冒 群

(江蘇省如皋市人民醫(yī)院藥劑科,江蘇如皋,226500)

尼扎替丁(nizatidine)是一種強(qiáng)效、選擇性組胺H2受體阻滯劑,競爭性地與組胺H2受體相結(jié)合,可逆性地抑制其功能,從而抑制胃酸分泌[1-2]。該藥在國外已上市多年,用于治療消化性潰瘍、胃食管反流性疾病引起的燒心癥狀等,且無明顯毒副作用[3-4]。消化性潰瘍發(fā)作時,上腹疼痛呈反復(fù)周期性發(fā)作,疼痛難忍,多呈鈍痛、灼痛或饑餓樣痛等[5-8]。為了迅速緩解疼痛給病人帶來的巨大痛苦,故將尼扎替丁制成分散片。為了揭示尼扎替丁分散片速釋藥物的行為,本研究建立了改進(jìn)的高效液相色譜測定方法,并且應(yīng)用于人體藥代動力學(xué)研究,為臨床安全、有效提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器與試劑:Waters 2690 Alliance HPLC儀,包括water 2487雙波長檢測器,Millennium32數(shù)據(jù)采集處理系統(tǒng);3-18K高速離心機(jī)(德國sigma公司);HUP系列超純水器(上海禾工科學(xué)儀器有限公司);微孔濾膜及過濾裝置(MilliporeUSA)。

試驗(yàn)藥:尼扎替分散片(150 mg/片,威特(湖南)藥業(yè)有限公司,批號100601)。對照藥:尼扎替丁片(150 mg/片,江蘇恩華制藥有限公司,批號100517)。尼扎替丁標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥科大學(xué)藥物合成研究室提供,純度98%以上);雷尼替丁對照品(天津一方科技有限公司,純度98%以上)。甲醇為色譜純,水為超純水,其余試劑均為分析純。

1.1.2 對照品儲備液及內(nèi)標(biāo)溶液的制備:精密稱取尼扎替丁對照品適量,用甲醇溶解制備成含尼扎替丁50 mg/L的對照品儲備液,4℃冰箱中保存。臨用時,精密吸取適量,用流動相稀釋至所需濃度即可。

精密稱取雷尼替丁內(nèi)標(biāo)物適量,用甲醇溶解制備成含雷尼替丁60 μ g/L的對照品儲備液,于4℃冰箱中保存。

1.2 方法[9-11]

1.2.1 血漿樣品預(yù)處理:精密吸取受試者血漿0.5 mL,置于15 mL具塞試管內(nèi),精密加入內(nèi)標(biāo)物50 μ L(60 μ g/mL 雷尼替丁溶液)和50 μ L 鹽析溶液(NaCl 10.0 g,氫氧化鈉8.0 g,加適量的水至100 mL)。搖勻,加入三氯甲烷4.0 mL,漩渦混旋2 min,高速離心(12 000 r/min)10 min,取下層有機(jī)相于10 mL尖底玻璃試管中,40℃水浴中氮?dú)獯蹈?進(jìn)樣前殘渣用100 μ L流動相溶解 ,進(jìn)樣 80 μ L 。

1.2.2 色譜條件:色譜柱Dikma Diamonsil C18(150 mm×4.6 mm,5 μ m)。流動相0.01 mol/L醋酸銨緩沖液:甲醇(60:40)。流速1 mL/min;柱溫40℃;檢測波長320 nm。

1.2.3 受試者選擇:健康志愿者分成兩組,每組6人,年齡(22.3±1.5)歲,體質(zhì)量(63.5±7.0)kg。經(jīng)病史詢問,并經(jīng)肝腎功能、血尿常規(guī)和心電圖檢查證實(shí)為健康受試者,志愿參加尼扎替丁分散片的人體生物利用度試驗(yàn)。受試者對試驗(yàn)過程及可能發(fā)生的不良反應(yīng)表示理解并簽約知情同意書,試驗(yàn)經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)。受試者受試前2周及試驗(yàn)期間未用過任何其他藥物并禁煙酒。各組分別單劑量口服尼扎替丁分散片和尼扎替丁普通片,劑量均為20 mg。受試者于試驗(yàn)前日晚8時后禁食,次日晨用200 mL溫開水送服受試藥物。服藥2 h后方可飲水,4 h后進(jìn)相同低脂肪、低蛋白標(biāo)準(zhǔn)餐。受試者于服藥前及服藥后0.25、0.5、1、1.5 、2、4、6、8、10、12 h 取靜脈血 2 mL 于肝素試管中,分離出血漿,-40℃保存待測。整個實(shí)驗(yàn)在醫(yī)護(hù)人員監(jiān)護(hù)下進(jìn)行,并對藥物產(chǎn)生的不良反應(yīng)及時記錄和處理。

2 結(jié) 果

2.1 專屬性

將口服藥物后的血漿按“1.2.1”項下操作,取80 μ L注入高效液相色譜儀,同法處理空白血漿和空白血漿加對照品和內(nèi)標(biāo)的血漿,所得色譜圖顯示,尼扎替丁和雷尼替丁(內(nèi)標(biāo))的峰形對稱,保留時間分別為6.113 min和4.532 min,且血漿中的雜質(zhì)不干擾樣品的測定,基線平穩(wěn),因此本法具有良好的專屬性。

2.2 尼扎替丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密量取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液適量,分別加入1 mL空白血漿中,配成血漿濃度分別為 10、20、60、100、300、600、900、1 400 μ g/L 樣品 ,樣品均按“1.2.1血漿樣品預(yù)處理”項下操作,取 80 μ L進(jìn)樣,進(jìn)行HPLC分析以測得的尼扎替丁峰面積(Y)對血漿藥物濃度(C)進(jìn)行線性回歸,得工作標(biāo)準(zhǔn)曲線方程(n=6):Y=0.001081 C-0.05394,r=0.9998。尼扎替丁的血藥濃度在10～1 200 μ g/L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,按信噪比3∶1確定最低檢測限,最低檢測限度為10 μ g/L。

2.3 精密度和回收率

采用空白血漿,添加適量的標(biāo)準(zhǔn)溶液,配置濃度高 、中 、低 3種濃度為 900 、100 、20 μ g/L 的加樣標(biāo)本,作為質(zhì)控樣品,每個濃度各6份,按“1.2.1血漿樣品預(yù)處理”項下操作,測定尼扎替丁的濃度,以實(shí)測濃度與加入濃度之比乘以100%,計算回收率,并計算日內(nèi)差。以同樣的方法連續(xù)測定6 d,計算日間差,結(jié)果見表1。結(jié)果表明測得的日內(nèi)及日間精密度均小于10%,回收率可達(dá)90%以上,可見本方法有較好的準(zhǔn)確性,符合生物樣本測定方法的要求。

2.4 穩(wěn)定性

取高 、中 、低 3 種濃度為 900 、100 、20 μ g/L 的質(zhì)控血漿,按“1.2.1血漿樣品預(yù)處理”項下步驟處理后放于室溫下自動進(jìn)樣器中,分別在 0、8、16、24 h測定,比較不同時間測定的濃度。結(jié)果尼扎替丁的濃度變化小于5%,表明血漿樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5 多次凍融試驗(yàn)結(jié)果

配制高、中、低3種濃度的質(zhì)控血漿適量,即時測定;另-20℃冷凍保存,解凍測定,連續(xù)3次,計算經(jīng)3次凍融后尼扎替丁測定濃度的變化。結(jié)果尼扎替丁的濃度變化小于5%,表明血樣經(jīng)3次凍融后穩(wěn)定性較好(表2)。

2.6 尼扎替丁在人體內(nèi)藥代動力學(xué)

12例健康志愿者空腹單劑量口服尼扎替丁分散片和普通片(150 mg)后,繪制血漿中平均血藥濃度-時間曲線圖,采用DAS2.1軟件對尼扎替丁的藥-時曲線進(jìn)行擬合,結(jié)果表明,尼扎替丁的藥-時曲線符合二室模型,所計算出的主要藥動學(xué)參數(shù)見表1,本方法適用于測定人血漿中尼扎替丁的濃度。

表1 尼扎替丁主要藥代動力學(xué)參數(shù)(±s,n=6)

表1 尼扎替丁主要藥代動力學(xué)參數(shù)(±s,n=6)

參數(shù) 尼扎替丁分散片 尼扎替丁普通片Cmax(μ g/L) 1 614.8±106.2 1 311.7±89.5 tmax(h) 1.0±0.6 1.5±0.4 t1/2(h) 4.8±1.3 5.3±1.1 AUC0∞[μ g/(h·L)] 4 731.3±118.29 4 518.6±108.3 AUC0t[(μ g/(h·L)] 2 216.7±106.9 2 187.4±78.9

3 討 論

前期研究選擇血漿中尼扎替丁的提取方法時,分別比較了正丁醇、乙酸乙酯、氯仿、甲基叔丁醚、環(huán)己烷等,結(jié)果因用環(huán)己烷和正丁醇提取,所得提取液不易揮干;用乙酸乙酯和甲基叔丁醚提取,提取溶劑中雜質(zhì)太多,干擾樣品的測定。而尼扎替丁又易溶于氯仿,其溶解度是水中的4倍多,因此采用氯仿為提取溶劑;同時為減少尼扎替丁在血漿中的溶解造成的損失,采取堿化加鹽析的方法,保證萃取回收率,同時也了滿足最低檢測限(約 10 μ g/L)的要求。

尼扎替丁分散片與普通片比較,其在體內(nèi)代謝行為明顯加快,約1.0 h左右到達(dá)血藥濃度頂峰,且血藥濃度明顯比普通片提高1.23倍,消除半衰期為4.8 h左右。這可能與普通片劑存在著崩解速度慢的缺點(diǎn),對藥物的吸收有一定的影響有關(guān)。分散片速崩是由于所選擇的崩解劑具有不溶于水(可不完全溶于水)與吸濕性強(qiáng)的特點(diǎn),水分子通過毛細(xì)管作用或膨脹作用滲透進(jìn)入片劑之中,吸水后粉粒膨脹而不溶解,不形成膠體溶液,不至于阻礙水分子的繼續(xù)滲入而影響片劑的進(jìn)一步崩解。故一般而言,分散片在19～21℃水中一般3 min內(nèi)完全崩解,明顯提高了藥物的吸收度。分散片使藥物的達(dá)峰峰度增加,達(dá)峰時間縮短。對于嚴(yán)重消化性潰瘍患者而言,迅速緩解疼痛將會帶來臨床療效上的優(yōu)勢。

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