何 軍 左 麗 （貴陽醫(yī)學院免疫學教研室,貴陽 550004）

·實用臨床免疫學·

海洛因依賴者血清中IL-9、IL-17水平的研究

何 軍 左 麗 （貴陽醫(yī)學院免疫學教研室,貴陽 550004）

目的:通過檢測IL-9、IL-17在海洛因依賴者血清中水平的變化,為進一步認識海洛因對機體免疫功能的影響提供依據。方法:93例海洛因依賴者按吸食海洛因時間長短分為三組（2年以內、5～10年、10年以上）,31例正常人血清作為對照組,用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測各組血清IL-9、IL-17水平。結果:2年以內組和5～10年組海洛因依賴者血清IL-9較正常對照升高（P＜0.05）、各組IL-17水平較正常對照組降低（P＜0.05）;從2年以內組到 5～10年組到 10年以上組,IL-9水平先升高后降低[（334.92±144.41）pg/ml、（353.47±176.93）pg/m l、（287.38±129.94 pg/ml）],IL-17水平先降低后相對升高[（53.38±26.08）pg/ml、（45.87±16.81）pg/m l、（68.18±39.26）pg/m l）]。結論:IL-9、IL-17在海洛因依賴者血清中水平改變明顯,吸食海洛因可刺激IL-9水平升高而抑制機體IL-17的水平表達。

海洛因依賴者;IL-9;IL-17;免疫功能

阿片類物質濫用現(xiàn)象已成為一個全球性健康和社會問題,越來越引起人們的重視。阿片類物質影響機體神經、內分泌、免疫、循環(huán)、代謝等各個器官系統(tǒng)的功能狀態(tài),長期吸食海洛因可導致機體免疫功能的降低[1,2]。

細胞因子作為細胞間信號傳遞分子,主要參與調節(jié)免疫應答、免疫細胞分化發(fā)育、介導炎癥反應等。我們根據本組設計方案研究了海洛因依賴者血清中Th1和Th2細胞產生主要細胞因子IFN-γ和IL-4水平,證明海洛因依賴者存在Th1/Th2功能紊亂,特別是吸食海洛因5～10年間以Th1亢進、Th1降低為主[3]。IL-9主要由Th9細胞分泌,是抗病毒免疫的關鍵分子,調節(jié)T細胞和B細胞應答。IL-17主要由Th17細胞分泌,是一種促炎癥因子,在適應性免疫和固有免疫中有很強的調節(jié)作用。通過排除常見血源傳播病原體,根據吸食海洛因時間長短檢測IL-9、IL-17水平來了解海洛因對機體免疫功能的影響報道較少,本文做了相關研究,報道如下:

1 材料與方法

1.1 材料 受檢對象:海洛因依賴組:收集2009年1～12月貴州省第二人民醫(yī)院美沙酮維持治療門診就診的海洛因依賴者共93例,其中男69例,女24例,年齡20～52歲,平均38.2歲。吸食海洛因時間平均8.0年,海洛因日均用量0.25～5.20克。全部患者海洛因濫用史明確,符合DSM-Ⅲ-R關于阿片類藥物依賴診斷標準。各例均排除HBsAg、HCV、HIV、TP陽性,排除肝功能異常（AlT＞40）,腎功能異常（BUN、CRE、UA在參考范圍外）,排除接受過美沙酮治療及6月內使用免疫制劑。對照組:來自貴州省第二人民醫(yī)院體檢中心正常健康體檢者31例,其中男22例,女9例,年齡在21～50歲,平均年齡37歲。各例排除內容同上。

1.2 主要試劑和儀器 IL-9、IL-17檢測用ElISA試劑盒為美國GBD公司原裝試劑,批號分別為I056-00,I073-00。-40℃低溫冰箱（青島海爾公司）,德國Eppendorf微量移液器,美國BIO-TEK ElX800UV酶聯(lián)免疫檢測儀,北京普朗DNX-9620A洗板機,恒溫水浴箱（上海醫(yī)療器械七廠600型）。

1.3 研究方法 標本收集:提供血樣者均空腹采集靜脈血 4 ml于真空采血管,37℃水浴 30分鐘后3 000 r/min離心15分鐘,取血清1.5 ml于Ep管,-40℃冰箱保存待測。測定方法:雙抗體夾心ELISA法檢測血清IL-9、IL-17水平,按照試劑說明書操作。

2 結果

海洛因依賴者血清中IL-9水平,2年以內組、5～10年組均高于正常對照組（P＜0.05）,而10年以上組與正常對照組間無統(tǒng)計差異（P＞0.05）,各時間組間無統(tǒng)計差異（P＞0.05）;IL-17水平,各時間組均低于正常對照組（P＜0.05）,且10年以上組較5～10年組相對升高（P＜0.05）。見表1,圖1、2。

圖1 吸食海洛因2年內、5～10年、10年以上和正常對照IL-9、IL-17水平比較Fig.1 Comparison of concentrations of IL-9 and IL-17 in sera between the groups ofheroin addicts of within 2 years,5-10 years,over 10 years and thenormal group

圖2 各組海洛因依賴者血清IL-9、IL-17水平與正常對照組比較Fig.2 The levelof IL-9,IL-17 in sera from the heroin addicts of different periods of time,which were compared with thenormal group

表1 各組海洛因依賴者血清中IL-9和IL-17水平的比較（±s,pg/m l）Tab.1 Comparisons among the concentrations of IL-9,IL-17 in sera from the heroin addicts of different periods of time（±s,pg/m l）

表1 各組海洛因依賴者血清中IL-9和IL-17水平的比較（±s,pg/m l）Tab.1 Comparisons among the concentrations of IL-9,IL-17 in sera from the heroin addicts of different periods of time（±s,pg/m l）

Note:1）P＜0.05,vsnormalgroup;2）P＜0.05,vsover 10 yearsgroup.

Cytokines Heroin addictsgroups Within 2 years 5-10 years Over 10 years Normal group IL-9 334.92±144.411）353.47±176.931）287.38±129.94 217.96±41.51 IL-17 53.38±26.081） 45.87±16.8112） 68.18±39.261）92.06±15.73

3 討論

海洛因是阿片類衍生物,與阿片受體結合后發(fā)揮作用,人體內包括免疫細胞在內的多種細胞表面廣泛表達阿片受體。當海洛因作為外源性阿片物質進入機體后,影響機體的神經-內分泌-免疫調節(jié)網絡,使機體的免疫系統(tǒng)的固有免疫、細胞免疫和體液免疫功能嚴重受損。Vallejo等[4]認為外源性海洛因通過下丘腦-垂體-腎上腺軸和自主神經系統(tǒng)抑制免疫功能,至少部分由中樞、外周神經和免疫細胞的阿片受體介導。Timothy B.Saurer等[5]證實神經系統(tǒng)的神經伏核作為海洛因的神經基質參與誘導機體免疫系統(tǒng)改變,細胞因子作為免疫調節(jié)網絡中的關鍵性介質,與神經-內分泌系統(tǒng)聯(lián)系緊密。故研究海洛因依賴者血清細胞因子水平對了解海洛因影響機體免疫功能有重要意義。

CD4+T細胞是構成機體適應性免疫功能的重要組成部分,可誘導機體產生有效的抗病毒免疫應答。CD4+T細胞根據產生細胞因子及生物學功能的不同分為 Th1、Th2、Th9和Th17細胞等。IL-9由新型的不同于 Th1、Th2、Th17和Treg細胞的Th9細胞分泌,是抗病毒免疫的關鍵分子,調節(jié)T細胞和B細胞應答,尤其對肺部病毒感染疾病有特異效應,近年也有報道認為IL-9作為Th17的衍生因子對炎性疾病有促進作用[6,7]。Th17細胞是近年發(fā)現(xiàn)的一類不同于Th1和Th2的CD4+T細胞亞群,TGF-β和IL-6是初始CD4+T細胞分化為Th17的必需因子,IL-23是維持Th17存活的重要因子,缺少IL-23不影響Th17的產生,但Th17不能擴增和存活[8],Th17細胞主要分泌IL-17,可發(fā)揮抗細菌、抗病毒、抗真菌、抗寄生蟲等作用,在抗感染免疫中的作用越來越受到重視[8-10]。本研究結果顯示在吸食海洛因2年到5～10年,血清IL-9水平較正常對照組升高,IL-17相對較低,提示海洛因可能刺激機體高表達IL-9,而抑制IL-17的產生;吸食海洛因10年以上,血清IL-9水平下降,接近正常水平,而IL-17相對升高,但仍低于正常水平。IL-9和IL-17同是前炎癥因子,二者不同程度表現(xiàn)升高,表明吸食海洛因時間長短機體均可能表現(xiàn)感染狀態(tài),IL-17的相對升高可能會加重機體自身不良狀況。Wassim Elyaman等[11]報道認為IL-9是影響Th17細胞分化和Treg細胞功能的關鍵分子,IL-9主要由Th17細胞產生,并與TGF-β1協(xié)同作用分化天然CD4+T細胞為Th17細胞,Th17細胞分泌IL-9受IL-23調節(jié)。本研究顯示的IL-9升高,IL-17減低,可能在海洛因依賴者中IL-9無關Th17細胞分化,但此機制尚需進一步驗證。

IL-9、IL-17在海洛因依賴者血清中水平改變明顯,吸食海洛因可刺激機體IL-9水平表達升高,而抑制IL-17的產生。

1 Islam SK,Hossain K J,KamalMetal.Serum immunoglobulinsandwhite blood cells statusof drug addicts:influence of illicit drugs and sex habit[J].Addict Biol,2004;9（1）:27-33.

2 Ran D,Goldman.Drug-induced gynecomastia in children and adolescents[J].Can Fam Physician,2010;56:344-345.

3 何 軍,左 麗.海洛因依賴者血清中Th1和Th2細胞產生主要細胞因子水平的研究[J].中國免疫學雜志,2010;26（11）:1033-1035.

4 Vallqo R,Benyam in R.Opioid therapy and immunosuppression:a review[J].Am JTher,2004;11（5）:354-365.

5 Timothy B,Saurer,StephanieGetal.Evidence for the nucleusaccumbens asa neuralsubstrate of heroin-induced immune alterations[J].Pharmacol Exp Ther,2009;329:1040-1047.

6 Dodd Jonathan S,Lum EdaC,Goulding Johnetal.IL-9 Regulatespathology duringprimary andmemory responses to respiratory syncytialvirus infection[J].Immunol,2009;183（11）:7006-7013.

7 Nowak E C,Weaver C T,Henrietta Turneretal.IL-9 as amediator of Th17-driven inflammatory disease[J].ExpMed,2009;206:1653-1660.

8 Betteli E,Carrier Y,GaoWetal.Reciprocal developmental pathways for the generation of pathogenic effector Th17 and regμlatory T cells[J].Nature,2006;441（7090）:235-238.

9 張玉俠.效應分子IL-17的抗感染作用[J].國際免疫學雜志,2009;32（3）:241-244.

10 CurtisM M,Way SS.Interleukin-17 in host defense against bacterial,mycobacterial and fungal pathogens[J].Immunology,2009;126（2）:177-185.

11 Wassim Elyaman,Elizabeth M,Bradshawetal.IL-9 inducesdifferentiation of Th17 cells and enhances function of FoxP3+natural regulatory T cells[J].PNAS,2009;106:12885-12890.

[收稿2010-11-01 修回2011-01-10]

（編輯 張曉舟）

A Study on the levelof IL-9,IL-17 in Sera from Heroin Addicts

HEJun,ZUOLi.DepartmentofImmunology,GuiyangMedicalUniversity,Guiyang550004,China

Objective:By detecting IL-9,IL-17 in serum levels of heroin addicts change for a further exploration of heroin's effects on immune function to provide evidence.Methods:93 cases of heroin addictswere equally divided into3 groups as thosewho employed to detect their sera levels IL-9,IL-17,31 cases of normal human serawere used as controls.Results:Thegroups of heroin addicts thathad taken for less than 2 years and thathad taken for 5 to 10 years had higher levels of IL-9（P＜0.05）but lower levels of IL-17（P＜0.05）,both compared to the controls.The levelsof IL-9 rose at firstbut thenwent downover the range of all groups in theorder of drug-taking durations（334.92±144.41 pg/m l,353.47±176.93 pg/m l,287.38±129.94 pg/m l）;while the levels of IL-17 had theopposite story,falling down firstly butascending afterwards（53.38±26.08 pg/ml,45.87±16.81 pg/ml,68.18±39.26 pg/ml）.Conclusion:The levels of IL-9,IL-17 in the sera from theheroin addicts changed significantly.Heroin abuseswere p roved to stimulate the expression of IL-9 but inhibit that of IL-17 in vivo.

Heroin addicts;IL-9;IL-17;Immunefuction

R996 R34

A

1000-484X（2011）05-0463-03

10.3969/j.issn.1000-484X.2011.05.019

何 軍（1978年-）,男,碩士,主管技師,主要從事臨床免疫學研究,現(xiàn)工作于貴州省第二人民醫(yī)院,E-mail:gzgyhjjj@163.com;

及指導教師:左 麗（1955年-）,女,教授,博士生導師,主要從事分子免疫學研究,E-mail:zuoligymc@163.com。