● 陳 芊 張 斌 孫 選 孫云松 徐慧軍

益腎調(diào)肝湯Ⅱ號方對PCOS模型大鼠糖、脂代謝的影響※

● 陳 芊 張 斌 孫 選 孫云松 徐慧軍

目的:觀察中藥益腎調(diào)肝湯Ⅱ號方對PCOS模型大鼠胰島素抵抗及血糖、血脂的影響，以了解該方對PCOS糖脂代謝的影響，試圖探求其治療機理。方法:24日齡Wistar大鼠進行皮下埋植左炔諾孕酮(左旋18－甲基炔諾酮硅膠棒)結(jié)合皮下注射hCG造模，分組灌服生理鹽水、二甲雙胍、中藥15天后，觀察各組大鼠體重變化及血空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS)、甘油三脂(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL－C)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL－C)的水平。結(jié)果:PCOS模型大鼠體重增加幅度明顯大于正常組，血FBG、FINS、胰島素抵抗指數(shù)(HOMA－IR)、TG、TC和LDL升高，HDL－C降低，運用中藥益腎調(diào)肝湯Ⅱ號方中高劑量后，模型大鼠體重增加量與正常大鼠相近，血HDL－C升高，其它血值明顯下降。結(jié)論:益腎調(diào)肝湯Ⅱ號方可改善胰島素抵抗和高胰島素血癥、糖脂代謝紊亂，控制肥胖，促進排卵，恢復卵巢功能。

益腎調(diào)肝湯Ⅱ號方 多囊卵巢 胰島素抵抗 血糖 血脂

多囊卵巢綜合征(Polycysticovariansyndrome，PCOS)是一組以慢性無排卵、卵巢多囊性改變等為特征的綜合征候群，是育齡婦女群體高發(fā)的一種疾病，不僅涉及生殖系統(tǒng)，直接影響女性的生育功能，而且是一種代謝綜合征，常發(fā)生高胰島素血癥(High Insulin，HI)、高血脂、糖尿病和心血管疾病，在治療上涉及月經(jīng)失調(diào)、生育問題、內(nèi)膜增生、遠期代謝合并征等多學科問題，因此隨著研究的深入，PCOS已經(jīng)超出了婦科疾病的范疇，其病理機制涉及到遺傳、內(nèi)分泌、免疫、代謝等多個系統(tǒng);而其給患者所造成的身心危害也更加引起人們的關(guān)注，是威脅到患者一生的疾病。至今醫(yī)學界對于該病的病因未達成共識，中醫(yī)藥的多系統(tǒng)調(diào)理、多靶點作用及整體觀念、辨證論治使其在治療PCOS方面存在獨特優(yōu)勢和巨大潛力，本研究旨在通過實驗研究益腎調(diào)肝湯Ⅱ號方對PCOS模型大鼠胰島素抵抗及血糖、血脂的影響，以了解該方對PCOS糖脂代謝的影響，試圖探求其治療機理。

1 材料與方法

1.1 實驗藥品、儀器和試劑 益腎調(diào)肝湯I號方:山茱萸、菟絲子、仙靈脾、當歸、柴胡、白術(shù)、山藥、陳皮、茯苓等，益腎調(diào)肝湯Ⅱ號方:I號方基礎(chǔ)上加炮山甲、鱉甲等，中藥由青島市海慈醫(yī)院藥劑科提供。鹽酸二甲雙胍片:上海信誼九福藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，國藥準字H31022081，規(guī)格0.25g，批號081113。左旋18－甲基炔諾酮硅膠棒產(chǎn)自上海達華藥業(yè)有限公司，國藥準字H10970174，每根硅膠棒含75mg左旋18－甲基炔諾酮，規(guī)格 39mm×2.4mm，批號080528。注射用hCG購自廣東麗珠醫(yī)藥集團股份有限公司，國藥準字 H44020674，規(guī)格1000IU/支，生產(chǎn)批號:081102。顯微鏡:日本Olympus公司生產(chǎn)(型號CX31)，分析天平:上海精科天平公司生產(chǎn)TG328A型。大鼠卵泡刺激素(FSH)、黃體生成激素(LH)、雌二醇(E2)、睪酮(T)微粒子酶聯(lián)免疫測定法(MEIA)試劑均由美國Abbott公司(Abbott Laboratories)提供。全自動發(fā)光免疫分析儀:美國Abbott公司提供，儀器型號為AXSYMPLUS。

1.2 實驗造模［1，2］選 24日齡大鼠體重(45～55g)之間Wistar雌性大鼠(青島市動物研究所提供，動物許可證號SCXK(魯)20030010)，麻醉后皮下埋植左炔諾孕酮(左旋18－甲基炔諾酮硅膠棒)3mm/只，3d后(27日齡)實驗組每天皮下注射hCG 1.5 IU，2次/日，共9天;對照組大鼠27日齡始每日頸背部皮下注射與實驗組等量生理鹽水，共9天。采用陰道細胞學檢查來判定是否造模成功。

1.3 分組給藥 選擇造模成功60只大鼠及未造模10只大鼠，分7組，未造模10只大鼠為正常對照組(Ⅰ組);造模的60只大鼠隨機分為6小組，每組10只。依據(jù)人與各種動物以及各種動物之間用藥劑量換算系數(shù)表換算實驗給藥劑量，灌胃給藥，每天1次，持續(xù)15天。模型對照組(Ⅱ組)與正常對照組(Ⅰ組)每日一次生理鹽水;西藥對照組(Ⅲ組)每日一次二甲雙胍按成人劑量(500mg/60kg)的7倍(58 mg/kg);中藥對照組(Ⅳ組)每日一次益腎調(diào)肝湯I號方按成人劑量(2.95g/kg)的7倍(21.7g/kg);中藥低、中、高劑量組(Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ組):每日一次益腎調(diào)肝湯Ⅱ號方按成人劑量(3.37g/kg)的3.5倍(11.8g/kg)、7 倍(23.6g/kg)、14 倍(47.2g/kg)。實驗全過程動物自由飲水、進食。

1.4 觀察指標 灌胃完成后1天即第16天晚20時起禁食過夜，次日動物稱重記下體重;麻醉各組大鼠，開胸心臟采血，微粒子酶聯(lián)免疫測定法(MEIA)方法測定下列數(shù)值:測量血清學測定空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS)、甘油三脂(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL－C)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL－C)水平。

1.5 統(tǒng)計學處理 用SPSS 16.0版本統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計處理。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠試驗前后體重情況 ①正常對照組(Ⅰ組)與其它組的差別有顯著性意義(P＜0.05)，其它各組間的差別無顯著性意義(P＞0.05)，表明造模成功。②經(jīng)造模后PCOS模型大鼠體重增加，比正常組大鼠體重重(P＜0.05)，試驗處理后各組大鼠體重均增加，但增加的量有差別，運用西藥鹽酸二甲雙胍片、中藥益腎調(diào)肝湯Ⅱ號方中高劑量后，模型大鼠的體重增加量與正常大鼠相近(P＞0.05)，而用益腎調(diào)肝湯I號方及Ⅱ號方低劑量后模型大鼠的體重增加量與給予生理鹽水的模型大鼠相近(P＞0.05)，并明顯高于正常組大鼠(P＜0.05)，即運用上兩方劑的模型大鼠的體重仍增加明顯。見表1。

2.2 各組大鼠血清FBG、FINS、HOMA－IR及血脂的比較 經(jīng)造模后PCOS模型大鼠血清空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS)、胰島素抵抗指數(shù)(HOMA－IR)及甘油三脂(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL－C)升高(P＜0.01)，而高密度脂蛋白膽固醇(HDL－C)降低(P＜0.01)，運用西藥鹽酸二甲雙胍片、中藥益腎調(diào)肝湯Ⅱ號方中高劑量后，模型大鼠血HDL－C升高(P＜0.05)，其它值的明顯下降(P＜0.05)，而用益腎調(diào)肝湯I號方及Ⅱ號方低劑量后模型大鼠的上述值變化不明顯(P＞0.05)，并明顯高于正常組大鼠(P＜0.05)。見表2。

表1 各組大鼠試驗前后體重情況(±s)

表1 各組大鼠試驗前后體重情況(±s)

組別 動物總數(shù)(只) 試驗前體重(g) 試驗后體重(g) 差值(M±Q)正常對照組(Ⅰ組) 10 164.40 ±10.21 173.70 ±11.93 9.40 ±4.58★模型對照組(Ⅱ組) 10 195.30 ±17.03▲▲ 214.10 ±12.85 18.50 ±7.58▲▲西藥對照組(Ⅲ組) 10 187.10 ±15.42▲ 197.50 ±14.32 10.40 ±6.35★中藥對照組(Ⅳ組) 10 199.70 ±15.13▲▲ 218.70 ±10.73 19.00 ±6.12▲▲中藥低劑量組(Ⅴ組) 10 188.00 ±10.07▲ 206.40 ±8.67 18.50 ±7.03▲▲中藥中劑量組(Ⅵ組) 10 185.20 ±16.65▲ 196.90 ±10.74 11.70 ±10.56★中藥高劑量組(Ⅶ組) 10 185.10 ±13.63▲ 194.70 ±9.04 9.60 ±7.23★

表2 各組大鼠血清FBG、FINS、HOMA－IR及血脂的比較(±s)

表2 各組大鼠血清FBG、FINS、HOMA－IR及血脂的比較(±s)

注:★與模型對照組比較，P＜0.05;★★ 與模型對照組比較，P＜0.01;▲與正常對照組比較，P＜0.05;▲▲與正常對照組比較，P ＜0.01。

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3 討論

PCOS患者中有30%伴有糖耐量受損(IGT)，7.5%合并糖尿病。PCOS患者與體重相當?shù)呐詫φ战M比較，高胰島素血癥(HI)和胰島素抵抗(IR)的發(fā)生率更高，程度更嚴重。超過40%的PCOS患者伴有肥胖，伴有肥胖的患者與體重相當?shù)膶φ战M及低體重的PCOS患者比較，IR更為明顯。PCOS－IR患者空腹胰島素(FT)和糖耐量試驗(OGTT)后胰島素水平均高，而HI可引起卵巢和腎上腺分泌雄激素增多，過高的雄激素又反過來影響胰島素的功能，加重胰島素抵抗，造成PCOS在發(fā)病機制上的惡性循環(huán)［1］。研究發(fā)現(xiàn)HI因胰島素(INS)受體后的磷酸化異常進而刺激卵巢和腎上腺的細胞色素P450C17α—羥化酶mRNA的表達和活性而使雄激素合成增多［2］。P450C17a具有17烴化酶和17、20裂解酶的雙重活性，使卵巢分泌的睪酮(T)增多和腎上腺的硫酸脫氫表雄酮(DHEAS)增多。另外一些研究發(fā)現(xiàn)HI加重垂體促性腺激素的不協(xié)調(diào)作用，LH升高，HLH刺激P450C17α活性使卵巢T合成及分泌增多［3］;HI還能抑制肝臟合成性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)使游離T升高，致雄激素的活性增加［4］。由此可見INS對卵巢源及腎上腺源雄激素的增加發(fā)揮著促進作用，提示HI在IR的PCOS高雄激素的形成中有不可忽視的作用。

PCOS患者的胰島素抵抗不僅影響血脂的代謝，而且影響血脂的吸收利用。HI、IR促進肝臟分泌VLDL，引起膽固醇從HDL到VLDL的轉(zhuǎn)化加速，導致血中HDL濃度降低;胰島素依賴性抗脂解作用減弱;PCOS卵巢分泌性激素異常，表現(xiàn)為雄激素過多和雌激素相對不足，而雄激素(主要是T)降低腹部脂肪細胞的脂蛋白脂酶活性。本實驗結(jié)果證實經(jīng)造模后PCOS模型大鼠體重增重，血清FBG、FINS及HOMAIR升高(P＜0.01)，血清 TG、TC、LDL－C明顯升高，而HDL－C降低(P＜0.01)，給予西藥鹽酸二甲雙胍片后體重減輕，血 FBG、FINS、HOMA －IR、TG、TC、LDL－C明顯下降(P＜0.05)，HDL－C升高(P＜0.05)，表明二甲雙胍能改善PCOS大鼠IR以及血糖和血脂代謝，控制體重，可成為治療PCOS重要的藥，上述結(jié)果與一些報道相符［5、6］。本研究以二甲雙胍作為實驗的陽性對照藥，中高劑量益腎調(diào)肝湯Ⅱ號方的效應與二甲雙胍作用基本一致，而用益腎調(diào)肝湯I號方及Ⅱ號方低劑量后模型大鼠的上述值變化不明顯，說明益腎調(diào)肝湯Ⅱ號方能用于臨床PCOS患者的胰島素抵抗、血糖血脂代謝異常治療。但二甲雙胍常有胃腸不適及頭痛頭暈不良反應，還可出現(xiàn)潮熱、心悸，減少維生素B12吸收引起貧血，劑量控制不當易引起乳酸性酸中毒，中藥無此副作用，可見益腎調(diào)肝湯Ⅱ號方較二甲雙胍更有治療優(yōu)勢。

我們通過臨床觀察研究認為PCOS以腎虛為本、肝失調(diào)暢為要，瘀血、痰濁阻滯為標。肝腎虧虛，肝郁克脾，氣血津液運行失常，氣滯血瘀，痰濕內(nèi)停，脈絡(luò)受阻，故經(jīng)血調(diào)暢失常。補腎調(diào)肝為治療PCOS的根本大法，活血化瘀、健脾燥濕是必要手段。益腎調(diào)肝湯I號方全方以補益肝腎為主，兼以理氣活血、調(diào)經(jīng)疏肝，能改善卵巢功能，促進排卵［7］。由于PCOS發(fā)病機理復雜，虛實錯雜，多種病機集于一身或相互轉(zhuǎn)化，脈絡(luò)瘀阻血脈不暢，腎陰、腎陽的化生受阻，惟瘀去而新生，因此加大行血破堅之力，方能有助于正本清源。益腎調(diào)肝湯Ⅱ號方源于此在I號方基礎(chǔ)上加穿山甲、鱉甲等破堅消癥之品，能入肝而調(diào)氣血、散瘀結(jié)，助藥達病所，使全方肝腎同補，破血化癥，除濕祛痰，補中有行，標本兼治，甚合PCOS本虛標實的病機，能取得較Ⅰ號方更好的療效，不過需要達到一定劑量即常量或更高劑量才能有效。臨床驗證益腎調(diào)肝湯Ⅱ號方根據(jù)月經(jīng)周期不同階段陰陽氣血的變化加減，治療多囊卵巢綜合征有滿意療效［8］。

［1］吳效科，周珊英，蘇延華.多囊卵巢綜合征患者的胰島素抵抗［J］.中華婦產(chǎn)科學雜志，1999，34:698 －700.

［2］Dale P0，Tanbo T，et al.Fertil steril，1992，58:487 －491.

［3］Barberi RL，Makri s A，et al.J clip Endocrind metab，1986，62:904.

［4］Zhang L，Rodriguex H，etal.Proc Natl Acad SciUSA 1995，92:10619－10623.

［5］姚 軍譯，錢榮立校.多囊卵某綜合征與代謝綜合征［J］.中華糖尿病雜志，2005，13(2):151.

［6］Seli E，Duleba AJ.Should patientswith polycystic ovarian syndrome be treated with metformin［J］.Hum Reprod，2002，17(9):2230－2236.

［7］陳 芊，張 華，顏建敏，等.益腎調(diào)肝湯對排卵障礙卵巢功能的免疫調(diào)節(jié)［J］.中國自然醫(yī)學雜志，2007，9(4):336 －339.

［8］益腎調(diào)肝Ⅱ號方治療多囊卵巢綜合征療效觀察［J］.中國中醫(yī)藥信息，2008年，(9):61－62.

山東省青島市衛(wèi)生局科研項目(No:青衛(wèi)中醫(yī)字2008－zyw035)

山東省青島市海慈醫(yī)院婦科(266033)