劉海洲 崔 英 岳惠芬 梁新強(qiáng) 吳冬梅 陳麗霞 朱文良 聶 龍 宛 月 豐大利

(廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，南寧市 530021)

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是影響廣西地區(qū)人群健康的最主要的惡性腫瘤，在廣西地區(qū)其發(fā)病率和死亡率都相對(duì)較高［1］。目前鼻咽癌的病因?qū)W研究已經(jīng)深入到了分子水平，鼻咽癌核心家系相關(guān)基因的研究也逐步成為熱點(diǎn)，但尚未見(jiàn)有鼻咽癌核心家系數(shù)據(jù)庫(kù)及其成員血液標(biāo)本庫(kù)的報(bào)道。鑒于此，本研究通過(guò)建立廣西254個(gè)鼻咽癌核心家系數(shù)據(jù)庫(kù)及成員血液標(biāo)本庫(kù)，并檢測(cè)EB-VCA-IgA抗體，為進(jìn)一步利用以核心家系為基礎(chǔ)的遺傳關(guān)聯(lián)研究，探討相關(guān)基因多態(tài)性與鼻咽癌易感性之間的關(guān)系打下良好基礎(chǔ)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 以廣西近年患病或發(fā)現(xiàn)的鼻咽癌患者為先證者;由先證者和其生物學(xué)父母構(gòu)成核心家系，對(duì)照組為廣西境內(nèi)鼻咽癌高發(fā)區(qū)自然人群。

1.2 研究方法 由專(zhuān)門(mén)培訓(xùn)的調(diào)查員，使用統(tǒng)一的調(diào)查表，對(duì)每個(gè)核心家系進(jìn)行保密的詢(xún)問(wèn)調(diào)查，主要內(nèi)容包括個(gè)人基本情況、吸煙史、飲酒史、鼻咽癌病史、家族腫瘤史、個(gè)人史等。采集核心家系成員、對(duì)照組的靜脈血，離心分離血清，－20℃保存，建立鼻咽癌核心家系樣本庫(kù)。采用酶聯(lián)免疫方法檢測(cè)血清EB-VCA-IgA抗體滴度。EB-VCA-IgA陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)為:VCA-IgA≥1∶5。

1.3 血液標(biāo)本的存放和管理 每個(gè)鼻咽癌核心家系包括先證者、先證者父母3份血液樣品，統(tǒng)一編號(hào)處理后集中存放于－20℃冰柜。研究人員對(duì)存放的鼻咽癌核心家系標(biāo)本定期監(jiān)測(cè)，記錄入庫(kù)時(shí)間、存放位置，定期送有條件的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行后期研究。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì);調(diào)查資料采用EPIDATA軟件錄入，數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建采取ACCESS數(shù)據(jù)庫(kù)。

2 結(jié)果

2.1 鼻咽癌核心家系標(biāo)本庫(kù)的初步建立 本數(shù)據(jù)庫(kù)錄入了254個(gè)鼻咽癌核心家系，有鼻咽癌先證者254例，其中有鼻咽癌家族史的鼻咽癌核心家系26個(gè)，占10.24%;新發(fā)現(xiàn)鼻咽癌3例，有1例家系先證者及父母都為鼻咽癌患者，1例家系先證者及母親一方患有鼻咽癌。26個(gè)有鼻咽癌家族史的核心家系，其成員EB-VCA-IgA總陽(yáng)性率為39.7%，先證者陽(yáng)性率為84.6%，先證者父母為17.3%。數(shù)據(jù)庫(kù)中還包含有鼻咽癌先證者煙酒史、臨床分期及病理結(jié)果分型。

2.2 鼻咽癌核心家系數(shù)據(jù)庫(kù)建立完成 本研究的核心家系數(shù)據(jù)庫(kù)含有三個(gè)數(shù)據(jù)表:①先證者數(shù)據(jù)表，包含字段有先證者ID、姓名、職業(yè)、年齡、民族、籍貫、聯(lián)系方式、病理分期、臨床診斷等;②先證者父母親數(shù)據(jù)表，包含字段有先證者ID、與先證者關(guān)系、姓名、職業(yè)、年齡、民族、籍貫、聯(lián)系方式等;③隨訪結(jié)果數(shù)據(jù)表，包含字段有先證者ID、隨訪時(shí)間、隨訪次數(shù)、更新聯(lián)系方式等。在數(shù)據(jù)表的基礎(chǔ)上，含有數(shù)個(gè)檢驗(yàn)單發(fā)布報(bào)表以及家系成員數(shù)據(jù)查詢(xún)圖，并含有一個(gè)數(shù)據(jù)錄入界面用于后期錄入數(shù)據(jù)。

2.3 EB-VCA-IgA總體情況比較 核心家系成員父母與自然人群對(duì)照組的EB-VCA-IgA總體情況比較見(jiàn)表1。254個(gè)鼻咽癌核心家系成員EB-VCA-IgA陽(yáng)性率為40.3%，成員中先證者EB-VCA-IgA陽(yáng)性率為88.2%，先證者父母為16.1%;自然人群對(duì)照組的陽(yáng)性率為8.22%，先證者父母EB-VCA-IgA水平高于自然人群對(duì)照組，差異有顯著性(P＜0.01)。核心家系成員中先證者父親、母親總的EB-VCA-IgA陽(yáng)性率是自然人群的2.15倍。

表1 核心家系先證者父母及對(duì)照組的VCA-IgA情況比較 ［n(%)］

2.4 EB-VCA-IgA的具體情況比較 鼻咽癌核心家系先證者父親、母親分別與自然人群對(duì)照組的EB-VCA-IgA具體情況比較見(jiàn)表1。核心家系先證者父親與對(duì)照組男性EB-VCA-IgA情況比較有顯著性差異(P＜0.01);核心家系先證者母親與對(duì)照組女性EB-VCA-IgA情況比較有顯著性差異(P＜0.01);核心家系先證者父親、母親的EB-VCA-IgA陽(yáng)性率分別是對(duì)照組男性、女性的2.26倍、2.00倍。

3 討論

3.1 鼻咽癌家族的聚集現(xiàn)象 鼻咽癌是我國(guó)南方常見(jiàn)的惡性腫瘤。眾所周知，EB病毒與鼻咽癌發(fā)病十分密切［2］，EB病毒抗體(VCA/IgA)陽(yáng)性人群，其鼻咽癌發(fā)病率明顯高于陰性人群［3］，調(diào)查表明廣西鼻咽癌患者EB病毒感染率明顯高于健康人群［4］。在本次研究中先證者父母的EB-VCAIgA陽(yáng)性率明顯高于正常對(duì)照人群，顯示了鼻咽癌家族聚集現(xiàn)象確實(shí)存在。鼻咽癌患者及親屬EB病毒感染率明顯高于健康人群，相似的生活環(huán)境、密切接觸可能是此現(xiàn)象的基礎(chǔ)。

3.2 建立鼻咽癌核心家系標(biāo)本庫(kù)存在的問(wèn)題及解決方案

3.2.1 鼻咽癌數(shù)據(jù)庫(kù)的建立經(jīng)驗(yàn) 以往的基于鼻咽癌核心家系以及高發(fā)家系的研究不少，但是關(guān)于如何組織這些紛繁復(fù)雜的家系資料卻未見(jiàn)報(bào)道。在本研究中，采集血液樣品及調(diào)查人員按照統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)制定鼻咽癌核心家系調(diào)查表、鼻咽癌核心家系登記數(shù)據(jù)庫(kù)及鼻咽癌核心家系樣本庫(kù)，在數(shù)據(jù)庫(kù)中主要包含的一般信息(姓名、職業(yè)、年齡、民族、籍貫、聯(lián)系方式等)為家系后期隨訪提供了先決條件;鼻咽癌核心家系樣本庫(kù)存儲(chǔ)的血液樣本都在核心家系數(shù)據(jù)庫(kù)中有對(duì)應(yīng)的詳細(xì)資料，在數(shù)據(jù)庫(kù)中可以通過(guò)先證者血液樣本編號(hào)查詢(xún)先證者臨床治療信息及聯(lián)系方式，并進(jìn)一步查詢(xún)到先證者父母的一般信息。后期的開(kāi)發(fā)還準(zhǔn)備將家系圖譜轉(zhuǎn)變成數(shù)字編碼存儲(chǔ)進(jìn)數(shù)據(jù)庫(kù)，以完善鼻咽癌核心家系標(biāo)本庫(kù)的信息。

3.2.2 家系調(diào)查資料的安全性與保密性 鼻咽癌核心家系原始資料來(lái)源于區(qū)內(nèi)各大醫(yī)院，在調(diào)查取樣的同時(shí)，應(yīng)該滿足被調(diào)查者的隱私需求，保證全程沒(méi)有他人在場(chǎng)，完全由調(diào)查者獨(dú)立完成，后期體檢結(jié)果也由數(shù)據(jù)庫(kù)系統(tǒng)打印，并且密封郵寄給被調(diào)查者。所獲取的體檢資料必須由有權(quán)限的人員來(lái)導(dǎo)出、存檔，完全保障了人群資料的安全性、保密性。

3.2.3 鼻咽癌標(biāo)本庫(kù)建立的質(zhì)量控制 保證標(biāo)本庫(kù)內(nèi)樣本資料的真實(shí)可靠，一定的質(zhì)量控制必不可少。①鼻咽癌核心家系標(biāo)本庫(kù)的質(zhì)量控制有別于其他的調(diào)查，首先必須要統(tǒng)一對(duì)調(diào)查員進(jìn)行培訓(xùn)，以提高調(diào)查員工作調(diào)查結(jié)果的真實(shí)性，調(diào)查人員必須熟知血樣保存、數(shù)據(jù)庫(kù)錄入以及臨床診斷。②標(biāo)本庫(kù)的樣本存放有著嚴(yán)格統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，所以必須制定實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)及規(guī)范，提高實(shí)驗(yàn)檢測(cè)人員的業(yè)務(wù)能力及熟練程度，以減少人為溶血等技術(shù)失誤問(wèn)題。③對(duì)象的選擇必須符合納入排除標(biāo)準(zhǔn)，以保證樣本質(zhì)量。④登記表格現(xiàn)場(chǎng)錄入，現(xiàn)場(chǎng)核查，及時(shí)修改、補(bǔ)充，分析資料再經(jīng)“雙人雙錄入核查”、邏輯糾錯(cuò)等控制數(shù)據(jù)質(zhì)量。⑤根據(jù)廣西壯族自治區(qū)壯族居民較多的特點(diǎn)，調(diào)查取樣人員需要知道一定的地方方言，以減少與研究對(duì)象因語(yǔ)言障礙而帶來(lái)的信息偏移。⑥征得每位先證者的知情同意，并使患者充分認(rèn)識(shí)到研究對(duì)其個(gè)人信息及隱私的絕對(duì)保護(hù)，以獲得研究對(duì)象最大程度的配合。

3.3 鼻咽癌核心家系標(biāo)本庫(kù)建立的前景與展望 標(biāo)本庫(kù)構(gòu)建完成之后，血液樣本可以提供分子遺傳學(xué)篩選鼻咽癌易感位點(diǎn)。自上個(gè)世紀(jì)30年代以來(lái)，人們逐漸意識(shí)到癌癥是一種遺傳性疾?。?］。近期我們對(duì)PTEN基因發(fā)點(diǎn)多態(tài)性與鼻咽癌的易感性進(jìn)行了關(guān)聯(lián)性研究［6］在一個(gè)鼻咽癌家系COX7B2基因中共發(fā)現(xiàn)5個(gè)新的SNP位點(diǎn)。因此，本研究建立的鼻咽癌核心家系標(biāo)本庫(kù)，通過(guò)后期采用PCR-直接測(cè)序法篩選基因，為鼻咽癌基于基因的病因?qū)W研究提供了基礎(chǔ)。如果后期研究需要對(duì)核心家系成員進(jìn)行隨訪及資料調(diào)查，一個(gè)規(guī)范的數(shù)據(jù)庫(kù)給了實(shí)驗(yàn)室研究人員非常大的便利。本研究證實(shí)了血液樣本庫(kù)對(duì)腫瘤病因?qū)W研究的重要性，其數(shù)據(jù)庫(kù)開(kāi)發(fā)、質(zhì)量控制、標(biāo)本儲(chǔ)藏、取樣隨訪經(jīng)驗(yàn)為后期針對(duì)大量鼻咽癌高危人群建立血液標(biāo)本庫(kù)提供了難得的經(jīng)驗(yàn)。

綜上所述，本研究建立了一個(gè)可供后期鼻咽癌分子病因?qū)W研究所需要的血液標(biāo)本庫(kù)，并建立完善了血液標(biāo)本相關(guān)的資料數(shù)據(jù)庫(kù)，在收集資料的同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)核心家系先證者父母EB-VCA-IgA抗體陽(yáng)性率顯著高于正常對(duì)照組人群。

［1］ 趙平主編，孔靈芝.鼻咽癌［M］.中國(guó)腫瘤死亡報(bào)告－全國(guó)第三次死因調(diào)查回顧取樣調(diào)查.北京:人民衛(wèi)生出版社，2010:170－187.

［2］ 秦 嶺，李 齡.鼻咽癌遺傳易感性的分子水平研究進(jìn)展［J］.醫(yī)學(xué)文選，2002，21(1):82－84.

［3］ 曾 希，王承龍.鼻咽癌血清EB病毒IgA檢測(cè)的臨床分析［J］.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2010，20(6):879－881.

［4］ Lo KW，To KF，Huang DP.Focus on nasopharyngeal carcinoma［J］.Cancer Cell，2004，(5):423－428.

［5］ 薛開(kāi)先.癌變的體細(xì)胞突變理論回顧與挑戰(zhàn)［J］.癌變畸變突變，2007，19(1):1－3.

［6］ 張小愛(ài)，周鋼橋，崔 英，等.PTEN基因多態(tài)性的相關(guān)性研究［J］.解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2008，33(8):943－946.