竇 明，李 博

(鶴壁職業(yè)技術學院，河南鶴壁 458030)

酵母抽提物主要成分為蛋白質、海藻糖、多種氨基酸等，其成分復雜，根據蛋白質的性質和成分，測定蛋白質含量的方法有兩種［1］:一種是利用蛋白質的共性，即含氮量、肽鍵和折射率測定蛋白質含量;另一種是利用蛋白質中特定氨基酸殘基、酸堿性基團和芳香基團測定其含量。由于酵母抽提物中除蛋白氮外，還有氨基酸等含氮物質，故凱氏定氮法［2］不適于作為本實驗蛋白質含量的測定方法，需對蛋白質的快速、簡易測定方法進行研究。

1 材料和方法

1.1 試劑和設備

酵母抽提物，湖北安琪酵母公司;牛白蛋白(BSA)、硫酸銅、酒石酸鉀鈉(AR)，中國醫(yī)藥上海化學試劑公司;微型高速離心機，南京實驗儀器廠;721分光光度計，上海第三分析器廠。

1.2 實驗方法

試劑配制:準確稱取標準牛白蛋白1.00 g(蛋白質含量90%)加蒸餾水至100 mL，配制成10 g/L的標準牛白蛋白溶液。

雙縮脲試劑［3］:0.75 g五水硫酸銅和3 g酒石酸鉀鈉溶于250 mL蒸餾水中，加入40%氫氧化鈉溶液37.5 mL，搖勻定容至500 mL。

測定:取酵母抽提物溶液0.5 mL，加蒸餾水至1 mL，再加4 mL雙縮脲試劑，搖勻靜置。20 min，在550 nm波長下測定光密度［4］，從標準曲線上查得蛋白質含量。

2 結果與討論

2.1 標準曲線繪制

取6 支試管分別加入 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL標準牛白蛋白溶液，加蒸餾水至1 mL，加入4 mL雙縮脲試劑搖勻，在波長550nm處測定光密度。以蛋白質含量為橫坐標，光密度為縱坐標繪制標準曲線。其結果如表1、圖1。

表1 蛋白含量和光密度關系

圖1 蛋白光密度標準曲線

該標準曲線線性較好，可作為酵母抽提物中蛋白質含量測定的標準曲線。

2.2 酵母抽提物蛋白質含量測定

稱酵母9.154 g，加蒸餾水定容至100 mL，取三支試管，分別取該溶液各0.5 mL，加蒸餾水至1 mL，再加4 mL雙縮脲試劑，搖勻，靜置20 min后，在550 nm波長下測定光密度，從標準曲線上查得蛋白質含量，結果如表2所示。

表2 樣品中蛋白質含量測定結果

結果可知，蛋白質含量為9.06 g/L，相對偏差小于2%，準確度較高，換算到酵母抽提物蛋白質含量為9.90%。

2.3 酵母濃度對蛋白質含量測定的影響

稱酵母9.241 g，加蒸餾水搖勻定容至100 mL，取配制的溶液分別稀釋1～5倍，各取0.5 mL，加蒸餾水至1 mL，再加雙縮脲試劑4 mL，搖勻靜置20 min后在550 nm處測定光密度，求其平均含量和相對偏差，結果如表3所示。

表3 酵母抽提物濃度與蛋白質含量

由實驗結果可知，蛋白質含量在1.5 g/L以上，測定結果相對偏差小于3%，說明測定方法準確，相對誤差較小;蛋白質含量小于1.5 g/L，相對偏差較大，準確度相對較差。在整個測定范圍內，對測得的蛋白質含量和酵母抽提物濃度進行線性擬合得直線如圖2。

圖2 蛋白質含量和酵母抽提物濃度關系曲線

由圖可知，蛋白質含量和酵母抽提物近似線性關系，故可用雙縮脲法對不同酵母抽提物溶液中蛋白質含量進行測定。

3 小結

凱氏定氮法是經典測定總氮的方法，準確、精密度高，但程序繁瑣，費時長，有非蛋白氮干擾時測定偏差大;雙縮脲法測定蛋白質最小檢測含量至1.5 g/L，平行相對偏差較小，此法操作簡便，適合實驗室快速測定。

［1］馬增春，高 月，呂俊萍，等.雙向凝膠電泳中三種蛋白質檢測方法的比較［J］.中國生物化學與分子生物學報，2004，(4):129-134.

［2］王宗乾，程 龍，邱小永，等.凱氏定氮法測定牛奶纖維蛋白質含量［J］. 印染，2008，(12):35-37.

［3］郭穎娜，孫 衛(wèi).蛋白質含量測定方法的比較［J］.河北化工，2008，(4):40-41.

［4］沈萍萍，王朝輝，齊雨藻，等.光密度法測定微藻生物量［J］.暨南大學學報(自然科學與醫(yī)學版)，2001，(3):117-121.