孔江紅 劉襄河 謝欽銘

隨著海水魚類養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大，養(yǎng)殖環(huán)境趨于惡化，各種病害日益劇增，大量抗生素和化學(xué)藥品的濫用引起抗藥性增加，嚴(yán)重影響海水魚類的品質(zhì)和人類健康。中草藥作為一種新型飼料添加劑，具有天然性、高效、毒副作用小和性能多樣化等優(yōu)點(diǎn)而漸受青睞。中草藥含有多種營(yíng)養(yǎng)成分和生物活性物質(zhì)，如多糖、甙類、生物堿、有機(jī)酸、揮發(fā)油等，既能提高水產(chǎn)動(dòng)物的非特異性免疫功能[1-4]，又能提高消化酶活性，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，從而提高水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)性能[5-9]。斜帶石斑魚(Epinephelus coioides)隸屬于鱸形目、鱸亞目、鮨科、石斑魚屬，為暖水性中下層魚類，是我國(guó)南方海水網(wǎng)箱養(yǎng)殖的主要經(jīng)濟(jì)魚類之一，因其生長(zhǎng)快、肉質(zhì)細(xì)嫩、味道鮮美而受到人們的青睞。本研究在飼料中添加不同劑量的復(fù)方中草藥，研究對(duì)斜帶石斑魚生長(zhǎng)性能、體成分和消化酶活性的影響，探討其適宜添加量及應(yīng)用的可行性，旨在為開辟中草藥在海水養(yǎng)殖魚類飼料中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)魚與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)魚為福建漳浦水產(chǎn)基地人工培育的斜帶石斑魚幼魚，平均體重為(19.72±0.22)g，體長(zhǎng)為(11.0±0.5)cm。石斑魚魚苗運(yùn)到集美大學(xué)海水養(yǎng)殖試驗(yàn)場(chǎng)，放入暫養(yǎng)池馴養(yǎng)15 d后，用濃度為150 ml/m3的福爾馬林溶液消毒，選取體格健壯、規(guī)格基本一致的個(gè)體，隨機(jī)放入12個(gè)150 L的循環(huán)流水過(guò)濾水族箱中，每組3缸，每缸15尾，稱初始體重后開始試驗(yàn)。

每天8:00和17:00定時(shí)投喂，每次達(dá)到表觀飽食。每天監(jiān)測(cè)水質(zhì)狀況，每周清洗玻璃缸，并用氟苯尼考消毒。試驗(yàn)用水為一級(jí)沙濾海水，光照為自然光源，用增氧機(jī)晝夜持續(xù)增氧，每次投喂后半小時(shí)吸出糞便，并換水約1/4～1/3，以保持水質(zhì)清新。試驗(yàn)期間水溫25～28℃，pH值8.2±0.3，溶氧濃度＞7.0 mg/l，氨氮濃度＜0.2 mg/l。試驗(yàn)期為42 d。

1.2 試驗(yàn)飼料的配制

中草藥為按照一定比例混合的大黃、柴胡、白茅根、槐花、貫眾、苦參等13種中草藥粉碎后，過(guò)80目篩，在飼料中分別添加0%、0.5%、1.0%、2.0%（飼料配方見表1），分別為對(duì)照組(CK)、0.5%組(F1)、1.0%組(F2)和2.0%組(F3)。各組飼料原料混勻后，制成3 mm粒徑的顆粒飼料，自然風(fēng)干后裝入自封袋中，置于-20℃冰箱中冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 樣品采集

試驗(yàn)結(jié)束后，禁食24 h，每缸魚整體稱重后，隨機(jī)取5尾魚，用50 mg/l丁香酚進(jìn)行麻醉處理，待魚側(cè)翻即可，測(cè)體長(zhǎng)、體重，然后將魚解剖分離出肝臟、胃和腸，用預(yù)冷的生理鹽水沖洗，濾紙吸干水分，并于-80℃下保存，用于制備粗酶液。解剖后的魚體，去頭、尾及鰭，于-20℃下保存，用于測(cè)定體成分。

表1 飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平（%）

1.4 生長(zhǎng)指標(biāo)分析

魚體稱重后絞碎，于70℃烘干，用微型粉碎機(jī)粉碎，制備魚體風(fēng)干樣品。測(cè)定魚體風(fēng)干樣品和飼料樣品常規(guī)成分：水分含量測(cè)定采用105℃常壓烘箱干燥恒重法；粗蛋白含量測(cè)定采用半微量凱氏定氮法（總氮×6.25）；粗脂肪含量的測(cè)定采用索氏抽提法（乙醚為抽提液）；灰分含量測(cè)定采用馬福爐灼燒法（550℃）。

分別按下式計(jì)算增重率(weight gain rate,WGR)、飼料系數(shù)(feed conversion rate,FCR)、特定生長(zhǎng)率(specific growth rate,SGR)、蛋白質(zhì)效率(protein efficiency ratio,PER)、肝體指數(shù)(hepatosomatic indexes,HSI)、肥滿度(condition factor,CF)、腹脂率(mesenteric lipid-somatic index,MSI)和存活率(survival rate,SR)。

增重率(%)=100×(Wt-W0)/W0；

飼料系數(shù)=FI/(Wt-W0)；

特定生長(zhǎng)率(%/d)=100×(lnWt-lnW0)/t；

蛋白質(zhì)效率(%)=100×(Wt-W0)/Wp；

肝體指數(shù)(%)=100×Wl/Wb；

肥滿度(%)=100×Wb/L3；

腹脂率(%)=100×Wf/Wb；

存活率(%)=100×Nf/Ni。

式中：W0——平均每尾魚初始體重(g)；

Wt——平均每尾魚終末體重(g)；

FI——平均每尾魚攝食飼料總量(g)；

t——飼喂天數(shù)(d)；

Wp——平均每尾魚攝入蛋白質(zhì)總量(g)；

Wl——每尾魚肝臟重量(g)；

Wf——每尾魚腹脂重量(g)；

Wb——每尾魚終末體重(g)；

L——每尾魚終末體長(zhǎng)(cm)；

Ni——初始魚尾數(shù)；

Nf——終末魚尾數(shù)。

1.5 粗酶液的制備和消化酶活力測(cè)定

稱重組織樣品，加入10倍體積(V/W)的預(yù)冷生理鹽水(0～4℃)，并在冰水浴中勻漿10 min。勻漿液用高速冷凍離心機(jī)進(jìn)行離心(4℃、3 000 r/min、20 min)，取上清液，即為消化酶粗提液。

蛋白酶活力的測(cè)定參考QB/T 1803—93。準(zhǔn)確稱取酪素，用少許濃NaOH溶液潤(rùn)濕，溶于一定的緩沖液，調(diào)節(jié)pH值(肝胰臟、腸7.5，胃2.6)，配成1%的酪素溶液。將1 ml 1%酪素溶液與1 ml粗酶液混合，在一定恒溫水浴中反應(yīng)10 min，用0.4 mol/l三氯乙酸2 ml終止反應(yīng)，對(duì)照為先加三氯乙酸終止反應(yīng)再加酪素。離心10 min，取1 ml反應(yīng)液于0.4 mol/l Na2CO35 ml混合，再加1 ml福林試劑，混勻，37℃顯色20 min，于660 nm測(cè)吸光值。

淀粉酶和粗酶液蛋白含量采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

1.6 數(shù)據(jù)處理

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SE)表示，用SPSS13.0分析軟件進(jìn)行單因素方差分析(ANOVA)，若存在顯著的差異，則采用Duncan's法進(jìn)行多重比較，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)方中草藥對(duì)斜帶石斑魚生長(zhǎng)性能的影響（見表2）

由表2可知，F(xiàn)1和F2組FAW分別比對(duì)照組高4.59%和3.85%，差異顯著(P＜0.05)。F1和F2組WGR顯著高于對(duì)照組和F3組(P＜0.05)，但F1組和F2組差異不顯著(P＞0.05)。F2組的FCR和MSI顯著低于對(duì)照組和F1組(P＜0.05)，F(xiàn)2組與F3組差異不顯著(P＞0.05)。F1和F2組SGR顯著高于對(duì)照組和F3組(P＜0.05)。F1、F2和F3組PER與對(duì)照組相比差異顯著(P＜0.05)，且F2組顯著大于F1和F3組(P＜0.05)，F(xiàn)3組顯著大于F1組(P＜0.05)。F2組的CF顯著高于對(duì)照組和F3組(P＜0.05)，與F1組差異不顯著(P＞0.05)。F2組的HSI顯著高于F1、F3和對(duì)照組(P＜0.05)，F(xiàn)3組也顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。

表2 復(fù)方中草藥對(duì)斜帶石斑魚生長(zhǎng)性能的影響

2.2 復(fù)方中草藥對(duì)斜帶石斑魚體成分的影響（見表3）

表3 復(fù)方中草藥對(duì)斜帶石斑魚體成分的影響(%)

由表3可知，各組水分含量和粗蛋白含量差異不顯著(P＞0.05)。F2組粗脂肪含量顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，但與F1和F3組差異不顯著(P＞0.05)。F3組灰分含量顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，但與F1和F2組差異不顯著(P＞0.05)。

2.3 復(fù)方中草藥對(duì)斜帶石斑魚蛋白酶活力的影響(見表4）

由表4可知，隨著復(fù)方中草藥添加量的增加，各消化道部位蛋白酶活力呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)。F2和F3組胃蛋白酶活力顯著高于對(duì)照組和F1組(P＜0.05)，且F2組高于F3組，但差異不顯著(P＞0.05)。F1、F2和F3組腸蛋白酶活力顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，且F2組顯著高于F1和F3組(P＜0.05)。F1、F2和F3組肝胰蛋白酶活力顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，且F2組顯著高于F1組(P＜0.05)。

表4 復(fù)方中草藥對(duì)斜帶石斑魚蛋白酶活力的影響（U）

2.4 復(fù)方中草藥對(duì)斜帶石斑魚淀粉酶活力的影響(見表5）

表5 復(fù)方中草藥對(duì)斜帶石斑魚淀粉酶活力影響(U)

表5所示，各消化道部位淀粉酶活力于蛋白酶活力的變化趨勢(shì)相同。F2組胃淀粉酶活力顯著高于對(duì)照組、F1和F3組(P＜0.05)；F1、F2和F3組腸淀粉酶活力顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，且F2組顯著高于F1組(P＜0.05)；F2組肝胰淀粉酶活力顯著高于對(duì)照組、F1和F3組(P＜0.05)。

3 討論

本試驗(yàn)中選用的苦參、大黃、柴胡等13種中草藥含有大量皂苷、多糖、甙類、生物堿、有機(jī)酸、揮發(fā)油等活性物質(zhì)，進(jìn)行復(fù)方配合后作為飼料添加劑具有促進(jìn)生長(zhǎng)、提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率和降低飼料系數(shù)等作用。邱小琮等[10]在飼料中添加山楂、麥芽等中草藥后，異育銀鯽(Carassius auratus gibelio)的增重率明顯提高。王吉橋等[11]在飼料中添加金銀花、人參、山楂等中草藥，牙鲆(Paralichthys olivaceus)的增重率和飼料轉(zhuǎn)化率顯著提高。姜志強(qiáng)[12]等在真鯛(Pagrosomus major)幼魚飼料中添加山楂、麥芽、當(dāng)歸等中草藥，2.0%的添加量可極顯著提高增重率(P＜0.01)，顯著降低飼料系數(shù)(P＜0.05)。陸志款等[13]將黃芪、當(dāng)歸、甘草和山楂等配成復(fù)方中草藥，按0.5%、1.0%、1.5%和2.0%的添加量連續(xù)喂養(yǎng)紅笛鯛(Lutjanus sanguineus)56 d，發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組魚的增重率均顯著高于對(duì)照組。湯菊芬等[14]在羅非魚(Oreochromis niloticus)的商品飼料中添加1.5%的復(fù)方中草藥制劑，發(fā)現(xiàn)增重率提高10.82%，蛋白質(zhì)效率提高15.68%，飼料系數(shù)降低4.71%。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在飼料中添加1.0%的復(fù)方中草藥，斜帶石斑魚的增重率較對(duì)照組提高了7.50%(P＜0.05)，蛋白質(zhì)效率提高了11.99%(P＜0.05)，飼料系數(shù)降低了10.85%(P＜0.05)，說(shuō)明本復(fù)方可有效提高斜帶石斑魚的生長(zhǎng)性能。

人工養(yǎng)殖魚類與野生魚類相比肉質(zhì)風(fēng)味有較大差異，源于決定肉質(zhì)風(fēng)味的主要成分的含量和比例，如蛋白質(zhì)、脂肪、游離氨基酸、醛、酯及酚等，而中草藥中的某些成分在養(yǎng)殖魚類體內(nèi)沉積，可改善肌肉品質(zhì)。羅慶華等[15]研究報(bào)道，杜仲提取物、大蒜素及兩者復(fù)方制劑能促進(jìn)草魚(Ctenopharyngodon idella)生長(zhǎng)，改善肌肉品質(zhì)，添加復(fù)方0.04%～0.08%可以協(xié)同改善草魚的生長(zhǎng)性能和肉質(zhì)。胡先勤等[16]在鯽魚(Carassius auratus L.)的基礎(chǔ)飼料中添加500 mg/kg的中藥提取物，能顯著提高鯽魚體蛋白質(zhì)和脂肪含量，改善魚肉品質(zhì)。本研究在飼料中添加1.0%的復(fù)方中草藥，斜帶石斑魚的腹脂率降低35.70%(P＜0.05)，脂肪含量提高7.49%(P＜0.05)，說(shuō)明本復(fù)方中草藥能夠提高脂肪的利用率，改善石斑魚的肌肉品質(zhì)。

消化酶主要是由消化腺和消化系統(tǒng)分泌的具有消化作用的酶類，魚類的消化主要在消化道中進(jìn)行，消化酶活性是反映魚類消化機(jī)能的一項(xiàng)重要指標(biāo)，適宜的中草藥添加劑可以提高魚類的消化酶活性。劉慧吉等[6]將炒蒼術(shù)、炒白術(shù)等中藥制成的兩種復(fù)方中草藥添加劑分別以0.5%、1%和2%的劑量添加到花鱸(Lateolabrax japonicus)的基礎(chǔ)飼料中，發(fā)現(xiàn)花鱸的淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性均有顯著提高(P＜0.05)。邱小琮等[7]研究表明，異育銀鯽攝食添加中草藥的飼料后，腸道和肝胰臟的蛋白酶和淀粉酶活性明顯提高。吉紅等[5]在泥鰍(Misgurnus anguillicaudatus)的飼料中添加不同水平的中草藥添加劑，能顯著提高泥鰍的淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性(P＜0.05)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加復(fù)方中草藥后，斜帶石斑魚胃、腸和肝胰臟的蛋白酶和淀粉酶活性均有所提高，尤其添加量為1.0%時(shí)，蛋白酶和淀粉酶活性均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。復(fù)方中草藥進(jìn)入石斑魚魚體消化道后，可以促進(jìn)消化酶分泌，提高消化酶活性，從而增強(qiáng)魚體對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，最終提高魚體的生長(zhǎng)性能。

本研究結(jié)果表明，在斜帶石斑魚飼料中添加1.0%的復(fù)方中草藥，可明顯提高其生產(chǎn)性能和消化酶活力。

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