隱球菌性腦膜炎患者18例為隱腦組,其中男10例,女8例;年齡13～65歲;病程7～14 d,經(jīng)腦脊液常規(guī)、生化、細(xì)菌學(xué)檢查及墨汁染色或 May-Grünwald-Giemsa(MGG)染色鏡檢確診。同期收治的病毒性腦炎患者20例為病腦組,其中男12例,女8例;年齡4～72歲;均符合病毒性腦炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。同期收治的非中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染患者15例為對(duì)照組,其中男 9例,女6例;年齡5～63歲;為臨床上有腰穿指征,但經(jīng)腦脊液檢查、腦電圖及頭顱CT檢查,排除有中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染者。

1.2 方法 研究對(duì)象于發(fā)病7 d內(nèi)留取腦脊液標(biāo)本,進(jìn)行腦脊液細(xì)胞學(xué)分析、生化及細(xì)菌學(xué)檢查,墨汁染色或MGG染色。每個(gè)患者留取腦脊液500 μ L,室溫1000 r/min離心10 min,取上清于-20℃冰箱保存待測(cè)。IL-6、IL-10和 TNF-α檢測(cè)試劑盒(購(gòu)于 Millipore公司),檢測(cè)各細(xì)胞因子水平,按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作;檢測(cè)儀器為 Luninex 200多功能流式點(diǎn)陣儀(購(gòu)自Luminex公司)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件處理數(shù)據(jù),計(jì)量資料以(x-±s)表示,組間比較采用ANOVA分析,兩兩比較采用 t檢驗(yàn),IL-6、IL-10和TNF-α之間進(jìn)行線性相關(guān)性分析,P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組腦脊液IL-6、IL-10和TNF-α水平比較 隱腦組腦脊液中IL-6水平高于病腦組(P＜0.01)和對(duì)照組(P＜0.05),IL-10水平較對(duì)照組顯著升高(P＜0.001),TNF-α水平較病腦組(P＜0.05)和對(duì)照組(P＜0.001)升高;病腦組腦脊液IL-6、IL-10和TNF-α水平較對(duì)照組增高(P＜0.001,P＜0.001,P＜0.05),見(jiàn)表 1。

表1 各組腦脊液中細(xì)胞因子含量比較(pg/mL,x-±s)

2.2 隱腦組腦脊液中IL-6、IL-10和 TNF-α之間相關(guān)性分析 隱腦組IL-6與IL-10呈顯著正相關(guān)(r=0.50,P＜0.05);IL-6與TNF-α之間未見(jiàn)顯著相關(guān)性;IL-10與TNF-α之間亦未見(jiàn)顯著相關(guān)性。

3 討論

正常人腦神經(jīng)元在非炎癥條件下少量表達(dá)IL-6、IL-10和 TNF-α等細(xì)胞因子[3]。當(dāng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)受到創(chuàng)傷或感染等應(yīng)激后,細(xì)胞因子表達(dá)出現(xiàn)變化。IL-6和 TNF-α有外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的雙重來(lái)源,單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞[4]等都可產(chǎn)生IL-6和 TNF-α。IL-6能促進(jìn)T、B細(xì)胞增殖分化,參與抗病毒感染和激發(fā)抗菌性炎癥反應(yīng),既有神經(jīng)保護(hù)作用,又有細(xì)胞毒性[5]。TNF-α在機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)、生理功能及抗感染方面發(fā)揮著重要作用[6],在許多感染性疾病和應(yīng)激性非特異性炎癥性疾病中均出現(xiàn)增高。有文獻(xiàn)報(bào)道中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病中TNF-α水平明顯增高,且在細(xì)菌感染時(shí)增高更為明顯[7]。

本研究結(jié)果顯示,隱腦組患者腦脊液中IL-6和TNF-α含量均較對(duì)照組顯著增高,與文獻(xiàn)報(bào)道一致[8],提示IL-6和 TNF-α在隱球菌性腦膜炎的發(fā)生發(fā)展中有重要作用。其升高機(jī)理可能是：隱球菌感染時(shí),單核巨噬細(xì)胞被激活,釋放 TNF-α,適量的 TNF-α對(duì)機(jī)體具有保護(hù)作用;當(dāng)IL-6和 TNF-α產(chǎn)生量過(guò)大時(shí),主要表現(xiàn)為負(fù)向免疫調(diào)節(jié),IL-6可通過(guò)趨化作用使中性粒細(xì)胞向病變區(qū)域大量聚積,釋放毒性氧基,并與過(guò)量釋放的TNF-α等細(xì)胞因子協(xié)同發(fā)揮細(xì)胞毒性作用,擴(kuò)大炎癥反應(yīng),加重血腦屏障的破壞及腦水腫,引起腦膜甚至整個(gè)腦部的炎癥,形成正反饋炎癥效應(yīng)[9]。有資料表明,感染后腦脊液中最先出現(xiàn) TNF-α,其次是 IL-1,IL-6和 IL-8。TNF-α可誘導(dǎo) IL-6的合成,IL-6又可抑制TNF-α合成,刺激可溶性TNF-α受體拮抗劑的產(chǎn)生,對(duì)抗 TNF-α炎癥損傷作用[10]。近年來(lái)對(duì)病毒性腦炎與細(xì)胞因子的關(guān)系研究較多,本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)病腦組患者腦脊液中IL-6和TNF-α水平明顯高于對(duì)照組,提示其積極參與了病毒性腦炎的炎性反應(yīng)過(guò)程,與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道一致[6,12]。另外,隱腦組腦脊液中IL-6和TNF-α水平則又顯著高于病腦組,提示隱球菌感染中樞神經(jīng)系統(tǒng)時(shí),損傷的局部組織對(duì)抗原刺激細(xì)胞免疫反應(yīng)更加強(qiáng)烈,這在某種程度上可能會(huì)對(duì)兩種疾病的鑒別診斷有一定輔助參考意義,具體機(jī)制需進(jìn)一步研究。

IL-10是一種免疫抑制因子,其抗炎保護(hù)效應(yīng)在新生隱球菌性腦膜炎的免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)隱腦組患者腦脊液中IL-6與IL-10水平呈顯著正相關(guān),均高于對(duì)照組,與以往研究結(jié)果一致[8]。以往文獻(xiàn)提示,新生隱球菌的莢膜多糖與正常的脾臟CD4+T細(xì)胞相互作用后,可引起高水平IL-10的產(chǎn)生[11]。IL-10的免疫抑制作用可能使其成為一個(gè)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)隱球菌性腦膜炎患者治療效果以及病情是否好轉(zhuǎn)的參考指標(biāo)。隱腦組和病腦組患者腦脊液IL-10水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

綜上所述,隱球菌性腦膜炎和病毒性腦炎患者腦脊液中IL-6、IL-10和 TNF-α水平增高,提示免疫因素參與了其發(fā)病過(guò)程。隱球菌性腦膜炎患者腦脊液IL-6和TNF-α水平高于病毒性腦炎患者,但I(xiàn)L-10水平無(wú)明顯差異。由于本實(shí)驗(yàn)樣本量較少,沒(méi)有縱向比較不同嚴(yán)重程度患者腦脊液中細(xì)胞因子在臨床治療各階段的表達(dá)水平,目前還不能將其作為監(jiān)測(cè)疾病預(yù)后和轉(zhuǎn)歸的檢測(cè)指標(biāo)。

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