鄧良準(zhǔn),李 銳

(1.陜西省漢中市三二0一醫(yī)院感染科,陜西漢中,723000;2.山西省太原市傳染病院,山西太原,030012)

乙型病毒性肝炎是我國(guó)的高發(fā)病,掌握乙肝 病毒在體內(nèi)的復(fù)制對(duì)準(zhǔn)確判斷病情以及對(duì)抗病毒治療的準(zhǔn)確監(jiān)測(cè)具有重要的意義。目前,絕大多數(shù)醫(yī)療機(jī)構(gòu)不具備檢測(cè)HBV-DNA的條件,只能根據(jù)乙肝標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果粗略判斷有無(wú)乙肝病毒復(fù)制。為探討HBV-DNA,PreS1與其他HBV標(biāo)志物的相關(guān)性,正確評(píng)價(jià)其臨床意義,作者采用熒光定量PCR技術(shù),酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)分別對(duì)200份HBsAg陽(yáng)性樣本及40份HBsAg陰性樣本進(jìn)行了 HBV-DNA、PreS1、HBVm 標(biāo)志物檢測(cè),以討論其相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇本院感染科2005年8月至2007年9月住院HBV感染者200例,均符合2000年第10次全國(guó)病毒性肝炎會(huì)議制定乙肝診斷標(biāo)準(zhǔn),男128例,女72例,年齡20～59歲,平均39.8歲。其中急性乙肝患者血清25份(抗HBc-IgM陰性),慢性乙肝患者血清145份,肝硬化患者血清30份。對(duì)照組選擇其他類型肝炎40例進(jìn)行PreS1檢測(cè)。

1.2 方法

HBV PreS1檢測(cè):HBV PreS1試劑由中國(guó)科學(xué)院上海生物化學(xué)研究所研制,上海阿爾法生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA),按試劑說(shuō)明書操作。

HBV-DNA定量:檢測(cè)所用儀器系德國(guó)Roche公司生產(chǎn)的Light Cycler自動(dòng)熒光PCR儀;HNV-DNA FQ-PCR試劑盒由深圳皮基生物工程公司提供,嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書操作。

HBV血清標(biāo)志物:檢測(cè)試劑有華美生物工程公司生產(chǎn),采用ELISA方法按試劑說(shuō)明書操作。

2 結(jié) 果

2.1 200例HBV感染者HBV-DNA熒光定量及PreS1抗原檢測(cè)

在能夠檢測(cè)到HBV-DNA的158份血清樣本中(病毒載量>103拷貝/mL),PreS1抗原陽(yáng)性率達(dá)81.6%(129/158)。且隨血漿中HBV-DNA含量水平的增加,PreS1抗原陽(yáng)性檢出率也隨之上升,2者之間存在顯著相關(guān)性(P<0.01)。見(jiàn)表1。

表1 200份標(biāo)本HBV-DNA含量與PreS1檢測(cè)結(jié)果比較

2.2 不同HBV血清標(biāo)志物組合HBV-DNA熒光定量PreS1抗原檢測(cè)

HBeAg陽(yáng)性標(biāo)本91份,其中HBV-DNA陽(yáng)性88份(陽(yáng)性率96.7%),PreS1抗原陽(yáng)性81份(陽(yáng)性率89.0%)。HBeAg陰性率64.2%;PreS1抗原陽(yáng)性53例,陽(yáng)性率48.6%。HBeAg陰性,抗HBe陽(yáng)性血清82份中,PreS1抗原陽(yáng)性率54.8%(45/82);PreS1抗原存在于HBeAg,抗HBe雙陰性血清(27)中 8份,陽(yáng)性率29.6%(8/27),見(jiàn)表2。

表2 不同HBVm下HBV-DNA,PreS1的檢測(cè)結(jié)果

2.3 不同乙肝、肝硬化患者HBV-DNA及PreS1檢測(cè)

急性乙肝、輕度慢性乙肝標(biāo)本中HBV-DNA及PreS1的陽(yáng)性檢出率無(wú)顯著性差異(P>0.05)。而中重度慢性乙肝、肝炎肝硬化標(biāo)本中HBV-DNA陽(yáng)性檢出率明顯高于PreS1(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 急慢性乙肝和肝硬化患者HBV-DNA、PreS1關(guān)系

3 討 論

前S1抗原(PreS1)抗原由乙肝病毒前S1編碼,由108或119個(gè)氨基酸組成的肽段,其位于HBVDane顆粒和管型顆粒上,具有高度的免疫原性。PreS1抗原只存在與完整的HBV顆粒上,具有很高的特異性。眾多研究認(rèn)為PreS1、PreS2及多聚人體血清蛋白受體(PHSA-R)在乙肝病毒侵入肝細(xì)胞過(guò)程中起重要作用,其在HBV復(fù)制時(shí)表達(dá)最多,可作為HBV復(fù)制的標(biāo)志[1-4]。

通過(guò)對(duì)200份乙肝患者血清樣本檢測(cè)可以看出,在158份HBV-DNA定量陽(yáng)性標(biāo)本中PreS1抗原的陽(yáng)性率高達(dá)81.6%,且隨著病毒含量水平的增加 PreS1抗原的陽(yáng)性率也隨之升高。因此PreS1抗原很好的反映了HBV在體內(nèi)的復(fù)制狀況。但應(yīng)該注意的是在HBV-DNA陰性的標(biāo)本中仍有11.9%PreS1抗原陽(yáng)性。這可能是由于抗病毒藥物所致的HBV-DNA復(fù)制抑制或引物對(duì)應(yīng)的DNA序列變異等原因所致[5]。

在對(duì)不同的HBV血清標(biāo)志物組合分組進(jìn)行HBV-DNA熒光定量及PreS1抗原對(duì)比發(fā)現(xiàn),在HBeAg陰性標(biāo)本中仍有48.6%PreS1抗原陽(yáng)性,更有64.2%HBV-DNA熒光定量陽(yáng)性。可能是由于HBV基因組前C區(qū)發(fā)生變異導(dǎo)致HBeAg表達(dá)障礙。此時(shí)HBeAg陰性并不表達(dá)HBV復(fù)制停止或病毒血癥消失[6-9]。因此PreS1抗原可作為一種重要的病毒復(fù)制補(bǔ)充指標(biāo)。

在對(duì)不同感染階段樣本分組比較發(fā)現(xiàn),PreS1抗原在急性乙肝檢出率高達(dá)92%,而且在急性乙肝及輕度乙肝樣本中HBV-DNA熒光定量及PreS1抗原陽(yáng)性率間沒(méi)有顯著差異。而在中重度慢性乙肝兩者陽(yáng)性率存在差異。同時(shí)急性及中重度慢性乙肝HBV-DNA熒光定量及PreS1抗原陽(yáng)性率高于輕度慢乙肝。提示一方面在急性感染及中重度慢性乙肝階段病毒復(fù)制水平較高,HBVDNA熒光定量及PreS1抗原具有良好的相關(guān)性。另一方面隨著疾病的進(jìn)展PreS1抗原的檢出率較HBV-DNA有所下降,尤其在進(jìn)入肝炎肝硬化階段HBV-DNA熒光定量都有顯著下降,以PreS1抗原的檢出率下降尤甚。其原因可能是隨著疾病的進(jìn)展,HBV-DNA與肝細(xì)胞的基因組發(fā)生整合。隨著感染病程延長(zhǎng)和病情加重,整合率會(huì)增加,從而導(dǎo)致血清HBV含量減低,檢出率下降[10]。

綜上所述,傳統(tǒng)上根據(jù)HBeAg是否陽(yáng)性來(lái)判斷HBV的復(fù)制情況是非常不嚴(yán)謹(jǐn)?shù)腫11-13]。都應(yīng)進(jìn)行血清HBV-DNA定量測(cè)定。如果條件可以開(kāi)展PreS1抗原的檢測(cè)作為參考和補(bǔ)充指標(biāo)。這樣能夠更真實(shí)的反映HBV感染及復(fù)制情況。PreS1抗原在早期診斷乙肝,判斷預(yù)后及確定治療方案等反面具有重要的臨床價(jià)值。

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