王振強(qiáng) ，陳寶義 ，李小江 ，楊文英 ，謝麗娜

(1.河北省泊頭市中醫(yī)醫(yī)院腫瘤科，泊頭 062150；2.河北省泊頭市衛(wèi)生學(xué)校，泊頭 062150；

3.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津 300193；4.河北省徐水縣人民醫(yī)院，徐水 072550）

益氣養(yǎng)榮方對化療所致骨髓抑制小鼠的影響*

王振強(qiáng)1，陳寶義2，李小江3，楊文英4，謝麗娜1

(1.河北省泊頭市中醫(yī)醫(yī)院腫瘤科，泊頭 062150；2.河北省泊頭市衛(wèi)生學(xué)校，泊頭 062150；

3.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津 300193；4.河北省徐水縣人民醫(yī)院，徐水 072550）

[目的]觀察益氣養(yǎng)榮方對化療所致骨髓抑制小鼠的影響。[方法]將30只Wistar大鼠隨機(jī)分為空白組、對照組、中藥組，每組10只?？瞻捉M予腹腔注射生理鹽水，劑量為150 mg/kg；后兩組均腹腔注射環(huán)磷酰胺150 mg/kg復(fù)制小鼠骨髓抑制模型，1 d后全部經(jīng)目內(nèi)眥眼底取血，檢測血常規(guī)。中藥組予益氣養(yǎng)榮方10 mL/kg灌胃，2次/d，連續(xù)10 d。檢測血常規(guī)、粒細(xì)胞－巨噬細(xì)胞集落刺激因子含量和脾臟指數(shù)。[結(jié)果]中藥組體質(zhì)量顯著高于對照組，并且中藥組外周血白細(xì)胞及血小板較對照組顯著升高，中藥組脾臟指數(shù)較實(shí)驗(yàn)組顯著升高。[結(jié)論]益氣養(yǎng)方湯可以控制大鼠體質(zhì)量的下降，明顯升高放化療后骨髓抑制所致的外周血白細(xì)胞及血小板的減少，同時(shí)控制脾臟的增大。

益氣養(yǎng)榮方；化療；骨髓抑制

化療是抗腫瘤的重要手段之一。其骨髓抑制發(fā)生率很高，嚴(yán)重影響化療的正常進(jìn)行，使臨床療效降低。抗腫瘤藥物通過作用于癌細(xì)胞增殖周期的不同環(huán)節(jié)，抑制核糖核酸（DNA）分裂增殖能力，從而起到對腫瘤的治療作用。但由于其缺乏特異性，對正常細(xì)胞，尤其是增殖旺盛的骨髓造血細(xì)胞，也同時(shí)造成嚴(yán)重?fù)p傷，導(dǎo)致血細(xì)胞下降，其中對粒細(xì)胞影響最大。盡管現(xiàn)代醫(yī)學(xué)在不斷探索新藥和新的治療方法，如：基因重組人粒細(xì)胞集落刺激因子（rhG－CSF）和基因重組巨噬細(xì)胞集落刺激因子（rh－GM－CSF）等造血細(xì)胞集落刺激因子、鯊肝醇、利血生、肌苷、維生素B4、碳酸鋰、升白安片等升白細(xì)胞藥物、成分輸血、造血干細(xì)胞移植或支持，但因毒副作用其療效及獲益卻相對有限[1]。中醫(yī)認(rèn)為，化療后骨髓抑制是以“氣虛、陰虛”最為常見。筆者通過大量研究證明，益氣養(yǎng)榮方具有可靠改善骨髓抑制的作用，該組方特征是以“扶正為主”，且具有“扶正不留邪，祛邪不傷正”的特點(diǎn)，充分體現(xiàn)了通過調(diào)節(jié)機(jī)體整體生理功能的平衡而發(fā)揮改善骨髓抑制的科學(xué)指導(dǎo)思想。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Wistar雄性清潔級大鼠30只，體質(zhì)量220～250 g，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，動(dòng)物合格證號：SCXK（京）2004-0001。飼養(yǎng)于天津中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物分籠飼養(yǎng)，自由攝食、飲水，室溫（20±2）℃，濕度20%～40%。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 益氣養(yǎng)榮方（黃芪、補(bǔ)骨脂、白芍、雞血藤、姜黃、太子參、當(dāng)歸等組成。由天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科提供生藥并煎煮，置無菌鹽水瓶中，在80℃恒水浴中濃縮懸蒸成含生藥量1.5 kg/L混懸液，4℃保存）。

環(huán)磷酰胺（CTX）粉針劑（由江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)。批號：國藥準(zhǔn)字H32030669，0.2 g/支）；生理鹽水（天津大冢制藥廠生產(chǎn)）。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑 肝素（天津中醫(yī)藥大學(xué)研究中心生化實(shí)驗(yàn)室提供）；大鼠粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子定量（GM-CSF）酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）試劑盒（由天津華生生物科技有限公司提供）。

1.4 實(shí)驗(yàn)儀器 超凈工作臺；血細(xì)胞自動(dòng)分析儀；光學(xué)顯微鏡；電子天平；毛細(xì)玻璃管、大鼠灌胃器、手術(shù)剪、移液管；LDZ4-0.8型自動(dòng)平衡離心機(jī)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 實(shí)驗(yàn)分組及給藥 取30只雄性Wistar大鼠，稱質(zhì)量后隨機(jī)分為空白組、對照組、中藥組，每組10只?？瞻捉M予腹腔注射生理鹽水150 mg/kg；后兩組均腹腔注射環(huán)磷酰胺7.5 mL/kg。中藥組每只大鼠連續(xù)10 d予10 mL/kg益氣養(yǎng)榮方懸蒸濃縮液灌胃，2次/d?？瞻捉M與對照組不予治療。

2.2 觀察指標(biāo)及方法

2.2.1 大鼠體質(zhì)量變化情況 于開始給藥前1天給每只大鼠稱體質(zhì)量，于末次給藥后24 h再次稱質(zhì)量。記錄數(shù)據(jù)，分析。

2.2.2 血常規(guī)變化情況 于化療后24 h各組大鼠全部經(jīng)目內(nèi)眥眼底取血，檢測血常規(guī)。中藥末次給藥24 h后各組大鼠經(jīng)目內(nèi)眥眼底取血，檢測血常規(guī)。

2.2.3 GM-CSF含量測定 末次給藥24 h后各組大鼠經(jīng)目內(nèi)眥眼底取血，置于抗凝管內(nèi)，4℃，3000 r/min離心15 min，取上清液，于－20℃保存。采用雙抗體夾心ABC-ELISA法，具體操作按天津華生生物科技有限公司提供的GM-CSF ELISA試劑盒進(jìn)行檢測，通過血清樣品的OD值可在繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的GM-CSF的濃度。

2.2.4 脾臟指數(shù)測定 大鼠頸椎脫臼處死后，剝離脾臟后于萬分之一電子天平稱質(zhì)量，稱質(zhì)量后計(jì)算脾臟指數(shù)。

脾臟指數(shù)=脾臟質(zhì)量（mg）/小鼠質(zhì)量（g）

2.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件數(shù)據(jù)包處理，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，治療前后比較采用配對t檢驗(yàn)，組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD方法。P<0.05為差異有顯著性。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 大鼠體質(zhì)量變化 見表1。

表1 治療前后大鼠體質(zhì)量變化情況(±s)Tab.1 Rat body weight change before andafter treatment(±s)g

表1 治療前后大鼠體質(zhì)量變化情況(±s)Tab.1 Rat body weight change before andafter treatment(±s)g

注：與對照組比較，▲P＜0.05。

組別空白組對照組中藥組n 10 10 10治療前253.9±11.55 246.0±17.87 245.6±12.40治療后257.7±16.27 213.0±11.23▲255.3±13.7▲

由表1可見，造模前各組大鼠體質(zhì)量無明顯差異（P>0.05），具有可比性。造模后模型組大鼠體質(zhì)量明顯低于空白組（P＜0.05）。治療后，中藥組與對照組大鼠體質(zhì)量雖均低于空白組（P＜0.05），但中藥組大鼠體質(zhì)量高于對照組，有顯著性差異（P＜0.05）。說明對照組大鼠生長緩慢，而中藥組則對大鼠生長的影響相對較輕，提示中藥益氣養(yǎng)榮湯對化療后骨髓抑制大鼠的生長緩慢有一定的拮抗作用。

3.2 各組治療前后血常規(guī)變化情況 見表2。

由表2可見，中藥組在治療前后，白細(xì)胞（WBC）、紅細(xì)胞（RBC）、血小板（PLT）、血紅蛋白（HGB）的差異均具有顯著性差異（P<0.05）。說明中藥組可以升外周血中高白細(xì)胞及血小板數(shù)值，降低紅細(xì)胞數(shù)值。對照組在治療前后，WBC、PLT的差異均具有顯著性差異（P<0.05），可見對照組可以升高外周血中白細(xì)胞數(shù)值，降低血小板數(shù)值。在WBC變化方面，中藥組治療前后P<0.01，差異具有顯著性。

表2 各組治療前后血常規(guī)的變化比較(±s)Tab.2 Change of blood routine before and after treatmentof each group(±s)

表2 各組治療前后血常規(guī)的變化比較(±s)Tab.2 Change of blood routine before and after treatmentof each group(±s)

組別空白組對照組中藥組n 10 10 10 10 10 10治療前治療后治療前治療后治療前治療后WBC（×109/L）9.58±0.84 8.84±0.88 2.28±1.30 2.51±1.70 1.98±0.22 9.22±2.38 RBC（×1012/L）7.89±0.31 8.04±0.57 7.14±0.81 6.27±0.58 6.65±0.4 5.05±0.71 PLT（×109/L）163.7±35.49 152.2±31.12 87.2±11.31 81.7±10.65 79.2±10.01 124.3±29.6 HGB（g/L）148.7±4.83 149.2±9.36 142.8±11.08 130.8±3.70 137.5±8.45 132.1±11.38

3.3 各組大鼠脾臟指數(shù)的變化 脾臟指數(shù)=脾臟質(zhì)量/大鼠體質(zhì)量。空白組、對照組和中藥組（每組各10 只） 的脾臟指數(shù)分別為 1.85±0.13，2.07±0.86，3.40±1.12。表示空白組與對照組相比差異具有顯著性（P<0.05），說明對照組較空白組脾臟指數(shù)明顯升高，中藥組與對照組比較差異具有顯著性（P<0.05），說明中藥組在脾臟指數(shù)較對照組升高，中藥組與空白組比較，差異不具有顯著性（P>0.05）。

3.4 GM-CSF的含量變化 與空白組、對照組和中藥組 GM-CSF的含量分別為 230.1±9.55，216.0±12.87，212.6±10.4。各種大鼠GM-CSF的含量具有明顯差異。對照組和中藥組含量變化較空白組有顯著差異（P＜0.05）。中藥組與對照組相比，兩組GM-CSF的含量的變化差異具有顯著性（P＜0.05）。

4 討論

在惡性腫瘤的臨床治療中，化療已成為一個(gè)重要的治療手段，并發(fā)揮了巨大的作用，然而也存在著化療藥物的毒性反應(yīng)這一主要問題。因此，研究既能提高化療藥物的療效，又能減輕其毒副作用的藥物顯得十分重要，在此方面，中醫(yī)藥具有不可替代的、獨(dú)特的優(yōu)勢。

中醫(yī)認(rèn)為，化療后骨髓抑制導(dǎo)致白細(xì)胞減少，血小板減少，甚至出現(xiàn)全血減少的臨床表現(xiàn)，可將其歸屬于中醫(yī)的“虛勞”、“血虛”范疇。中醫(yī)認(rèn)為[2]正氣虧虛是腫瘤發(fā)生的一個(gè)病因，而放療作為一種“熱毒之邪”，進(jìn)入人體后進(jìn)一步耗傷氣血，熱毒之邪可導(dǎo)致使臟腑氣血失調(diào)，氣血生化受到阻礙，陰陽失和，臟腑虧損，因此治療上應(yīng)以補(bǔ)虛為主。筆者根據(jù)臨床經(jīng)驗(yàn)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)放療后骨髓抑制是以“氣虛、陰虛”最為常見。由于陰血虧耗，陰虛無以載氣，而致氣散陰耗；加之陰血漸耗，精不化氣，而導(dǎo)致陰損氣耗。故臨床上常見氣血兩虛，氣陰兩虛證候。故針對其病因病機(jī)，從文獻(xiàn)上分析，在治療化療引起骨髓抑制的傳統(tǒng)方劑中，多見于補(bǔ)氣、養(yǎng)血及扶正的方劑，多以益氣養(yǎng)血為治療大法，根據(jù)此法則筆者研制益氣養(yǎng)榮方由黃芪30 g，補(bǔ)骨脂15 g，白芍30 g，雞血藤15 g，姜黃20 g，太子參15 g，當(dāng)歸 15 g等組成，治療放化療后骨髓抑制在臨床中取得了顯著的效果，說明中醫(yī)藥在改善患者生活質(zhì)量方面具有顯著優(yōu)勢。通過上述實(shí)驗(yàn)研究，筆者對于益氣養(yǎng)榮湯及益氣養(yǎng)血法治療放化療后骨髓抑制現(xiàn)象有了更加深入的認(rèn)識，為筆者今后進(jìn)一步研究中醫(yī)藥在惡性腫瘤治療中的作用提供了理論依據(jù)。

[1] 孫迎紅，杜昭林，孟 麗，等.兩種方法注射rhG-CSF治療化療所致骨髓抑制療效比較[J].山東醫(yī)藥，2005，45(16):52-53.

[2] 張代釗.中西結(jié)合治療放化療毒副作用[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2001：28-30.

Influence of Yiqi Yangrong decoction on mice with bone marrow depression induced by chemotherapy

WANG Zhen-qiang1,CHEN Bao-yi2,LI Xiao-jiang3,et al
(1.Botou TCM Hospital,Botou 062150,China;2.Hebei Botu Health School,Botou 062150,China;3.The First Affiliated Hospital ofTianjin University of TCM,Tianjin 300193,China)

[Objective]To observe the effect of Yiqi Yangrong decoction on mice with bone marrow depression induced by chemotherapy.[Methods]Thirty Wistar rats were randomly divided into blank group,control group,TCM group and each group composed of 10 rats.The rats of blank group was treated by intraperitoneal injection of physiological saline,150 mg/kg.After intraperitoneal injection of cyclophosphamide,150 mg/kg,the rats of both groups were suffered from bone marrow inhibition.One day after blood sample was obtained through inner canthus puncture for blood routine testing.In Chinese medicine group Yiqi Yangrong decoction,10 ml/kg,was given per oral,twice daily for 10 days.The blood routine test,granulocyte-macrophage-JiLa stimulating factor content and spleen index were measured.[Results]The body weight in Chinese medicine group was significantly higher than that of control group.Peripheral blood leukocytes and platelet were also significantly increased.Spleen index in Chinese traditional medicine group was significantly increased compared with the experimental group.[Conclusion]Yiqi Yangrong decoction can control rat weight dropping,significantly increase the decreasing of peripheral leukocyte and platelet induced by marrow inhibition caused by radiation and chemotherapy,at the same time control of the enlargement of the spleen.

Yiqi Yangrong decoction;chemotherapy;Bone marrow depression

R285.5

A

1672-1519(2011)01-0056-03

河北省中醫(yī)藥管理局指令項(xiàng)目（2010198）。

王振強(qiáng)（1977-），男，副主任中醫(yī)師，主要從事腫瘤中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合臨床及基礎(chǔ)研究。

2010-08-20）