田思強(qiáng)

山東省棗莊市中醫(yī)醫(yī)院（山東棗莊277101）

骨性關(guān)節(jié)炎是一種以關(guān)節(jié)軟骨的變性、破壞及骨質(zhì)增生為特征的慢性關(guān)節(jié)病。骨性關(guān)節(jié)炎屬中醫(yī)學(xué)“骨痹”、“膝痹”范疇。名老中醫(yī)王法昌認(rèn)為骨性關(guān)節(jié)炎的主要病理機(jī)制為 “筋傷骨損”，消痹靈組方為王法昌治療該病的經(jīng)驗(yàn)方，對“筋傷骨損”癥有明顯的改善作用。該組方可減輕疼痛或控制炎癥，緩解癥狀，保持受累關(guān)節(jié)的功能，防止關(guān)節(jié)畸形，提高患者的生活質(zhì)量。本研究通過觀察消痹靈合劑對骨性關(guān)節(jié)炎模型動(dòng)物的作用并評(píng)定療效。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)健康雄性新西蘭長耳大白兔32只，4月齡，體質(zhì)量（3.20±0.15）kg，均購于山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)：魯動(dòng)質(zhì)字 20070102，20070103，20080423，20080714。 適應(yīng)性飼養(yǎng)觀察1d，飼養(yǎng)于山東省中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，SPF級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。飼料符合GB14924-94《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物全價(jià)營養(yǎng)飼料》標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 藥物 消痹靈膠囊，齊魯醫(yī)院中藥制劑室提供（主要成分為金銀花、清風(fēng)藤、白芍、生地黃、白花蛇舌草、當(dāng)歸、鹿銜草、玄參、蜈蚣、地龍、生甘草等）。壯骨關(guān)節(jié)丸（主要成分為狗脊、淫羊藿、獨(dú)活、骨碎補(bǔ)、木香、雞血藤、川斷、熟地黃。批號(hào)：國藥準(zhǔn)字Z49033377），深圳南方制藥廠生產(chǎn)。

1.3 試藥與儀器 ELISA家兔IL-1、TNF-α試劑盒 （解放軍總醫(yī)院放免研究所提供）。一氧化氮試劑盒（南京生物建成公司生產(chǎn)）。泰盟牌BL-410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（成都泰盟電子股份有限公司生產(chǎn)）。

1.4 造模與給藥 將32只家兔隨機(jī)分為即消痹靈膠囊組、壯骨關(guān)節(jié)丸組、模型對照組、空白對照組。將家兔右腿膝關(guān)節(jié)伸直，用石膏外周管形固定1圈，使其右側(cè)膝關(guān)節(jié)不能活動(dòng)，制造家兔膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎模型。固定2周后開始給藥，9周后停藥、停止石膏固定。消痹靈膠囊組給予消痹靈膠囊灌胃，4mL/kg（臨床等效劑量5g/kg），每日1次；壯骨關(guān)節(jié)丸組給予壯骨關(guān)節(jié)丸灌胃，4mL/kg（臨床等效劑量5g/kg），每日1次；模型對照組與空白對照組給予等量蒸餾水灌胃。

1.5 觀察指標(biāo) 分別在造模第3、6、9周抽取家兔靜脈血測定血清中IL-1、TNF-α及NO含量。造模9周后，空氣栓塞處死實(shí)驗(yàn)兔，取關(guān)節(jié)液不少于200μL，采用放射免疫分析法，測定家兔關(guān)節(jié)液中IL-1、TNF-α及NO含量變化。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。進(jìn)行單因素方差分析和q檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組血清中IL-1含量比較 見表1。實(shí)驗(yàn)第3、6、9周，各給藥組IL-1含量均顯著低于模型對照組 （P＜0.05或0.01），高于空白對照組（P＜0.05或0.01）；且消痹靈膠囊組改善優(yōu)于壯骨關(guān)節(jié)丸組（P＜0.05 或 0.01）。

表1 各組血清中IL-1含量比較 （pg/mL，±s）

表1 各組血清中IL-1含量比較 （pg/mL，±s）

與壯骨關(guān)節(jié)丸組相比，△P＜0.05，△△P＜0.01；與消痹靈膠囊組相比，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。 下同。

組 別12.47±0.19 15.12±0.43▲15.68±0.53△△▲11.34±0.28△△▲▲消痹靈膠囊組 11.59±0.23壯骨關(guān)節(jié)丸組 14.37±0.49▲▲n 8 8 3周6周9周模型對照組8空白對照組 8 11.17±0.18△▲▲11.98±0.27 13.87±0.68▲14.65±0.52△▲▲10.78±0.09△▲14.59±0.65▲

2.2 各組血清中TNF-α含量比較 見表2。實(shí)驗(yàn)第3、6、9周，各給藥組 TNF-α含量均顯著低于模型對照組 （P＜0.05或0.01），高于空白對照組（P＜0.05或0.01）；且消痹靈膠囊組改善優(yōu)于壯骨關(guān)節(jié)丸組（P＜0.05或0.01）。

表2 各組血清中TNF-α 含量比較 （ng/L，±s）

表2 各組血清中TNF-α 含量比較 （ng/L，±s）

組 別消痹靈膠囊組 3.04±0.38壯骨關(guān)節(jié)丸組 5.74±0.49▲▲n 8 8 3周6周9周模型對照組8空白對照組 8 2.87±0.19△2.44±0.27 4.75±1.05▲4.97±1.04▲2.25±0.38△2.90±0.24 5.20±0.47▲▲5.59±0.58▲2.38±0.34△△▲▲6.84±0.69△△▲▲

2.3 各組血清中NO含量比較 見表3。實(shí)驗(yàn)第3、6、9周，各給藥組NO含量均顯著低于模型對照組（P＜0.05或0.01），高于空白對照組（P＜0.05或0.01）；且消痹靈膠囊組改善優(yōu)于壯骨關(guān)節(jié)丸組（P＜0.05或 0.01）。

表3 各組血清中NO含量比較 （mmol/L，±s）

表3 各組血清中NO含量比較 （mmol/L，±s）

組 別消痹靈膠囊組 63.74±9.78壯骨關(guān)節(jié)丸組 91.67±11.39▲▲n 8 8 3周6周9周模型對照組8空白對照組 8 62.67±10.19△△62.45±9.27 80.24±10.05▲▲89.58±11.25▲▲57.29±8.54△△62.91±9.28 89.28±10.57▲▲95.69±11.52▲▲60.38±9.34△△99.85±12.69▲▲

2.4 各組實(shí)驗(yàn)第9周家兔關(guān)節(jié)液中IL-1、TNF-α、NO含量比較 見表4。實(shí)驗(yàn)第9周，各給藥組關(guān)節(jié)液中IL-1、TNF-α、NO含量均顯著低于模型對照組（P＜0.05或0.01），高于空白對照組（P＜0.05或0.01）；且消痹靈膠囊組改善優(yōu)于壯骨關(guān)節(jié)丸組（P＜0.05或 0.01）。

3 討 論

IL是一類由白細(xì)胞分泌的調(diào)節(jié)細(xì)胞生長與分化的因子，與軟骨損傷有關(guān)，其在骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。研究表明，IL-1可促進(jìn)軟骨基質(zhì)金屬蛋白酶的合成和分泌，并提高軟骨基質(zhì)中溶解蛋白分子酶類活性，而溶解蛋白分子酶有明顯溶解軟骨基質(zhì)、影響關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞基質(zhì)合成的作用［1］。國外研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α可促進(jìn)膠原酶的產(chǎn)生、前列腺素的釋放及硬蛋白酶的活性，還可誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞產(chǎn)生過氧化反應(yīng)，與IL-1共同促進(jìn)軟骨的吸收，從而介導(dǎo)骨關(guān)節(jié)炎的軟骨破壞［2］。NO是骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)生的重要介導(dǎo)因素，在骨內(nèi)高壓下，關(guān)節(jié)內(nèi)滑液氧分壓降低，pH降低，軟骨缺血，均可誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞對NO合成酶的合成［3］。此外，NO的產(chǎn)生受到細(xì)胞因子如IL-1、TNF-α、INF-γ等的影響，炎性因子可激活軟骨細(xì)胞內(nèi)NO合成酶產(chǎn)生大量的NO，從而對軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞、滑膜組織及各種細(xì)胞間基質(zhì)合成產(chǎn)生破壞作用，使其合成和分泌蛋白多糖及膠原蛋白的功能受到抑制，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，最終對關(guān)節(jié)產(chǎn)生損害而影響其功能［4］?；ぜ?xì)胞不能產(chǎn)生足量的IL-1受體阻滯劑（IL-1Ra）來抑制增加的IL-1，而IL-1可促使軟骨細(xì)胞產(chǎn)生NO，NO又可抑制軟骨細(xì)胞生成IL-1Ra，最終導(dǎo)致IL-1與IL-1Ra平衡破壞，促進(jìn)骨基質(zhì)降解。在骨性關(guān)節(jié)炎中，軟骨基質(zhì)的分解代謝加強(qiáng)，以致基質(zhì)丟失。

表4 各組實(shí)驗(yàn)第9周關(guān)節(jié)液中IL-1、TNF-α、NO含量比較 （±s）

表4 各組實(shí)驗(yàn)第9周關(guān)節(jié)液中IL-1、TNF-α、NO含量比較 （±s）

NO（mmol/L）消痹靈膠囊組 18.34±4.18壯骨關(guān)節(jié)丸組 41.64±7.93▲▲組 別n 8 8模型對照組8空白對照組 8 16.71±3.34△IL-1（pg/mL）11.44±0.35 14.67±0.64▲▲15.56±0.58△▲▲10.15±0.28△▲▲TNF-α（ng/mL）11.19±0.21 15.18±0.51▲▲17.59±0.56△△▲10.38±0.26△△▲▲48.47±8.63▲▲

實(shí)驗(yàn)顯示消痹靈膠囊組和壯骨關(guān)節(jié)丸組在3、6、9周時(shí)血清及關(guān)節(jié)液中IL-1、TNF-α和NO表達(dá)均存在顯著差異，說明消痹靈膠囊的藥物療效更好。消痹靈膠囊能顯著減輕IL-1、TNF-α和NO的表達(dá)，從而能減輕其對軟骨基質(zhì)的分解作用，促進(jìn)軟骨基質(zhì)的合成，改善軟骨基質(zhì)的平衡狀況。骨內(nèi)血液循環(huán)障礙引起的骨內(nèi)高壓是形成骨性關(guān)節(jié)炎的重要因素，也是導(dǎo)致該病一系列臨床癥狀如膝痛、休息痛的直接原因。消痹靈膠囊中含有清熱除痹、活血化瘀、祛風(fēng)通絡(luò)中藥成分，一方面可以改善軟骨下骨髓腔內(nèi)的血流狀態(tài)，另一方面可及時(shí)清除由于血脈瘀滯產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，從而改善骨內(nèi)血流動(dòng)力學(xué)，達(dá)到保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨目的?；钛鲋房纱碳ぼ浌瞧茐膮^(qū)出現(xiàn)大量幼稚軟骨細(xì)胞，明顯減少關(guān)節(jié)腔積液，降低關(guān)節(jié)腔內(nèi)壓力；通過滑膜滲透直接作用于軟骨細(xì)胞，增強(qiáng)軟骨細(xì)胞的代償能力，調(diào)整軟骨細(xì)胞的代謝而促進(jìn)軟骨基質(zhì)的代謝向正常方向改變，對軟骨降解起到一定延緩作用。

［1］ GebauerM，Saas J，Haag J，etal.Repression ofanti-proliferative factor Tob1 inosteoarthritic cartilage［J］.ArthritisRes Ther，2005，7（2）：274-284.

［2］ 潘海樂，王耶.IL-1與骨性關(guān)節(jié)炎研究新進(jìn)展［J］.中國老年學(xué)雜志，2002，22（1）：76-78.

［3］ Pelletier JP.Jovanovic D，Lascau Coman V，etal.Selective inhibition of inducible nitric oxide synthase reduces progression of experimentecd［J］.ArthritisRhuem，2000，43（6）：1290-1299.

［4］ Blanco F J，Ochd R L，Schwaz H，et al.Chondrocyte apoptosis induce bynitric oxide［J］.Am JPathol，1995，146（1）：75-85.