胡旭東 程海林 田德安 曹榮 夏冰 柏濤 甘洪穎 黃少平

干擾素-α（IFN-α）具有廣泛的抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用[1]。近年來，體外和臨床研究表明IFN-α具有抗肝纖維化作用[2～6]。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）、腫瘤壞死因子 α（TNF-α）、金屬蛋白酶組織抑制因子 1（TIMP-1）、基質(zhì)金屬蛋白酶 1（MMP-1）和 I型膠原等與肝纖維化的發(fā)生及進(jìn)展關(guān)系密切。我們觀察了IFN-α治療慢性乙型肝炎患者對(duì)它們的影響。

資料與方法

一、研究對(duì)象 本院2009年3月至2010年6月住院的慢性乙型肝炎患者50例，男性38例，女性12例，年齡23歲～42歲，平均年齡31.6歲。診斷依據(jù)2005年《慢性乙型肝炎防治指南》的標(biāo)準(zhǔn)?；颊哐錒BsAg、HBeAg 陽 性 ，HBV DNA ≥1 ×105IU/ml；HBV DNA基因分型為B型；ALT大于正常值上限2倍，但小于正常值上限10倍；肝組織學(xué)檢查符合慢性乙型肝炎的表現(xiàn)。所有患者甲、丙、戊型肝炎病毒標(biāo)記物均為陰性，均無飲酒史。甲狀腺功能及血常規(guī)正常。胃鏡檢查無食管胃底靜脈曲張。所有患者在第1次肝穿刺前6個(gè)月內(nèi)未應(yīng)用過免疫調(diào)節(jié)劑或抗病毒藥物，排除精神病、孕婦、哺乳期婦女及有嚴(yán)重心、腎疾病患者。

二、治療方法 給予IFN-α（安達(dá)芬，安徽安科生物工程股份有限公司）6MU皮下注射，隔日1次，治療6個(gè)月。

三、肝活檢 取肝穿組織，采用免疫組化法檢測(cè)TGF-β1、TNF-α、TIMP1、Fas、MMP-1 和 I型膠原蛋白（一抗及羊抗兔二抗均購自武漢博士德生物工程有限公司）。應(yīng)用HMIAS-2000高清晰彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)（武漢千屏影像技術(shù)有限責(zé)任公司）進(jìn)行分析，計(jì)算每例樣本平均陽性面積作為比較參數(shù)。

四，常規(guī)檢測(cè) 采用ELISA法（上海凌云生物制品有限公司）檢測(cè)HBV標(biāo)記物；采用聚合酶鏈反應(yīng)法檢測(cè)HBV DNA（上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司）；采用ELISA法檢測(cè)透明質(zhì)酸（HA）、層粘連蛋白（LN）、Ⅲ型前膠原（PCⅢ）及Ⅳ型膠原（Ⅳ-c，上海凌云生物制品有限公司）。

五，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包，計(jì)量資料以表示，采用配對(duì)t檢驗(yàn)，等級(jí)計(jì)數(shù)資料采用秩和檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、血清學(xué)和病毒學(xué)應(yīng)答情況 在治療結(jié)束時(shí)，27例（54%）患者發(fā)生HbeAg/HbeAb血清轉(zhuǎn)換，37例（74%）患者HBV DNA轉(zhuǎn)陰。

二、治療前后血清肝纖維化指標(biāo)的變化 見表1。

表1 治療前后血清肝纖維化指標(biāo)的變化（，ng/m l）

表1 治療前后血清肝纖維化指標(biāo)的變化（，ng/m l）

①P＜0.01

例數(shù) HA IV-C LN PCⅢ治療前 50 256±63 213±57 135±58 46±27治療后 50 82±42* 91±38* 95±35* 28±11*

三、肝組織學(xué)變化情況 見表2。

表2 治療前后肝纖維化分期和炎癥活動(dòng)度分級(jí)情況

四、肝組織 TGF-β1、TNF-α、TIMP1、Fas、MMP1和I型膠原表達(dá)的變化 在治療6個(gè)月結(jié)束時(shí)，肝組織 TGF-β1、TNF-α、TIMP1、Fas和 I型膠原的表達(dá)明顯下降，MMP1表達(dá)增強(qiáng)（圖 1～6）。

圖1 肝組織TGF-β1的表達(dá)（SP，100×）

圖2 肝組織TNF-α 的表達(dá)（SP，100×）

圖3 肝組織Fas的表達(dá)（SP，100×）

圖4 肝組織I型膠原的表達(dá)（SP，100×）

圖5 肝組織TIMP1的表達(dá)（SP，100×）

圖6 肝組織MMP1的表達(dá)（SP，100×）；

討論

IFN-α作為最主要的抗病毒藥物之一，不僅具有抗病毒、抗腫瘤及調(diào)節(jié)免疫等作用外，還具有抗肝纖維化作用[7]。肝細(xì)胞的損傷是肝纖維化發(fā)生的始動(dòng)因素，乙型肝炎病毒感染可使機(jī)體免疫系統(tǒng)活化，產(chǎn)生并釋放各種細(xì)胞因子，誘導(dǎo)肝內(nèi)細(xì)胞合成大量TNF-α。TNF-α刺激HSC合成ECM，導(dǎo)致肝纖維化[8]，而在肝纖維化的進(jìn)展期，主要通過Fas系統(tǒng)介導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡作用引起肝細(xì)胞持續(xù)損傷，促進(jìn)肝纖維化進(jìn)一步進(jìn)展[9]。

本研究結(jié)果顯示INF-α抗病毒治療六個(gè)月后，74%患者病毒轉(zhuǎn)陰，54%患者發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)換，TNF-α表達(dá)水平明顯下降，肝組織炎性程度也明顯下降。治療前Fas表達(dá)豐富，以肝細(xì)胞為主，INF-α抗病毒治療6個(gè)月后Fas表達(dá)明顯下降，以間質(zhì)為主，提示干擾素可能通過控制病毒載量以減少病毒對(duì)肝細(xì)胞的免疫損害，減輕肝臟炎癥反應(yīng)及壞死，并抑制間質(zhì)細(xì)胞（主要是HSC）的活化與增殖，并可能促使間質(zhì)細(xì)胞的凋亡，從而起到抗肝纖維化的作用。

HSC的激活、增殖以及細(xì)胞外基質(zhì)的沉積是肝纖維化的重要環(huán)節(jié)，而TGF-β1在肝纖維化的啟動(dòng)、進(jìn)展乃至肝硬化的形成中發(fā)揮了核心作用。HSC活化、增殖，向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，通過旁分泌與自分泌作用合成分泌多種ECM成分，同時(shí)合成、釋放大量TIMPs。TIMPs在組織中的主要作用是通過與MMPs按1∶1比例的結(jié)合而抑制MMPs的活性，從而阻止ECM的降解，形成或促進(jìn)肝纖維化[10]。目前已發(fā)現(xiàn)的TIMPs有4種，在判定肝纖維化及肝組織學(xué)改變方面，TIMP-1的意義較大。MMP1和TIMP1在ECM的降解中起重要作用[11，12]。目前發(fā)現(xiàn)在病損肝臟中TIMP-1明顯增高，出現(xiàn)的時(shí)間較早、表達(dá)較強(qiáng)。因此，越來越多的研究人員把它看作是肝纖維化的診斷指標(biāo)[13]。本研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)抗病毒治療6個(gè)月后，TGF-β1、I型膠原和TIMP1表達(dá)明顯減少，而MMP1表達(dá)則升高，提示干擾素α可能通過阻斷TGF-β1活化HSC途徑，減少HSC合成細(xì)胞外基質(zhì)、I型膠原及TIMPs，使MMPs的活性增強(qiáng)，加強(qiáng)ECM的降解，從而改善肝纖維化。

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