陳 巖,倪朝輝,趙 剛

（1.吉林大學(xué)第二醫(yī)院 神經(jīng)外科,吉林 長春 130041;2.吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院,吉林 長春 130021;3.吉林大學(xué)第一醫(yī)院神經(jīng)外科,吉林 長春 130021）

膠質(zhì)瘤是富含血管的腫瘤,惡性膠質(zhì)瘤更以高度血管化和血管內(nèi)皮細胞增生為主要特征。內(nèi)皮細胞增生所致的新生血管的形成與膠質(zhì)瘤的惡性程度、生物侵襲性及臨床復(fù)發(fā)進程密切相關(guān),因此有學(xué)者[1]認為膠質(zhì)瘤是最適宜進行抗血管生成治療的腫瘤。內(nèi)皮抑素（Endostatin,ES）是目前已知作用效果最強的血管生成抑制因子,能特異性地抑制血管內(nèi)皮細胞增生,從而有效地抑制血管生成和腫瘤生長。本研究采用ELISA方法檢測不同級別膠質(zhì)瘤患者術(shù)前及術(shù)后血清中Endostatin含量,旨在探討Endostatin與膠質(zhì)瘤惡性程度及預(yù)后的關(guān)系,為應(yīng)用Endostatin進行基因治療奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取手術(shù)切除并經(jīng)病理證實的46例腦膠質(zhì)瘤患者,男 31例,女15例,年齡15-64歲,平均41.6歲。根據(jù)1999年WHO制訂的中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)進行判定:Ⅰ級7例;Ⅱ級18例;Ⅲ級13例;Ⅳ級8例。所有患者均為首次接受膠質(zhì)瘤手術(shù)切除治療,術(shù)前未接受過放療及化療。選取10例健康者為正常對照組。

1.2 血清標(biāo)本的采集及保存 血清標(biāo)本均于手術(shù)前1天及手術(shù)后5-6天采集。清晨抽取空腹外周靜脈血分離血清3ml,-80℃保存。10例健康血清標(biāo)本采集及保存方法同上。

1.3 血清中ES檢測方法 人Endostatin ELISA試劑盒購自于美國Rapidbio公司,參照試劑盒說明書進行操作,應(yīng)用瑞士TECAN酶標(biāo)儀在450 nm處讀OD值。以O(shè)D值為縱坐標(biāo),以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)血清樣品的OD值計算ES的濃度。

2 結(jié)果

2.1 膠質(zhì)瘤患者術(shù)前與健康人群組血清中ES水平的比較 膠質(zhì)瘤患者術(shù)前血清中ES含量平均為26.63±5.63 ng/m l,而健康人群平均為20.74±1.48 ng/ml,明顯低于膠質(zhì)瘤患者,且有非常顯著性差異（P＜0.01）。

2.2 膠質(zhì)瘤患者術(shù)前血清中ES含量與臨床病理特征的關(guān)系 不同級別膠質(zhì)瘤（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）患者血清中ES的含量結(jié)果見表1。

表1 膠質(zhì)瘤患者血清中ES含量與病理級別的關(guān)系

2.3 膠質(zhì)瘤患者術(shù)前與術(shù)后血清中ES含量比較

術(shù)前及術(shù)后5-6天血清中ES平均含量分別為26.63±5.63 ng/m l、20.77 ±3.39 ng/m l,行 Paired-Samples T Test檢驗,差異有非常顯著性意義（t=8.40,P=0.00＜0.01）,可以認為患者術(shù)后血清中ES含量較術(shù)前明顯降低（見圖1）。

3 討論

內(nèi)皮抑素是1997年哈佛大學(xué)O'Reilly和Folkman等[2]從培養(yǎng)的小鼠內(nèi)皮細胞瘤上清中分離純化的一種內(nèi)源性血管生成抑制劑。主要的生物學(xué)功能包括抑制血管內(nèi)皮細胞增殖、遷移以及誘導(dǎo)其凋亡和抑制血管生長[3]。內(nèi)皮抑素被認為是迄今為止最有效的內(nèi)源性血管生長抑制因子之一。目前,國內(nèi)外文獻一致報道內(nèi)皮抑素在多種腫瘤患者血清中的含量明顯高于健康人群,且與臨床病理特征、腫瘤的侵襲性及預(yù)后之間的關(guān)系密切[4-6]。但目前對于膠質(zhì)瘤患者血清中內(nèi)皮抑素的表達情況,尤其是術(shù)前、術(shù)后內(nèi)皮抑素水平變化情況的報道相對很少。

圖1 膠質(zhì)瘤患者術(shù)前與術(shù)后血清中ES含量的對比關(guān)系

本研究應(yīng)用ELISA方法檢測了10例健康人群和46例膠質(zhì)瘤患者術(shù)前及術(shù)后血清中內(nèi)皮抑素的表達情況。研究發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤患者術(shù)前血清中內(nèi)皮抑素的含量要明顯高于健康人群組,有非常顯著性統(tǒng)計學(xué)差異;并且膠質(zhì)瘤患者血清中內(nèi)皮抑素的表達水平與臨床病理分級有關(guān),隨著膠質(zhì)瘤惡性程度的增加,患者術(shù)前血清中內(nèi)皮抑素的含量水平呈現(xiàn)升高趨勢。與健康人群組相比較,膠質(zhì)瘤Ⅰ級患者術(shù)前血清中內(nèi)皮抑素的含量雖有增高,但無顯著性差異;而Ⅱ級患者術(shù)前血清中內(nèi)皮抑素的含量增高有顯著性差異;Ⅲ級和Ⅳ級則有非常顯著性差異。導(dǎo)致內(nèi)皮抑素在膠質(zhì)瘤患者血清中的高表達及其與病理級別呈正相關(guān)性的原因可能是膠質(zhì)瘤生長過程中,隨著腫瘤細胞的增多、惡性程度的增高以及血管形成的增多,為了抗衡機體內(nèi)高水平的血管形成趨勢及腫瘤的生長,腫瘤細胞分泌蛋白水解酶的量增加,從而降解腫瘤細胞及其血管基底膜中的膠原蛋白ⅩⅧ產(chǎn)生內(nèi)皮抑素的量也增多,經(jīng)過血液循環(huán)到達腫瘤部位,抑制原發(fā)和繼發(fā)腫瘤血管的生成從而抑制腫瘤的生長與遠處轉(zhuǎn)移[7]。以上結(jié)果提示血清中內(nèi)皮抑素的含量水平反映了腫瘤的生長狀況,很可能成為診斷膠質(zhì)瘤有益的腫瘤標(biāo)志物之一,有助于篩選高危患者,用于膠質(zhì)瘤的早期診斷。

對于術(shù)前、術(shù)后內(nèi)皮抑素水平變化情況,本研究發(fā)現(xiàn)術(shù)后5-6天時患者血清中內(nèi)皮抑素含量較術(shù)前明顯下降,且差異有非常顯著性統(tǒng)計學(xué)意義。提示患者術(shù)后血清中內(nèi)皮抑素含量可以作為判斷手術(shù)療效及預(yù)后的有效指標(biāo)。惡性膠質(zhì)瘤患者在術(shù)后短期內(nèi)即可發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā),考慮其原因可能與手術(shù)切除原發(fā)腫瘤后遺留的潛在微小轉(zhuǎn)移灶的迅速生長有關(guān),而術(shù)后內(nèi)皮抑素水平的迅速下降可能是導(dǎo)致微小轉(zhuǎn)移灶加速生長的主要原因之一。研究已證明如果沒有新血管的長入并形成血流灌注,腫瘤體積不會超過2 mm3,腫瘤組織也將進入休眠狀態(tài)或發(fā)生退化消失。有學(xué)者還發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮抑素的抑制腫瘤血管形成和腫瘤活性的能力,在血管形成期應(yīng)用的作用大于在血管成熟期,這就提示膠質(zhì)瘤患者術(shù)后應(yīng)當(dāng)立即使用內(nèi)皮抑素進行抗血管生成治療,使微小腫瘤病灶始終處于休眠狀態(tài),延長腫瘤復(fù)發(fā)時間從而改善患者的預(yù)后。本研究結(jié)果為應(yīng)用手術(shù)和內(nèi)皮抑素聯(lián)合治療膠質(zhì)瘤提供了理論依據(jù)。

[1]Szentirmai O,Baker CH,Bullain SS,et al.Successful inhibition of intracranial human glioblastomamultiforme xenograft growth via system ic adenoviral delivery of soluble endostatin and soluble vascular endothelial growth factor receptor-2:laboratory investigation[J].JNeurosurg,2008,108（5）:979.

[2]O'Reilly MS,Boehm T,Shing Y,et al.Endostatin:an endogenous inhibitor of angiogenesisand tumor growth[J].Cell,1997,88（2）:277.

[3]尹 嘉,袁紹紀(jì),張榮偉,等.腺病毒介導(dǎo)鼠內(nèi)皮抑素基因?qū)θ搜軆?nèi)皮細胞系凋亡影響的實驗研究[J].中國微侵襲神經(jīng)外科雜志,2007,12（3）:132.

[4]Iizasa T,Chang H,SuzukiM,et al.Over expression of collagen XVIII is associated with poor outcome and elevated levelsof circulating serum endostatin in non-small cell lung cancer[J].Clin Cancer Res,2004,10（16）:5361.

[5]李正軍,莫浩元,張昌卿,等.治療前外周血血管內(nèi)皮抑素濃度與局部晚期鼻咽癌治療后遠處轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J].癌癥,2007,26（11）:1243.

[6]Guan KP,Xiao ZD,Wang D,et al.Clinicalsignificanceof serum levelsof endostatin in patientswith clear cell renal cell carcinoma[J].Zhonghua Wai Ke Za Zhi,2009,47（10）:737.

[7]Flokman J.Antiangiogenesis in cancer therapy-endostatin and itsmechanismsof action[J].Exp Cell Res,2006,312（5）:594.