文│邢 剛 浙江大學(xué)農(nóng)業(yè)部動物病毒學(xué)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室 上海海利生物藥品有限公司

豬繁殖和呼吸障礙綜合征 (簡稱：PRRS，俗稱：藍(lán)耳病) 是由豬繁殖和呼吸障礙綜合征病毒(簡稱：PRRSV，俗稱：藍(lán)耳病病毒) 引起的一種豬急性接觸性傳染病。

◎豬藍(lán)耳病病毒結(jié)構(gòu)

藍(lán)耳病病毒（PRRSV）為單股正鏈RNA病毒，病毒粒子呈球形或卵圓形，直徑約為45～65納米，呈20面體對稱，有囊膜且囊膜表面有較小纖突。其基因組長度約為15000個堿基對，含有8個開放閱讀框（ORFs，Yuan，S.2001），其中，ORF1編碼病毒RNA復(fù)制酶，是病毒產(chǎn)生的惟一非結(jié)構(gòu)性蛋白，參與病毒復(fù)制。ORF2～7編碼病毒的結(jié)構(gòu)蛋白，ORF2～ORF5編碼的囊膜蛋白分別命名為GP2、GP3、GP4、GP5（Meulenberg, J.J，1997）。GP3由ORF3編碼，可能與誘導(dǎo)細(xì)胞免疫有關(guān)。GP5為糖基化囊膜蛋白，又稱E蛋白，由ORF5編碼，該蛋白含有6個抗原決定簇，其中決定簇B（第37～44位氨基酸殘基團(tuán)）是主要的中和表位，抗體與之結(jié)合可以中和病毒的感染。因此，PRRSV新型疫苗設(shè)計時常以O(shè)RF5作為候選基因，或以GP5作為候選蛋白。ORF6編碼的膜基質(zhì)蛋白又稱M蛋白， 它能刺激T淋巴細(xì)胞的增生，在細(xì)胞免疫中居主要地位。ORF7編碼核衣殼蛋白又稱N蛋白，N蛋白的保守性較好，ORF7可以用于臨床診斷的候選基因，N蛋白可以用于臨床診斷的候選蛋白。實(shí)驗(yàn)證明，感染PRRSV后（約11天）首先產(chǎn)生該蛋白的抗體然后是其他蛋白的抗體，但該抗體無中和活性（Takikawa，N，1996）。

目前使用的藍(lán)耳病活疫苗免疫是在臨床上緩解癥狀、控制疫情的主要應(yīng)對措施。但經(jīng)PRRS疫苗免疫的豬群和野毒感染的豬群在抗體產(chǎn)生上存在很大的差異，目前學(xué)術(shù)界也存在很多不同的觀點(diǎn)。如果只從抗體水平來評估PRRSV疫苗的免疫效果就存在很大的弊端和誤區(qū)。

抗PRRSV抗體能夠促進(jìn)巨噬細(xì)胞對PRRSV的吞噬作用，導(dǎo)致病毒復(fù)制增強(qiáng)（抗體依賴增強(qiáng)現(xiàn)象－ADE，Christianson et al.1993；Yoon et al. 1996）。PRRSV結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白所產(chǎn)生抗體水平差異較小，強(qiáng)弱毒間所產(chǎn)生抗體水平差異顯著。但是抗體間的差異與其對異源高毒力毒株的保護(hù)卻無相關(guān)性。這些發(fā)現(xiàn)描述了特定PRRSV蛋白所產(chǎn)生抗體反應(yīng)的特點(diǎn)——抗體反應(yīng)與刺激保護(hù)間不呈相關(guān)性。

目前商品化的PRRS酶聯(lián)免疫 (ELISA) 檢測試劑盒主要有兩大類：一類是全病毒包被的酶聯(lián)免疫板，另一類是病毒的結(jié)構(gòu)蛋白包被的酶聯(lián)免疫板。前者由于PRRSV存在抗原性差異顯著，不同毒株間的同源性很低，不適合做包被抗原用于ELISA診斷。不同毒株間N蛋白保守性很高，因此，N蛋白是ELISA包被抗原的最佳選擇。

N蛋白在病毒結(jié)構(gòu)內(nèi)部，且其產(chǎn)生的抗體不具有中和活性。因此，用該試劑盒檢測的抗體水平來評價疫苗免疫的效果并不科學(xué)。筆者認(rèn)為只有當(dāng)N蛋白暴露在細(xì)胞外的時候，機(jī)體才會產(chǎn)生針對N蛋白的抗體，而N蛋白又在病毒結(jié)構(gòu)的內(nèi)層，只有病毒在體內(nèi)大量復(fù)制并破壞靶細(xì)胞時，N蛋白才會暴露在細(xì)胞的外面。所以，當(dāng)N蛋白大量暴露在細(xì)胞外并產(chǎn)生N蛋白的抗體時，也是PRRSV對機(jī)體破壞最嚴(yán)重的時候。筆者認(rèn)為，N蛋白抗體水平與病毒的致病性和毒力相關(guān)。

綜上所述，筆者認(rèn)為N蛋白抗體水平越高，暗示PRRSV在體內(nèi)的毒力越強(qiáng)。對病毒感染機(jī)體的不同時期來說，N蛋白抗體水平越高，病毒在機(jī)體內(nèi)越活躍。N蛋白抗體水平也不代表疫苗免疫的保護(hù)水平，相反，對于弱毒苗來說，N蛋白抗體水平越低，疫苗株的毒力越低，越安全，對機(jī)體造成損傷越小。對于一個長期免疫弱毒苗的豬場來說，其群體的N蛋白抗體水平越整齊越低，該豬場越穩(wěn)定。