陳英珠 白衛(wèi)娜 吳 萌 張小兵 閆靜輝 (河北省科學院生物研究所，河北 石家莊 050051)

柿葉黃酮對載脂蛋白E缺失小鼠動脈粥樣硬化的影響

陳英珠 白衛(wèi)娜 吳 萌 張小兵 閆靜輝 (河北省科學院生物研究所，河北 石家莊 050051)

目的 觀察柿葉黃酮對動脈粥樣硬化形成的影響。方法 高脂飼料飼喂的ApoE-/-缺失小鼠，灌胃給予柿葉總黃酮，觀察其對胸腹主動脈動脈粥樣硬化形成的影響，檢測血清血脂和丙二醛含量。結(jié)果 柿葉總黃酮連續(xù)灌胃16 w，與模型組比較，柿葉黃酮組形成纖維狀斑塊的小鼠較多，動脈粥樣硬化斑塊面積與管腔面積比從15%降低至7%，血清中丙二醛減少33.56%，對血脂無顯著影響。結(jié)論 柿葉總黃酮顯著降低動脈粥樣硬化的形成，具有抗氧化功能。

柿葉黃酮;動脈粥樣硬化;丙二醛

動脈粥樣硬化是一種老年常見性疾病，在我國，發(fā)病率逐年上升，并且有年輕化趨勢。歐陽平〔1〕等發(fā)現(xiàn)一定劑量的柿葉黃酮在體外能夠分別對低密度脂蛋白(LDL)刺激下和基礎狀態(tài)下的大鼠血管平滑肌細胞增殖產(chǎn)生明顯的抑制作用，但是，柿葉黃酮對動脈粥樣硬化的影響尚不十分清楚。本文以載脂蛋白E缺失(ApoE-/-)小鼠為材料，研究柿葉黃酮對胸腹主動脈動脈粥樣硬化的作用，為柿葉黃酮的進一步開發(fā)奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材料 ApoE-/-小鼠購自北京大學醫(yī)學部實驗動物中心，高脂飼料由上海斯萊克實驗動物有限公司提供(含21%豬油和0.15%膽固醇)。柿葉黃酮由本研究室自制，純度25%，其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1 實驗分組 實驗分為三組，對照組、模型組和柿葉黃酮組。對照組8只，選用8 w的雄性C57BL/6小鼠，正常飲食。8 w的雄性ApoE-/-小鼠26只，隨機分成模型組和柿葉黃酮組，每組13只，自由飲水，飼喂高脂飼料。柿葉黃酮組灌胃給予30 mg·d－1·kg－1體重柿葉黃酮，對照組和模型組給予灌胃生理鹽水。

1.2.2 血脂測定 連續(xù)灌胃16 w后，小鼠經(jīng)麻醉后眼眶采血，分離血清。按常規(guī)方法，應用日立-7170全自動生化儀測定甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)和極低密度脂蛋白(VLDL)。

1.2.3 病理學觀察 連續(xù)灌胃16 w后，小鼠經(jīng)麻醉后采血、處死，取胸腹主動脈，生理鹽水清洗管腔，櫻花冷凍包埋劑(OCT)包埋，冰凍切片，連續(xù)橫切，片厚8μm，HE染色。普通OLYMPUS光學顯微鏡觀察并采集圖像。采用HMIAS-2000高清晰度彩色醫(yī)學圖文分析系統(tǒng)對血管腔面積和動脈粥樣硬化總面積進行相對定量分析。

1.2.4 血清丙二醛含量測定 采用南京建成丙二醛測定試劑盒，按照說明書操作。

1.3 統(tǒng)計學分析 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，數(shù)據(jù)用±s表示，兩組間比較采用t檢驗;多組比較采用單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 動物一般情況 飼養(yǎng)過程中，模型組和柿葉黃酮組各有5只小鼠背部有脫毛現(xiàn)象，但兩組間沒有明顯差異，對照組毛色正常。結(jié)果顯示，飼養(yǎng)至16 w，模型組和柿葉黃酮組體重無顯著差異。見表1。

表1 小鼠體重情況(±s，n=13，g)

表1 小鼠體重情況(±s，n=13，g)

組別 8 w體重 16 w 26.06±1.29 30.27±1.70柿葉黃酮組體重模型組26.77±0.87 32.64±1.78

2.2 柿葉黃酮對血脂變化的影響 飼喂高脂飼料16 w，與正常對照組比較，模型組血清中TC、TG和VLDL顯著提高(P＜0.05)，說明模型是成功的。但是，與模型組相比，柿葉黃酮組三者無顯著差異，表明柿葉黃酮對飼喂高脂飼料16 w的ApoE-/-小鼠血清脂質(zhì)無顯著影響。見表2。

表2 柿葉黃酮對小鼠血脂的影響(±s，n=13，mmol/L)

表2 柿葉黃酮對小鼠血脂的影響(±s，n=13，mmol/L)

與正常對照組比較:1)P＜0.01

組別TC TG VLDL正常對照組3.19±0.06 1.40±0.21 0.27±0.04模型組 40.51±3.471) 3.81±0.421) 1.73±0.191)柿葉黃酮組 35.98±5.291) 3.34±0.631) 1.52±0.281)

2.3 柿葉黃酮對動脈粥樣硬化斑塊形成的影響 光學顯微鏡下觀察，HE染色結(jié)果顯示，高脂飼料飼喂16 w時，模型組13只小鼠，9只形成纖維斑塊，3只有脂質(zhì)條紋形成，1只內(nèi)膜增厚。柿葉黃酮組13只小鼠，5只有纖維斑塊產(chǎn)生，3只有脂質(zhì)條紋形成，1只內(nèi)膜增厚，4只正常。動脈粥樣硬化斑塊面積與管腔面積比模型組顯著高于柿葉黃酮組(P＜0.05)。以上結(jié)果顯示，柿葉黃酮明顯抑制動脈粥樣硬化形成。見表3。

表3 柿葉黃酮對小鼠動脈粥樣硬化斑塊的影響(±s，n=13)

表3 柿葉黃酮對小鼠動脈粥樣硬化斑塊的影響(±s，n=13)

與模型組比較:1)P＜0.05

組別 管腔面積(μm2)斑塊面積(μm2)斑塊面積/0.03柿葉黃酮組 123 927.60±7 170.60 8 449.62±2 761.74 0.07±0.021)管腔面積模型組 137 714.10±15 622.07 23 007.54±7 815.64 0.15±

2.4 柿葉黃酮對血清丙二醛含量的影響 飼喂高脂飼料后，與對照組丙二醛含量〔(22.27±2.19)nmol/m l〕比較，模型組小鼠明顯提高〔(35.18±3.89)nmol/ml，P ＜0.05〕，是對照組的1.85倍，柿葉黃酮組血清丙二醛含量略有增加，是對照組的1.24倍〔(24.15±3.18)nmol/ml，P ＜0.05〕。與模型組相比，降低33.56%(P＜0.05)。

3 討論

有研究表明，口服天然黃酮咖啡酸苯乙酯可以降低ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化斑塊的形成〔2〕。柿葉總黃酮包括槲皮素、山奈酚兩種苷元和金絲桃苷、異槲皮苷和黃芪苷等三種糖苷〔3〕。本實驗結(jié)果顯示，連續(xù)灌胃柿葉總黃酮16 w，與模型組比較，形成纖維狀斑塊小鼠的數(shù)量明顯減少，動脈粥樣硬化斑塊面積與管腔面積比由0.15降至0.07，證實口服柿葉總黃酮也可以抑制高脂飼料飼喂的ApoE-/-小鼠胸腹主動脈動脈粥樣硬化斑塊的形成。肥胖和高血脂都是動脈粥樣硬化形成的危險因素，本實驗模型組和柿葉黃酮組體重和血脂無顯著差異，表明柿葉黃酮對體重和血脂無影響。

脂質(zhì)的過氧化在動脈粥樣硬化發(fā)展中占據(jù)重要的位置。含有抗氧化物質(zhì)的紅酒、綠茶等可能有抗冠心病的功能〔4〕。過氧化脂質(zhì)發(fā)生過程中伴隨有毒物質(zhì)丙二醛的產(chǎn)生。而丙二醛通常作為氧化應激的一個指標〔5〕。丙二醛修飾的LDL能夠被組織中的巨噬細胞吸收，導致泡沫細胞形成進而發(fā)展成動脈粥樣硬化斑塊〔6〕。楊建雄〔7〕等對柿葉黃酮的體外抗氧化作用進行了研究，發(fā)現(xiàn)其可以清除·OH，從而抑制·OH所導致的丙二醛的產(chǎn)生。本實驗證實柿葉黃酮可以降低ApoE-/-小鼠血清中丙二醛含量，在體內(nèi)也有顯著的抗氧化作用。這可能是它抗動脈粥樣硬化的因素之一。

1 歐陽平，貝偉劍，賴文巖，等.柿葉黃酮抑制LDL刺激的大鼠血管平滑肌細胞增殖〔J〕.中藥材，2004;27(8):600-2.

2 Hishikawa K，Nakaki T，F(xiàn)ujita T.Oral flavonoid supplementation attenuates atherosclerosis development in apolipoprotein E-deficientmice〔J〕.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2005;25(2):442-6.

3 馬 彥.柿葉的化學成分研究進展〔J〕.中山大學研究生學刊:自然科學與醫(yī)學版，2004;25(1):10-6.

4 Vinson JA，Dabbagh YA.Effect of green and black tea supplementation on lipids，lipid oxidation and fibrinogen in the hamster:mechanisms for the epidemiological benefits of tea drinking〔J〕.FEBSLett，1998;433(1-2):44-6.

5 Esterbauer H，Schaur RJ，Zollner H.Chemistry and biochemistry of 4-hydroxynonenal，malonaldehyde and related aldehydes〔J〕.Free Radic Biol Med，1991;11(1):81-128.

6 Holvoet P，Vanhaecke J，Janssens S，et al.Oxidized LDL and malondialdehyde-modified LDL in patientswith acute coronary syndromes and stable coronary artery disease〔J〕.Circulation，1998;98(15):1487-94.

7 楊建雄，原江鋒，李發(fā)榮，等.柿葉黃酮的體外抗氧化作用研究〔J〕.營養(yǎng)學報，2003;25(2):215-7.

R2

A

1005-9202(2011)12-2233-02

陳英珠(1962-)，女，博士，副研究員，主要從事中藥藥理研究。

〔2010-10-19收稿 2011-01-06修回〕

(編輯 袁左鳴/曹夢園)