鄧留坤,高 睿,沈文正

(楊凌職業(yè)技術(shù)學(xué)院,陜西楊陵712100)

谷氨酰胺(glutamine,Gln)是動(dòng)物處于應(yīng)激狀態(tài)下的一種條件性必需氨基酸,在動(dòng)物體內(nèi)含量十分豐富,是機(jī)體免疫細(xì)胞代謝的重要能量來源[1]。研究表明,Gln對(duì)應(yīng)激或疾病狀態(tài)下動(dòng)物機(jī)體免疫功能的維持和恢復(fù)有著重要作用[2]。當(dāng)動(dòng)物處于應(yīng)激或病理狀態(tài)時(shí),血漿Gln含量較正常水平降低20%～30%[3]。Gln還可以促進(jìn)免疫細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子,對(duì)提高免疫反應(yīng)有重要作用,體外試驗(yàn)表明,細(xì)胞培養(yǎng)液中添加適量Gln后,淋巴細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)化效率顯著提高,其他氨基酸的添加則無此效果[4]。目前,Gln對(duì)機(jī)體免疫機(jī)能的調(diào)節(jié)作用已經(jīng)在腸外營(yíng)養(yǎng)的病人以及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中得到證實(shí)。有關(guān)胚蛋注射Gln對(duì)肉雞免疫功能影響的試驗(yàn)研究尚未見報(bào)道。本試驗(yàn)通過向18日胚齡胚蛋中注射Gln,研究不同濃度Gln對(duì)肉仔雞早期免疫器官發(fā)育的影響,旨在為應(yīng)用Gln增強(qiáng)肉仔雞早期免疫機(jī)能提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)藥品 谷氨酰胺由上?；菖d生化試劑公司生產(chǎn)。

1.1.2 試驗(yàn)用雞胚 孵化18 d胚蛋,購(gòu)自陜西楊陵五星村孵化場(chǎng)。

1.1.3 主要器具 超凈工作臺(tái),滅菌打孔器,滅菌石蠟,孵化出雛箱,育雛籠等。

1.2 方法

1.2.1 雞胚處理 試驗(yàn)選用已孵化18 d的肉仔雞活胚蛋240枚,稱重,編號(hào)后隨機(jī)分為4個(gè)處理組,每個(gè)處理6個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)10枚種蛋。經(jīng)照蛋確定羊膜腔的位置,碘酒消毒,750 mL/L的酒精棉球脫碘。處理組Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分別向雞胚羊膜腔內(nèi)注射質(zhì)量濃度為5、10 mL/L和15 mL/L的Gln營(yíng)養(yǎng)液1 mL(營(yíng)養(yǎng)液均用7.5 g/L生理鹽水配制,配好后經(jīng)孔徑為0.22 μ m無菌濾器濾過除菌),處理組Ⅰ僅注射同等劑量7.5 g/L生理鹽水作為對(duì)照。經(jīng)注射好的胚蛋用滅菌石蠟密封蛋殼上的注射孔,再將胚蛋放回孵化出雛器內(nèi),在溫度為36.9℃、相對(duì)濕度為68%的條件下孵化,自然出雛。

1.2.2 飼養(yǎng)管理 對(duì)出殼雛雞按組進(jìn)行編號(hào),飼養(yǎng)在育雛籠內(nèi),雛雞出齊后2 h同時(shí)開食,使用市售肉雛雞全價(jià)配合飼料,自由采食和飲水,進(jìn)行全天光照,舍內(nèi)溫度32℃～35℃,濕度控制在67%左右。

1.2.3 測(cè)定指標(biāo) 第3天和第7天(以出殼后24 h為1 d),雛雞經(jīng)自由飲水,禁食12 h,于每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選取1只肉仔雞測(cè)定空腹體重,同時(shí)經(jīng)心臟采血致死,迅速剖解分離出胸腺、脾臟和法氏囊并稱重,并計(jì)算免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)=(免疫器官質(zhì)量/宰前活體質(zhì)量)×100%

1.2.4 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行ANOVA方差分析和Duncan‵s多重比較(P＜0.05為差異顯著,P＜0.01為差異極顯著),結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(_X±SD)表示。

2 結(jié)果

胚蛋注射Gln對(duì)肉仔雞3日齡免疫器官指數(shù)的影響見表1。由表1中可以看出,胚蛋注射Gln對(duì)3日齡肉仔雞的胸腺、脾臟和法氏囊重量及其器官指數(shù)與對(duì)照組相比均差異不顯著(P＞0.05),除5 mL/L注射組胸腺重量及其指數(shù)較對(duì)照組略有降低外,其他各試驗(yàn)組較對(duì)照組的器官重量和器官指數(shù)均有一定程度的增長(zhǎng)。

表1 胚蛋注射Gln對(duì)肉仔雞3日齡免疫器官指標(biāo)的影響Table 1 Effects of in ovofeeding of Gln on the immune organ indexes of 3 day s broilers

胚蛋注射Gln對(duì)肉仔雞7日齡免疫器官指數(shù)的影響見表2。各試驗(yàn)組肉仔雞的胸腺重量與對(duì)照組相比均有提高的趨勢(shì),但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05),Ⅲ、Ⅳ組胸腺指數(shù)顯著高于對(duì)照組,分別提高了22.67%和19.56%(P＜0.05);Ⅱ組脾臟重量較對(duì)照組顯著提高25.00%(P＜0.05),Ⅲ組較對(duì)照組顯著提高31.25%(P＜0.05),Ⅱ、Ⅲ組的脾臟指數(shù)均顯著高于對(duì)照組,分別提高了24.53%和32.08%(P＜0.05),Ⅳ組的脾臟重量及指數(shù)均比對(duì)照組有所提高,但均未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);各試驗(yàn)組法氏囊重量及指數(shù)與對(duì)照組相比有提高的趨勢(shì),但差異均不顯著(P＞0.05)。

表2 胚蛋注射Gln對(duì)肉仔雞7日齡免疫器官指標(biāo)的影響Table 2 Effects of in ovo feeding of Gln on the immune organ indexes in 7 day s broilers

3 討論

胸腺、脾臟和法氏囊是禽類免疫細(xì)胞成長(zhǎng)、發(fā)育分化及發(fā)育成熟的主要場(chǎng)所,其生長(zhǎng)發(fā)育狀況與機(jī)體的免疫功能密切相關(guān)。胸腺是機(jī)體的中樞免疫器官,主要與T細(xì)胞成熟有關(guān),這些細(xì)胞可轉(zhuǎn)移到脾、盲腸、扁桃體及其他淋巴組織中,在特定的區(qū)域定居、繁殖,并參與細(xì)胞的免疫活動(dòng)[5]。脾臟是位于血液循環(huán)通路上的外周免疫器官,是動(dòng)物機(jī)體濾過血液和對(duì)血源性抗原物質(zhì)產(chǎn)生免疫應(yīng)答的重要場(chǎng)所。脾臟的過濾功能不但可以清除衰老死亡的紅細(xì)胞,還能清除血流中的大部分抗原,參與細(xì)胞免疫應(yīng)答,如果切除脾臟,機(jī)體產(chǎn)生抗體的能力會(huì)顯著降低[6-7]。法氏囊是禽類特有的中樞免疫器官,是抗體細(xì)胞成長(zhǎng)和分化的部位[8]。來自骨髓的淋巴干細(xì)胞經(jīng)血液循環(huán)流經(jīng)法氏囊后,在受囊激素作用下,被誘導(dǎo)分化為干細(xì)胞,再進(jìn)一步分化為前B淋巴細(xì)胞,然后分裂增殖為B淋巴細(xì)胞,離開法氏囊后遷移至外周淋巴組織,參與體液免疫。胸腺、脾臟和法氏囊的發(fā)育狀態(tài)及機(jī)能強(qiáng)弱,直接決定禽類全身免疫水平的高低[9]。

免疫器官稱重法是研究機(jī)體免疫狀況的方法之一。在正常生理情況下,免疫器官細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育、分裂增殖導(dǎo)致了免疫器官重量的增加[10]。一般認(rèn)為免疫器官重量的降低為免疫抑制所致,免疫器官重量增加則為免疫增強(qiáng)的表現(xiàn),指數(shù)的提高表示該器官的發(fā)育速度加快[11]。

黃冠慶[12]在日糧中添加Gln明顯提高了21日齡肉仔雞法氏囊和脾臟的重量及法氏囊指數(shù)。周聯(lián)高等[13]在日糧中添加Gln加快了肉仔雞胸腺和脾臟發(fā)育,并延緩法氏囊的退化。劉艷芳等[14]通過試驗(yàn)證明飼料中添加不同劑量的Gln顯著提高了14日齡肉雞的胸腺和脾臟指數(shù)。張敏等[15]在肉仔雞飼糧中添加Gln具有改善免疫功能的作用。

本試驗(yàn)通過向胚蛋孵化后期羊膜腔內(nèi)注入不同劑量的Gln表明,其在一定程度上提高了肉仔雞胸腺、脾臟和法氏囊的重量及指數(shù)。在添加劑量方面,Ⅲ組對(duì)免疫器官及其指數(shù)的促進(jìn)作用較其他試驗(yàn)組明顯。在免疫器官方面,脾臟和胸腺的增重和指數(shù)增長(zhǎng)較法氏囊明顯,這可能與法氏囊在胚胎發(fā)育中出現(xiàn)較早,所以添加Gln對(duì)發(fā)育沒有顯著影響有關(guān)。Gln對(duì)免疫器官生長(zhǎng)促進(jìn)作用的產(chǎn)生可能是其為肉仔雞提供了豐富的前體物質(zhì),有利于免疫器官的形成與發(fā)育的結(jié)果,也有研究者認(rèn)為,谷氨酰胺刺激了淋巴細(xì)胞的增殖,使免疫器官的質(zhì)量通過淋巴細(xì)胞的數(shù)量增加而增加。

本研究顯示,胚蛋注射Gln可以促進(jìn)肉仔雞早期胸腺、脾臟和法氏囊的生長(zhǎng)發(fā)育。其中,以Ⅲ組的胸腺、脾臟重量增加和指數(shù)增長(zhǎng)效果明顯。

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