鄭金武

（廈門(mén)夏商農(nóng)產(chǎn)品集團(tuán)有限公司檢測(cè)檢驗(yàn)站，廈門(mén) 361000）

蔬菜作為日常生活的主要食品，其農(nóng)藥殘留等質(zhì)量安全，直接關(guān)系到人民群眾的身體健康及生命安全。在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中鑒于目前我國(guó)出現(xiàn)的蔬菜安全性問(wèn)題以農(nóng)藥殘留污染最為常見(jiàn)和嚴(yán)重，其中尤以有機(jī)磷農(nóng)藥殘留超標(biāo)最為突出，監(jiān)控農(nóng)藥的合理使用，杜絕農(nóng)藥殘留超標(biāo)蔬菜上市銷(xiāo)售成為農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全工作的重中之重?？刂剖卟酥修r(nóng)藥殘留量關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一就是對(duì)蔬菜中農(nóng)藥殘留量及時(shí)、準(zhǔn)確的分析檢測(cè)。因此，在流通領(lǐng)域中加強(qiáng)對(duì)蔬菜農(nóng)殘的快速檢測(cè)已成為十分必要的監(jiān)管措施。

1 蔬菜農(nóng)藥殘留現(xiàn)狀

蔬菜殘留農(nóng)藥，是指蔬菜在噴施農(nóng)藥后殘留在蔬菜表面的農(nóng)藥及有毒代謝物、降解轉(zhuǎn)化產(chǎn)物和反應(yīng)雜質(zhì)的總稱(chēng)。當(dāng)今社會(huì)，人們對(duì)經(jīng)濟(jì)效益的過(guò)度追求導(dǎo)致農(nóng)藥的不規(guī)范使用，農(nóng)藥的大量使用雖然提高了蔬菜產(chǎn)量，但農(nóng)藥殘留卻嚴(yán)重危害了人類(lèi)健康。蔬菜大多數(shù)生長(zhǎng)期短，病蟲(chóng)害比較嚴(yán)重，噴灑農(nóng)藥防治病蟲(chóng)害是蔬菜生產(chǎn)中的重要環(huán)節(jié)，種植過(guò)程中需多次施藥，加上施藥后采摘間隔短，造成蔬菜殘留農(nóng)藥過(guò)量不可避免。

目前在蔬菜生產(chǎn)中使用的農(nóng)藥主要有以下幾種：

1.1 有機(jī)磷農(nóng)藥

目前我國(guó)農(nóng)藥年用量為80～100萬(wàn)t，居世界首位[1]。其中劇毒的有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥年使用量約占70%，該農(nóng)藥是廣譜殺蟲(chóng)劑，應(yīng)用廣泛，主要有毒死蜱、樂(lè)果、敵百蟲(chóng)、敵敵畏、內(nèi)吸磷、對(duì)硫磷、馬拉硫磷等60余種，急性中毒多，毫克級(jí)的有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥即可致人畜于死地。當(dāng)農(nóng)藥殘留在人體中達(dá)到一定的數(shù)量，不為人體所分解時(shí)，將無(wú)法避免地發(fā)生各種病變[2]。有機(jī)磷農(nóng)藥的毒性主要是對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制 引起乙酰膽堿蓄積 使膽堿能神經(jīng)受到持續(xù)沖動(dòng) 導(dǎo)致先興奮后衰竭的一系列毒蕈堿樣煙堿樣和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等癥狀；嚴(yán)重患者可因昏迷和呼吸衰竭而死亡[3]。

1.2 氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥

該類(lèi)農(nóng)藥是應(yīng)用很廣的新型殺蟲(chóng)劑與除草劑，如滅多威（快靈）、抗蚜威、克百威、西維因、殘殺威、殺螟丹等。氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥大多數(shù)屬中、低毒性，中毒原因與有機(jī)磷農(nóng)藥相同，也是抑制人體內(nèi)膽堿酯酶，從而影響人體內(nèi)神經(jīng)沖動(dòng)的傳遞，中毒者會(huì)產(chǎn)生和有機(jī)磷中毒大致相同的癥狀[4]。

1.3 擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥

目前全世界菊酯類(lèi)農(nóng)藥在殺蟲(chóng)劑市場(chǎng)中約占20%，使用面積占整個(gè)殺蟲(chóng)劑面積的25%[5]。該類(lèi)農(nóng)藥由于能對(duì)害蟲(chóng)快速擊倒，對(duì)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥產(chǎn)生抗性的害蟲(chóng)有效，對(duì)哺乳動(dòng)物低毒、在自然環(huán)境中容易分解等特點(diǎn)，正成為蔬菜農(nóng)藥的主要替代產(chǎn)品之一[6]。擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥主要有氯氰菊脂（滅百可）、溴氰菊脂（敵殺死）、殺滅菌脂（速滅殺丁）等。

1.4 Bt（蘇云金桿菌）系列農(nóng)藥

蘇云金桿菌為一種生物源殺蟲(chóng)劑，對(duì)人畜無(wú)毒、使用安全，對(duì)害蟲(chóng)選擇性強(qiáng)、不傷害天敵，不污染環(huán)境、沒(méi)有殘毒，生產(chǎn)的產(chǎn)品可安全食用，同時(shí)，也不改變蔬菜的色澤和風(fēng)味。相對(duì)于化學(xué)農(nóng)藥更不易產(chǎn)生抗藥性，是無(wú)公害蔬菜生產(chǎn)的推薦農(nóng)藥[7]。

1.5 阿維菌素系列農(nóng)藥

阿維菌素是一種包括昆蟲(chóng)、螨等節(jié)肢動(dòng)物的神經(jīng)性毒劑．其機(jī)理是干擾昆蟲(chóng)體內(nèi)神經(jīng)末梢的信息傳遞，從而阻斷神經(jīng)末梢與肌肉的聯(lián)系．使昆蟲(chóng)麻痹、拒食、死亡。正因?yàn)槿绱霜?dú)特的作用機(jī)理．故與常用的殺蟲(chóng)劑無(wú)交互抗性．尤其適用于如小菜蛾這樣對(duì)常用的有機(jī)磷和菊酯類(lèi)農(nóng)藥產(chǎn)生抗性的害蟲(chóng)．防效尤為顯著[8]。對(duì)人低毒，因此是無(wú)公害蔬菜生產(chǎn)的推薦農(nóng)藥。

1.6 昆蟲(chóng)激素類(lèi)農(nóng)藥

昆蟲(chóng)激素類(lèi)農(nóng)藥是一類(lèi)新型農(nóng)藥，由昆蟲(chóng)激素和對(duì)昆蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育有調(diào)節(jié)作用的植物性物質(zhì)制成，或?yàn)槿斯ず铣傻姆吕ハx(chóng)激素。昆蟲(chóng)激素是由昆蟲(chóng)自身分泌并影響其變態(tài)、發(fā)育、繁殖或互相傳遞信息的微量化學(xué)物質(zhì)。當(dāng)它的分泌受到抑制或增加時(shí)，昆蟲(chóng)的發(fā)育或正?；顒?dòng)即受阻礙、干擾。在多種昆蟲(chóng)激素中只有一部分可用作農(nóng)藥，其特點(diǎn)是活性高、用量少（一般在1微克以下的劑量即發(fā)生作用）、專(zhuān)一性強(qiáng)且無(wú)公害。由于這類(lèi)藥劑與傳統(tǒng)殺蟲(chóng)劑毒殺害蟲(chóng)的致死作用不同，故也稱(chēng)作“軟殺蟲(chóng)劑”或第 3代殺蟲(chóng)劑。主要有米滿(mǎn)、卡死克、抑太保等，此類(lèi)農(nóng)藥見(jiàn)效相對(duì)較慢[9]。

1.7 有機(jī)氯農(nóng)藥

有機(jī)氯農(nóng)藥由于在土壤中的滯留期均可長(zhǎng)達(dá)數(shù)年、氯苯結(jié)構(gòu)較為穩(wěn)定，不易為生物體內(nèi)酶系降解，所以積存在動(dòng)、植物體內(nèi)的有機(jī)氯農(nóng)藥分子消失緩慢這些特性，通過(guò)生物富集和食物鏈作用，造成農(nóng)藥公害[10]。該類(lèi)農(nóng)藥是高殘毒農(nóng)藥，其中六六六、DDT等我國(guó)早已禁用。

2 蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法

大致可分為4大類(lèi)，即生物測(cè)定法、化學(xué)檢測(cè)法、免疫分析法和生化檢測(cè)法。

2.1 生物測(cè)定法

生物測(cè)定法利用特定生物對(duì)相應(yīng)農(nóng)藥化合物的特定生化反應(yīng)來(lái)判斷農(nóng)藥殘留及其污染情況，無(wú)需對(duì)樣品進(jìn)行前處理或前處理比較簡(jiǎn)單快速，但對(duì)供試生物要求較高，測(cè)定結(jié)果不能確定農(nóng)藥品種，并且可能出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性情況，該方法一般作為引起中毒農(nóng)產(chǎn)品現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。

2.2 免疫分析法

有放射性免疫分析、酶免疫分析、多組份分析物免疫分析、免疫傳感器分析等，最為常用的是酶聯(lián)免疫法（ELISA法），它主要是以抗原與抗體的特異性、可逆性結(jié)合反映為基礎(chǔ)的農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法，該法利用化學(xué)物質(zhì)在動(dòng)物體內(nèi)能產(chǎn)生免疫抗體的原理，先將小分子農(nóng)藥化合物與大分子生物物質(zhì)結(jié)合成大分子，做成抗原，并使之在動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生抗體，對(duì)抗體篩選制成試劑盒，通過(guò)抗原與抗體之間發(fā)生的酶聯(lián)免疫反應(yīng)，依靠比色來(lái)確定農(nóng)藥殘留，它具有專(zhuān)一性強(qiáng)、靈敏度高、快速、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，試劑盒可廣泛用于現(xiàn)場(chǎng)樣品和大量樣品的快速檢測(cè)，可準(zhǔn)確定性、定量[11]。但由于受到農(nóng)藥種類(lèi)多，抗體制備難度大、在不能肯定樣本中存在農(nóng)藥殘留種類(lèi)時(shí)檢測(cè)有一定的盲目性以及抗體依賴(lài)國(guó)外進(jìn)口等影響，酶聯(lián)免疫法的應(yīng)用范圍受到較大的限制，目前，我國(guó)市場(chǎng)上酶聯(lián)免疫法成品試劑盒依賴(lài)從國(guó)外進(jìn)口，因此沒(méi)有大范圍推廣使用。

2.3 化學(xué)檢測(cè)技術(shù)

用于農(nóng)藥殘留的化學(xué)檢測(cè)方法有分光光度法、極譜法、原子吸收光譜法、薄層層析法、氣相色譜法、液相色譜法、同位素標(biāo)記法、核磁共振波譜法、色質(zhì)聯(lián)用法等，自二十世紀(jì)九十年代以來(lái)，現(xiàn)代化學(xué)分析技術(shù)日新月異，許多新技術(shù)已進(jìn)入實(shí)用階段，如毛細(xì)管電脈儀技術(shù)（CZE），色質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（GC-MS、HPLC-MS）超臨界流體色譜技術(shù)（SFC），直接光譜分析技術(shù)等[12]。這些新技術(shù)的應(yīng)用，大大提高農(nóng)藥殘留分析的靈敏度，簡(jiǎn)化分析步驟，提高了分析效率。但是，這些分析方法有的靈敏度不高，如分光光度法、薄層層析法等。有的需要昂貴的儀器，如色質(zhì)聯(lián)用法、核磁共振波譜法等。還有的需要特殊的設(shè)備，如同位素標(biāo)記法等。因此，目前，普遍采用的還是氣相色譜法和液相色譜法，它們具有簡(jiǎn)便、快速、靈敏以及穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好，線(xiàn)性范圍寬、耗資低等優(yōu)點(diǎn)。

2.4 生化檢測(cè)技術(shù)

有機(jī)磷與氨基甲酸酯農(nóng)藥共為神經(jīng)系統(tǒng)乙酰膽堿脂酶抑制物，因此可以利用農(nóng)藥靶標(biāo)酶-乙酰膽堿酯酶（AChE）受抑制的程度來(lái)檢測(cè)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥。該方法目前已開(kāi)發(fā)出了相應(yīng)的各種速測(cè)卡和速測(cè)儀。該方法檢測(cè)時(shí)，蔬菜中的水份、碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂等物質(zhì)不會(huì)對(duì)農(nóng)藥殘留物的檢測(cè)造成干擾，不必進(jìn)行分離去雜，節(jié)省了大量預(yù)處理時(shí)間，從而能達(dá)到快速檢測(cè)的目的，因此該法具有快速方便、前處理簡(jiǎn)單、無(wú)需儀器或儀器相對(duì)簡(jiǎn)單，適用于現(xiàn)場(chǎng)的定性和半定量測(cè)定，目前的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)就是用了該方法，已上升為農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為NY/T448-2001，名稱(chēng)為蔬菜上有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)方法，但方法只能用于測(cè)定有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑，其靈敏度和所使用的酶、顯色反應(yīng)時(shí)間和溫度密切相關(guān)，經(jīng)酶法檢測(cè)出陽(yáng)性后，需用標(biāo)準(zhǔn)儀器檢驗(yàn)方法進(jìn)一步檢測(cè)，以鑒定殘留農(nóng)藥品種及準(zhǔn)確殘留量[13]。酶抑制法是我國(guó)農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)中研究最多、應(yīng)用最多也相對(duì)成熟的一種對(duì)部分農(nóng)藥進(jìn)行殘留快速檢測(cè)的生化檢測(cè)技術(shù)。

目前國(guó)內(nèi)外蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法主要有2個(gè)發(fā)展方向，一是利用色譜法的實(shí)驗(yàn)室定量檢測(cè)，二是利用酶抑制法的快速定性檢測(cè)[14]。前者雖然具有檢測(cè)靈敏度高、結(jié)果相對(duì)正確等優(yōu)點(diǎn)，但儀器投資大（動(dòng)輒30～40萬(wàn)元，甚至更高）；檢測(cè)費(fèi)用高（每檢測(cè)一個(gè)樣品均需 300～400元）；檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)（樣品前處理手續(xù)復(fù)雜，耗時(shí) 1～2 h，檢測(cè)時(shí)間總計(jì)需3～4 h）；人員技術(shù)要求高，所以，在日常的蔬菜質(zhì)量安全監(jiān)督（現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)）中 ，要采用定量的檢測(cè)方法是不切實(shí)際的。后者雖然準(zhǔn)確性不及氣相色譜，但具有以下優(yōu)點(diǎn)：一是投入成本小?？焖贆z測(cè)方法實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求相對(duì)較低；儀器購(gòu)買(mǎi)費(fèi)用不到萬(wàn)元，日常使用中每檢測(cè)1個(gè)樣品僅需1.0～1.5元；二是技術(shù)要求低?？焖贆z測(cè)試驗(yàn)程序簡(jiǎn)單，技術(shù)要求不高。植保系統(tǒng)的工作人員，經(jīng)過(guò)系統(tǒng)培訓(xùn)完全可以勝任。三是檢測(cè)速度快?？焖贆z測(cè)且試驗(yàn)步驟簡(jiǎn)捷，檢測(cè)一例樣品約20分鐘，特別適合在果蔬生產(chǎn)基地和蔬菜批發(fā)市場(chǎng)上市前農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)使用[15]。我站現(xiàn)使用PR-203-6T農(nóng)藥殘留快速測(cè)試儀（廈門(mén)市信儀科技有限公司生產(chǎn)）對(duì)蔬菜批發(fā)市場(chǎng)蔬菜上市前農(nóng)藥殘留毒性的檢測(cè)。

3 蔬菜農(nóng)藥殘留快速測(cè)試儀在蔬菜農(nóng)殘檢測(cè)上的應(yīng)用

3.1 工作原理

在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常情況下，酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物（乙酰膽堿）水解，其水解產(chǎn)物與顯示劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)在412 nm處測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算出抑制率，通過(guò)抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的存在。

3.2 檢驗(yàn)依據(jù)是 GB/T5009.199-2003《蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留量的快速檢測(cè)》[16]。

3.3 所用試劑

廣州綠洲生化科技有限公司出品的蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)專(zhuān)用試劑（分析純）。

試劑的配制：

① pH8.0緩沖液：取一包磷酸鹽加入 500ml純凈水中攪拌溶解，常溫保存。

② 酶制劑（含乙酰膽堿酯酶和丁酰膽堿酯酶）。

③ 底物：取一瓶加2.5ml純凈水溶解，4℃水箱保存。

④ 顯色劑：取一瓶加25ml磷酸緩沖液溶解同，避光保存。

3.4 分析步驟

3.4.1 對(duì)照測(cè)試先于試管中加入 2.5ml緩沖溶液，再加入0.1ml酶液、0.1ml顯色劑，搖勻后放置10min （每批樣品的控制時(shí)間應(yīng)一致）。再加入0.02ml底物搖勻 ，應(yīng)立即放入儀器比色池中，按＜對(duì)照＞鍵進(jìn)行對(duì)照測(cè)試。

3.4.2 樣品提取選取 1g有代表性的蔬菜樣品，沖洗掉表面泥土，切成1cm左右見(jiàn)方碎片，放入試管中，加入5ml緩沖液，振蕩1～2min，倒出提取液即為待測(cè)樣品。每個(gè)蔬菜樣品的選取前均須將砧板和刀具洗凈、擦干，以避免交叉污染。

3.4.3 樣品溶液測(cè)試先于試管中加入2.5ml樣品提取液，再加入0.1ml酶液、0.1ml顯色劑，搖勻后放置 10min （每批樣品的控制時(shí)間應(yīng)一致）。加入0.02ml底物搖勻，立即放入儀器比色池中，按＜樣品＞鍵進(jìn)行測(cè)試。

3.4.4 檢驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

X：樣品的抑制率（%）。

Ac：對(duì)照組吸光變化值。

As：樣品的吸光變化值。

3.4.5 檢驗(yàn)結(jié)果判定抑制率≥50%時(shí)，表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥存在，樣品為陽(yáng)性結(jié)果，為不合格。抑制率＜50%時(shí)，表示蔬菜中有低劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥存在，樣品為陰性結(jié)果，判定合格。

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