鞏玉靜,董彩霞,周 洋,沈 琦,劉麗芳

(中國藥科大學(xué)中藥分析教研室,江蘇南京 211198)

中藥山木通 Clem atis finetianaLévl.etVant.為毛茛科鐵線蓮屬植物,別名別名大葉光板力剛、過山照、九里花、老虎須、老虎毛、雪球藤,主要分布于云南、貴州、四川、湖北、浙江等省。其性苦、溫;入脾、胃、肝三經(jīng)。具有祛風(fēng)利濕、活血解毒作用,主要用于治療感冒、膀胱炎、尿道炎等癥[1]。山木通的根、莖、葉均有藥用記載,本植物的根,在廣西、江西等地?；熳魍`仙使用[2]。目前國內(nèi)外對(duì)山木通的研究較少,僅有一篇關(guān)于山木通揮發(fā)油成分的研究報(bào)道[3]。本研究通過對(duì)山木通根及根莖的提取分離得到 7種化合物,均為首次在該植物中分離得到,為進(jìn)一步開發(fā)和利用山木通植物資源提供合理依據(jù)。

1 儀器與試劑

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (IFQ85A上海機(jī)械專機(jī)廠);離心機(jī) (上海安亭科學(xué)儀器廠),AV-500型核磁共振光譜儀 (瑞士 Bruker公司,T MS為內(nèi)標(biāo))。質(zhì)譜儀為LC-MSD-Trap-SL(美國 ,安捷倫 )。

柱色譜用 100-200目及 200-300目硅膠 (青島海洋化工廠分廠);Sephadex LH-20(Pharmacia公司產(chǎn)品);ODS(美國,Dikama公司);薄層色譜預(yù)制板(煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所);實(shí)驗(yàn)中所用的乙醇,氯仿,甲醇,石油醚,乙酸乙酯,正丁醇等試劑均為分析純);水為樂百氏純凈水。

藥材于 2009年 8月采自江西省,經(jīng)中國藥科大學(xué)中藥學(xué)院劉麗芳教授鑒定為毛茛科鐵線蓮屬植物山木通 (Clem atis finetiana Lévl.etVant.)。

2 提取和分離

取山木通藥材 2.4 kg,粉碎后用 5倍量 95%乙醇、50%乙醇依次回流提取 3次,每次 3 h,將乙醇提取液合并,濃縮得浸膏,浸膏加水溶解混懸為 1 L,混懸液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇 (1∶1)萃取,減壓回收溶劑得石油醚、乙酸乙酯和正丁醇的萃取物。

將石油醚部分經(jīng)硅膠柱色譜 (石油醚 -乙酸乙酯系統(tǒng) 100∶1、50∶1、20∶1、10∶1)得 4個(gè)流份 ,其中100∶1流份再經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜及 Sephadex LH-20(氯仿 -甲醇 1∶1)純化得到化合物 Ⅰ,50∶1流份經(jīng)硅膠柱色譜、Sephadex LH-20(氯仿 -甲醇 1∶1)純化得到化合物Ⅱ、Ⅲ;20∶1流份經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜分離及 Sephadex LH-20(氯仿 -甲醇 1∶1)純化得到化合物Ⅳ和Ⅴ,5∶1流份經(jīng)硅膠柱色譜、Sephadex LH-20(氯仿 -甲醇 1∶1)純化得化合物 Ⅵ。

將乙酸乙酯萃取部分以氯仿 -甲醇系統(tǒng) 100∶1、50∶1、30∶1、5∶1 進(jìn)行硅膠柱色譜分離 ,其中 50∶1流份經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜及重結(jié)晶得到化合物Ⅶ。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物Ⅰ:白色針狀結(jié)晶,mp.136～138℃。與β-谷甾醇對(duì)照品共薄層色譜,經(jīng) 3種溶劑系統(tǒng)展開,用 10%硫酸 -乙醇和磷鉬酸顯色,顯色行為和Rf值均相同,故鑒定化合物Ⅰ為β-谷甾醇。

化合物Ⅱ:白色蠟狀固體,C22H46,mp.43-45℃。m/z 310.6。1H-NMR(CDC13,500 MHz)δ:1.26(20H,brs,H-2～21),0.88(6H,t,H-l,22)。13C-NMR(CDCl3,500MHz)δ:22.7-32.0(C-2～21),14.1(C-1,H-22)。以上數(shù)據(jù)經(jīng)與文獻(xiàn)[4]對(duì)照一致,故鑒定化合物 II為正二十二烷。

化合物Ⅲ:白色粉末,C30H50O,mp.233-235℃,1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:0.72(3H,s,H-26),0.83(3H,s,H-25),0.93(3H,s,H-28),0.95(3H,s,H-30),1.00(3H,s,H-29),1.05(3H,s,H-27),1.18(3H,s,H-24),1.23(3H,s,H-23);13C-NMR(100MHz,CDCl3)δ:14.6(C-26),17.9(C-7),18.2(C-25),18.7(C-27),20.2(C-28),22.3(C-24),28.2(C-2),30.0(C-23),30.5(C-20),30.9(C-16),31.8(C-12),32.1(C-15),32.4(C-21),32.7(C-17),35.0(C-30),35.3(C-11),35.6(C-29),36.0(C-19),37.4(C-22),38.3(C-1),39.2(C-4),39.7(C-10),41.3(C-13),41.5(C-14),42.1(C-18),42.8(C-8),53.1(C-6),58.2(C-9),59.5(C-5),213.3(C-3).以上譜圖數(shù)據(jù)與已知化合物 3-羰基 -齊墩果烷[5]對(duì)照基本一致,故鑒定化合物Ⅲ為 3-羰基 -齊墩果烷 (3-ketooleanane)。

化合物Ⅳ:白色固體,C16H32O2,mp.62～65℃。EI-MS:m/z 256.0;1H-NMR(CDCl3,500MHz)δ:2.35(2H,t,J=7.2 Hz,-CH2COOH),1.63(2H,m,-CH2CH2COOH),1.23～1.34(24H,brs,-CH2×12),0.88(3H,t,J=6.8 Hz,-CH3);13C-NMR(CDCl3,500 MHz)δ:179.6(s,C-1),33.5(t,C-2),31.9(t,C-3),29.8-29.1(t,C-4～15),24.7(t,C-16),22.7(t,C-17),14.1(q,C-18)。以上數(shù)據(jù)經(jīng)與文獻(xiàn)[6]對(duì)照一致。故鑒定化合物 I V為正十六烷酸 (octadecanoic acid)。

化合物Ⅴ:白色粉末 (甲醇),C26H52O2,mp.87～88℃。EI-MS:m/z(%)396[M+,21.6],382(7.3),368(16.3),353(3.9),297(5),241(5.4)等為失 -CH2的碎片離子峰。1H-NMR(CDCl3):δ 0.88(3H,J=9.8 Hz,-CH3),1.28(44H,m,-CH2×22),1.64(2H,m),2.35(2H,J=12.5 Hz)為典型的長鏈脂肪酸氫譜特征;13C-NMR(CDCl3,500 MHz)δ:179.46(s,C-1),33.68(d,C-2),31.93(t,C-3),29.70(t,C-4),29.44(t,C-5),29.36(t,C-6),29.24(t,C-7),29.07(t,C-8),24.72(t,C-9),22.69(t,C-10),14.09(t,C-11),與已知化合物正二十六烷酸[7]的譜圖數(shù)據(jù)對(duì)照一致,故鑒定化合物Ⅴ為正二十六烷酸 (hexacosanoic acid)。

化合物Ⅵ:白色針狀結(jié)晶 (甲醇),mp.205-212℃,EI-MS:m/z 256.0;溴甲酚綠和三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)均成陽性,示分子內(nèi)含有羧基和酚羥基。EI-MS:m/z 198.0。13C-NMR(CDCl3,500MHz)譜中顯示有 9個(gè)碳信號(hào):δ170.68(-COOH),146.74(C-3,5),140.10(C-4),119.97(C-1),107.36(C-2,6),56.48(-OCH3×2)。結(jié)合碳譜可知1H-NMR(CD3OD,500 MHz)譜中δ7.26(2H,s,H-2,6)為典型的具有對(duì)稱結(jié)構(gòu)的芳香質(zhì)子信號(hào),δ3.96(6H,s,-OCH3×2)為具有對(duì)稱結(jié)構(gòu)的芳香核上的 2個(gè)甲氧基質(zhì)子信號(hào)。綜合分析,可推測該化合物為具有 2個(gè)甲氧基、1個(gè)酚羥基,且結(jié)構(gòu)對(duì)稱的苯甲酸類化合物。并與文獻(xiàn)[8]中丁香酸的氫譜、碳譜數(shù)據(jù)對(duì)照一致,故鑒定化合物Ⅵ為丁香酸 (eugenol)。

化合物Ⅶ:無色片狀晶體,C5H8O4,EI-MS:m/z 132.0。13C-NMR(CDCl3,500 MHz)譜中顯示有6個(gè)碳信號(hào):δ210.9(C-4),176.2(C-1),33.8(C-3),68.7(C-5),28.4(C-2);結(jié)合碳譜可知1H-NMR(500MHz,CD3OD)譜中δ4.24(2H,s,H-5),2.72(2H,t,J=6.5Hz,H-3),2.61(2H,m,J=6.5Hz,H-2)。以上數(shù)據(jù)與已知化合物 5-羥基 -4-氧代戊酸[9]的譜圖對(duì)照一致,故鑒定化合物Ⅶ為 5-羥基 -4-氧代戊酸 (5-hydroxy-4-oxopentanoic acid)。

4 討 論

(1)山木通 (Clem atis finetianaLévl.et Vant.)為毛茛科鐵線蓮屬植物,主要分布于云南、貴州、四川、湖北、浙江等省,其中在江西、四川等地多作威靈仙藥材使用[2];而在有些地區(qū)則常做川木通入藥[11],因此研究山木通所含化學(xué)成分對(duì)山木通的正確歸屬及藥用價(jià)值尤為重要。

(2)目前國內(nèi)外對(duì)山木通的研究很少,化學(xué)部分只有一篇關(guān)于其揮發(fā)性成分的報(bào)道[3],本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)山木通根及根莖的提取、分離和鑒定共得到 7個(gè)化合物,均為在山木通植物中首次得到。

(3)鐵線蓮屬植物中含有豐富的皂苷類成分,三萜皂苷主要為齊墩果酸型和常春藤皂苷元型[10],本實(shí)驗(yàn)也從中分離得到一個(gè)齊墩果烷型化合物 (化合物Ⅲ),為對(duì)該藥材進(jìn)一步深入研究提供了有意義的參考。

致謝:中國藥科大學(xué)分析測試中心為本研究提供了核磁及質(zhì)譜數(shù)據(jù)。另外,中國藥科大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目對(duì)本項(xiàng)目的研究也提供了部分資助。對(duì)此表示感謝。

[1] 中國植物志編輯委員會(huì).中國植物志:第 28卷[M].北京:科學(xué)出版社,2005:174-175.

[2] 楊 林,萬德光,威靈仙商品藥材品種調(diào)查研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2005,12(5):82-84.

[3] 邱曉春,靳鳳云,黃 婕,等.山木通揮發(fā)油化學(xué)成分分析[J].中草藥,2009,40(12):1888-1889.

[4] 王寶珍,趙 恒,馬冰如,等.軟棗彌猴桃莖化學(xué)成分分析(Ⅱ)[J].白求恩醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),1996,22(2):134.

[5] Wang Nannan,Wang Ye,Yang Jianqiong.Chemical Constituents from the Leaves of Phellodendron chinense Schneid var.glabriusculum Schneid[J].Nat Prod ResDev,2010,22:419-421.

[6] 許文清,龔小見,周 欣,等.馬蘭化學(xué)成分研究[J].中草藥,2010,41(7):1056-1059.

[7] 劉 赟,周 欣,龔小見.鬼箭羽的化學(xué)成分研究 (Ⅰ)[J].華西藥學(xué)雜志,2009,24(2):107-109.

[8] 李明潺,唐生安,段宏泉.野雉尾金粉蕨化學(xué)成分研究[J].中草藥,2010,41(5):685-688.

[9] 張曉琦,石寶俊,李藥蘭,等.白頭翁地上部分的研究[J].中草藥,2008,39(5):651-653.

[10] 孫 鳳,楊得坡.鐵線蓮屬植物的化學(xué)成分研究進(jìn)展[J].中國中藥,2009,34(20):2660-2668.