薛祖洪,劉燦均,周明先,陶 嵐

(江蘇省靖江市人民醫(yī)院,江蘇靖江,214500)

結(jié)核病(Tuberculosis,TB)已成為威脅全球公共健康的傳染病之一。近年來,結(jié)核病的發(fā)病率呈上升趨勢。然而,人類感染結(jié)核分枝菌后,僅有少數(shù)人發(fā)病,其中部分發(fā)病者呈隱性感染且能自愈[1],表明機體存在著有效的抗結(jié)核保護性免疫反應,這種反應主要是細胞免疫反應。為此,我們檢測了62例結(jié)核病患者外周血T淋巴細胞亞群和血清相關(guān)細胞因子水平,旨在探討其與結(jié)核病發(fā)病、發(fā)展、診治及轉(zhuǎn)歸之間的關(guān)系。

1 臨床資料

活動性結(jié)核組:選自我院門診或住院的結(jié)核病患者62例(男 35例,女27例)年齡16～65歲,平均38.5歲,其中原發(fā)性肺結(jié)核3例,血行播散性肺結(jié)核12例,繼發(fā)性肺結(jié)核33例,結(jié)核性胸膜炎9例,肺外結(jié)核5例。患者根據(jù)2008年衛(wèi)生部發(fā)布的《中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準》進行分類。所有肺結(jié)核患者均痰菌涂陽或結(jié)核分枝菌培養(yǎng)陽性;結(jié)核性胸膜炎和肺外結(jié)核依據(jù)患者病史,臨床癥狀及輔助檢查等綜合進行判斷。

結(jié)核病康復組:上述結(jié)核病患者經(jīng)標準抗結(jié)核化療一年后,隨訪到38例病人,根據(jù)胸片吸收好轉(zhuǎn)、痰菌陰轉(zhuǎn)、癥狀改善、血沉正常等確定為治療康復者。

健康對照組 選自來我院健康體檢者25例(男13例,女 12例)年齡 18～ 63歲,平均 36.0歲,入選者肝功能、腎功能、胸片等所有檢查結(jié)果均正常,且近期無結(jié)核病接觸史。

方法:所有入選者空腹采靜脈血4 mL,分成二管,其中一管用肝素抗凝,用流式細胞術(shù)分別檢測結(jié)核病患者活動期和康復期及健康者外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+FoxP3+調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)比例;另一管及時分離血清,貯存-80℃低溫冰箱,用ELISA法集中檢測血清中干擾素-γ(IFN-γ)、可溶性白細胞介素 2受體(sIL-2R)、白細胞介素4(IL-4)水平,試劑盒購自法國DIACLONE公司,用BIO-RAD 550型酶標儀測定,并與25例健康人作比較。

1.3 統(tǒng)計學處理

2 結(jié) 果

結(jié)核病患者活動期和康復期外周血T淋巴細胞亞群檢測結(jié)果見表1;結(jié)核病患者活動期和康復期血清相關(guān)細胞因子檢測結(jié)果見表2。

表1 結(jié)核病患者活動期和康復期外周血T淋巴細胞亞群檢測結(jié)果(±s)

表1 結(jié)核病患者活動期和康復期外周血T淋巴細胞亞群檢測結(jié)果(±s)

注:與健康對照組比較,＊P>0.05;與健康對照組比較,△P<0.01;與健康對照組比較,△△P<0.05。

組別 例數(shù) CD3+(%) CD4+(%) CD8+(%) CD4+CD25+Foxp3+(%)活動性結(jié)核組 62 71.9±9.2＊ 36.5±10.6△△ 34.8±9.5△△ 2.63±1.52△結(jié)核病康復組 38 73.2±6.8＊ 38.9±9.2＊ 32.5±8.6＊ 2.16±1.33＊健康對照組 25 74.2±5.5 42.2±8.3＊ 29.7±6.1 1.71±0.68

表2 結(jié)核病患者活動期和康復期血清細胞因子檢測結(jié)果(±s)

表2 結(jié)核病患者活動期和康復期血清細胞因子檢測結(jié)果(±s)

注:與健康對照組比較,＊P>0.05;與健康對照組比較,△P<0.01;與健康對照組比較,△△P<0.05。

組別 例數(shù) IFN-γ(ng/L) sIL-2R(U/mL) IL-4(ng/L)活動性結(jié)核組 62 10.12±4.95△△ 231±121△△ 1.36±1.02△結(jié)核病康復組 38 11.21±5.25＊ 259±95＊ 0.96±0.65＊健康對照組 25 12.66±3.98 296±89 0.75±0.46

3 討 論

結(jié)核分枝桿菌是一種胞內(nèi)寄生菌,結(jié)核病是結(jié)核分枝桿菌在體內(nèi)的一個慢性、持續(xù)的刺激過程,使機體表現(xiàn)為一種持續(xù)性的免疫應答。機體在抵抗結(jié)核分枝桿菌感染的過程中,細胞免疫應答發(fā)揮著重要作用,決定細胞免疫強弱的主要因素是血液中T淋巴細胞亞群比例及相關(guān)細胞因子的作用。Treg細胞是CD4+T細胞的亞群,許多研究表明,T reg細胞在預防自身免疫病方面起著重要作用并與多種腫瘤及慢性感染性疾病的免疫抑制有關(guān)[2-5]。本研究結(jié)果顯示,與健康對照組相比較,結(jié)核病患者在活動期外周血CD3+細胞比例無顯著差異(P>0.05);CD4+細胞比例顯著下降(P<0.05);CD8+細胞比例顯著增加(P<0.05);CD4+/CD8+比值顯著下降;CD4+CD25+FoxP3+調(diào)節(jié)性T細胞比例顯著增加(P<0.01);結(jié)核病患者康復期外周血淋巴細胞亞群比例與健康對照組無明顯差異。表明Treg細胞可能參與結(jié)核分枝桿菌感染后的免疫調(diào)節(jié)和免疫監(jiān)視過程,并與結(jié)核病的發(fā)生、發(fā)展和活動有關(guān)。而外周血中 CD4+比例下降、CD8+比例升高、CD4+/CD8+比值下降可能是由于Treg細胞導致機體細胞免疫功能下降并紊亂,進而導致結(jié)核分枝菌在體內(nèi)的慢性持續(xù)感染。經(jīng)過抗結(jié)核化療后,如T淋巴細胞亞群比例恢復正常,則該患者康復快,預后好,而部分病例治療后,T淋巴細胞亞群比例不能恢復正常,則病程長,預后差,且有反復發(fā)作的可能。

本研究還對結(jié)核病患者相關(guān)細胞因子進行了測定,結(jié)果顯示,結(jié)核病患者在活動期IFN-γ、sIL-2R水平顯著下降,IL-4水平顯著上升,康復期基本恢復正常。有學者對活動性結(jié)核病人血漿中幾種標志物研究發(fā)現(xiàn),未治療的肺結(jié)核病人Th1活性下降,Th2活性升高,而經(jīng)抗結(jié)核治療后Th1活性升高,Th2活性下降[6],IFN-γ是一個由Th1細胞分泌的重要免疫調(diào)節(jié)因子,不僅具有直接抗病毒和抗細菌的活性,而且能調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)其它細胞的反應,IFN-γ還能激活巨噬細胞,增加它們對結(jié)核分枝菌的殺菌能力,在局部抗結(jié)核感染的防御機制中起重要作用[7]。結(jié)核菌進入巨噬細胞后,巨噬細胞產(chǎn)生IL-12和IL-18等細胞因子,促使Th0細胞轉(zhuǎn)化為 Th1細胞,產(chǎn)生IFN-γ和IL-2從而介導細胞免疫反應。sIL-2R在人類免疫應答和免疫調(diào)節(jié)中也起重要作用,sIL-2R由正常淋巴細胞通過刺激產(chǎn)生。本研究顯示,結(jié)核病患者活動期血清IFN-γ、sIL-2R水平比健康對照組顯著下降,治療康復后血清濃度趨于正常。表明結(jié)核病患者發(fā)病期可能存在IFN-γ分泌減少,IL-2分泌缺陷及IL-2受體表達缺陷。結(jié)核菌進入機體后,自然殺傷或肥大細胞可產(chǎn)生IL-4,并促進 Th0細胞轉(zhuǎn)化為Th2細胞,產(chǎn)生 IL-4等細胞因子,誘導B細胞增殖分化,從而介導體液免疫反應。Th2細胞的增高可下調(diào)Th1反應,抑制IFN-γ產(chǎn)生。因此不利于結(jié)核感染控制。

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