王愷源，高永良

度他雄胺PLGA微球的加速釋放度試驗研究

王愷源，高永良

生物可降解注射微球是近三十年來藥劑學(xué)的研究熱點之一[1]，它能夠顯著延長給藥間隔，大大提高患者用藥的順應(yīng)性，同時維持最低有效濃度，減少給藥次數(shù)。聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）由于其良好的生物相容性和可降解性，已被 FDA 正式批準(zhǔn)為藥用輔料。但緩釋微球釋放周期較長，給處方篩選和日常質(zhì)量控制帶來較多困難。因此，建立體外加速釋放度試驗方法，從而快速地評價微球的釋藥性質(zhì)，縮短處方工藝優(yōu)化的周期，有助于制劑工作者更加快速有效地進(jìn)行處方分析。

度他雄胺（dutasteride）是第 2 代 5α 還原酶抑制藥，是目前第一種也是唯一一種同時抑制 I 型和 II 型 5α 還原酶的藥物[2]，由葛蘭素公司研究開發(fā)。2002年美國食品與藥品管理局批準(zhǔn)其在美國上市。度他雄胺能長久改善癥狀性良性前列腺增生（BPH）癥狀，減少急性尿潴留的發(fā)生，同時具有很好的預(yù)防癌變作用。鑒于患者需要每日服藥，為了減少給藥次數(shù)，提高患者用藥的依從性，以聚乳酸-羥基乙酸共聚物 PLGA（75/25）15000 為載體，采用 O/W 型乳化溶劑揮發(fā)法制備了在體外可緩釋 28 d 的度他雄胺微球。本研究通過三個處方進(jìn)行加速試驗分析，主要考察高溫和不同 pH 值的釋放介質(zhì)對度他雄胺微球釋藥速度的影響，本文篩選其中一個最佳方程作為相關(guān)性方程，以期建立與長期釋放度試驗具有良好相關(guān)性的加速實驗方法。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑與儀器 度他雄胺為武漢仙保生物技術(shù)公司產(chǎn)品，批號：20091001，自制度他雄胺 PLGA 微球；聚乳酸羥基乙酸共聚物購自西南交通大學(xué)（兩單體比例 75∶25，相對分子質(zhì)量 15000，批號 20091016）；甲醇，乙腈為色譜純；水為純化水；其他試劑均為分析純。SPD-10AVP 紫外-可見檢測器購自日本島津公司；N2000 色譜數(shù)據(jù)工作站購自浙江大學(xué)智能信息工程研究所。

1.2 方法

1.2.1 HPLC 法測定釋放介質(zhì)中度他雄胺的含量 色譜柱：ApolloC18色譜柱（150 mm × 4.5 mm，5 μm），以甲醇-水（80∶20）為流動相；流速：1.0 ml/min；柱溫：25 ℃；檢測波長：220 nm，進(jìn)樣量：20 μl。定時量取度他雄胺微球的釋放液 1 ml，用 0.22 μm 濾膜過濾，取續(xù)濾液 20 μl 進(jìn)樣；配制 50 μg/ml 的度他雄胺對照溶液，在相同色譜條件

下進(jìn)樣，通過對照品計算釋放介質(zhì)中藥物的含量。在上述色譜條件下，度他雄胺溶液在 1.28 ～ 63.9 μg/ml 的范圍內(nèi)峰面積（Y）和濃度（X）的線性關(guān)系良好，Y = 17947X +1324.8，R2= 0.9999（n = 3）。高（32.08 μg/ml）、中（16.04 μg/ml）、低（8.02 μg/ml）3 種濃度的回收率分別為 99.79%、99.15%、98.56%，RSD 分別為 0.25%、0.67%、1.01%（n = 5），其日內(nèi)精密度分別為 0.37%、1.04% 和 1.87%（n = 5）；日間精密度分別為 1.07%、1.02% 和 1.81%（n = 5）。

1.2.2長期釋放度試驗方法 采用搖瓶培養(yǎng)法。精密稱取度他雄胺微球 10 mg，置于 25 ml 容量瓶中，加入 pH 7.4的磷酸鹽緩沖液[含 0.5% 十二烷基硫酸鈉（SDS）]25 ml，置于溫度為（37.0 ± 1.0）℃，速度為 72 r/min 的恒溫振蕩儀中，定時取樣 0.4 ml，同時補充介質(zhì) 0.4 ml。HPLC 法測定介質(zhì)中藥物的含量，計算累積釋放度。

1.2.3 加速釋放度試驗 操作方法同長期試驗，但釋放介質(zhì)為不同濃度的鹽酸溶液及氫氧化鈉溶液，同時考察了 55 ℃ 對釋放的影響。定時取樣 0.4 ml，同時補充介質(zhì)0.4 ml。HPLC 法測定介質(zhì)中藥物的含量，計算累積釋放度，分別考察釋放介質(zhì)的 pH 和溫度對釋放度的影響。

2 結(jié)果

2.1 長期釋放

度他雄胺微球長期釋放結(jié)果見圖 1。結(jié)果表明，3 批微球在 28 d 內(nèi)釋放較為完全，緩釋效果較好。

2.2 加速釋放

2.2.1 溫度的影響 55 ℃ 時度他雄胺在 pH 7.4 磷酸鹽緩沖液（含 0.5% SDS）和 pH 2 ～ 4 的鹽酸溶液（含 0.5%SDS）及 pH 10 ～ 12 的氫氧化鈉溶液（含 0.5% SDS）中放置 7 d，與 0 d 相比，藥物含量無明顯變化，同時色譜圖沒有新的色譜峰產(chǎn)生，表明度他雄胺溶液在 55 ℃ 的不同 pH溶液中是穩(wěn)定的。

在 pH 7.4 的磷酸鹽緩沖液中，55 ℃ 的釋放條件下，度他雄胺微球的累積釋放曲線見圖 2。結(jié)果表明，在 pH 7.4磷酸鹽緩沖液條件下，提高溫度可以達(dá)到使度他雄胺微球在短時間內(nèi)完全釋放的目的。

圖 1 3 批度他雄胺微球長期釋放結(jié)果

圖 2 溫度對度他雄胺微球釋放的影響

圖 3 升高 pH 值對度他雄胺微球釋放的影響

圖 4 降低 pH 值對度他雄胺微球釋放的影響

2.2.2 釋放介質(zhì) pH 的影響 在 37 ℃ 條件下考察釋放介質(zhì)的 pH 對微球釋藥的影響。如圖 3、4 所示，在 37 ℃條件下中，升高或降低釋放介質(zhì) pH 并不能達(dá)到使度他雄胺微球在短時間內(nèi)完全釋放的目的。

2.2.3 加速試驗結(jié)果 以 pH 7.4 磷酸鹽緩沖液（含 0.5%SDS）為釋放介質(zhì)，T = 55 ℃ 作為加速條件，度他雄胺微球加速釋放結(jié)果如圖 5。結(jié)果表明，3 批微球在 120 h 內(nèi)釋放完全。

2.3 加速釋藥與長期釋藥的相關(guān)性評價

圖 5 3 批度他雄胺微球加速釋放結(jié)果

圖 6 加速和長期釋藥曲線的相關(guān)性評價

表 1 長期釋放數(shù)據(jù)的預(yù)測值和實測值

對長期（y）和加速（Y）釋藥曲線進(jìn)行擬合，相關(guān)性示意圖見圖 6。擬合結(jié)果為 ln(100-y) = 1.979ln(100 － Y)－3.8837，r2= 0.9815，說明加速釋藥的方法可以較好地預(yù)測長期釋藥。

2.4 通過加速試驗數(shù)據(jù)預(yù)測長期釋放度

以 pH 7.4 磷酸鹽緩沖液（含 0.5% SDS）為釋放介質(zhì)，T = 55 ℃ 作為加速條件，測定度他雄胺微球在 2、6、10、14、48、56 h 的累計釋藥百分率，由“2.3”中相關(guān)性方程，對長期累積釋放度進(jìn)行預(yù)測，比較實測值與真實值的差異，見表 1。

3 討論

采用高溫來縮短 PLGA 降解時間和揭示藥物從PLGA 中釋放的機理已被廣大學(xué)者所采用[3]。本研究選擇55 ℃ 作為加速釋藥實驗的溫度，已達(dá)到加快微球釋藥的目的[4]。升高介質(zhì)溫度，一般高于聚合物的玻璃化溫度（Tg），此時聚合物松軟，通透性增強，藥物的分子運動也相對加劇[5]。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在 55 ℃ 情況下，度他雄胺微球釋放速度快，與 37 ℃ 長期釋藥相關(guān)性好。

PLGA 微球的降解主要是由于酯鍵的水解，因此加酸或堿都可加速 PLGA 的降解[6]。但其加速效果相對升溫而言較為溫和，所以僅僅通過降低 pH 不容易實現(xiàn)微球釋放的大幅度加速，對于一些釋放周期長的微球往往難以達(dá)到加速的要求[7]。由于度他雄胺溶液在 pH = 1 及 pH = 13 溶液中有新的色譜峰產(chǎn)生，故無法進(jìn)行更強酸、堿的考察。本研究中，微球在 0.01 mol/L 的氫氧化鈉溶液中與長期釋藥曲線相似，其他 pH 溶液反而抑制了微球的降解及釋藥。這也可能是介質(zhì)酸、堿性太弱，無法起到催化水解的作用。

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10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2011.02.014

100850 北京，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所

高永良，Email：ylgao868@yahoo.com.cn

2011-01-20

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