宋 菲 ，張 金 ，王 微

1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，黑龍江哈爾濱 150025

2.黑龍江農(nóng)墾職業(yè)學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150025

柑橘是蕓香科植物柑橘屬的總稱(chēng)，包括橙子、柚子、金橘、蜜橘、廣柑等。在我國(guó)主要分布于廣東、湖南、浙江、福建等地，我國(guó)柑橘栽培面積居世界第一，產(chǎn)量居世界第二位，已超過(guò)美國(guó)，僅居巴西之后，2002年產(chǎn)量達(dá)1 199萬(wàn)t[1]。而我國(guó)柑橘加工產(chǎn)品80%是罐頭[2]。柑橘在加工過(guò)程或新鮮使用時(shí)，都會(huì)產(chǎn)生約20%～50%的果皮渣[3]。隨著柑橘深加工的不斷深入，規(guī)模的不斷擴(kuò)大，柑橘果皮渣的污染情況日益嚴(yán)重，解決果渣問(wèn)題越來(lái)越受到人們的重視。橘皮苷是黃酮類(lèi)化合物，降低血壓、抗過(guò)敏、降低低密度膽固醇、影響血壓、改變體內(nèi)酶活性、改善微循環(huán)、抗菌、抗肝炎、抗氧化、抗腫瘤、抗癌等生理功能，有很高的藥用價(jià)值[4-6]。柑橘皮中含有較多的橘皮苷，本文以柑橘皮渣為原料，從柑橘皮中提取橘皮苷，然后對(duì)其抑菌活性進(jìn)行研究，以無(wú)用橘皮轉(zhuǎn)變?yōu)橛杏玫奈镔|(zhì)，解決了柑橘皮渣帶來(lái)的垃圾污染問(wèn)題。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

柑橘：市售；甲醇、乙醇、氯化鈣、亞硫酸鈉、氫氧化鈉、氫氧化鈣、牛肉膏：分析純；W205B數(shù)控恒溫水浴鍋：上海申勝生物技術(shù)有限公司；萬(wàn)能粉碎機(jī)：中國(guó)天津泰斯特儀器有限公司；R-205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：上海申勝生物技術(shù)有限公司；電子天平：上海精密科學(xué)儀器有限公司天平儀器廠；循環(huán)真空泵：鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司。

1.2 方法

1.2.1 橘皮苷提取工藝流程

（稱(chēng)?。╅倨?jiān)鬯椤鷫A溶→水浴加熱→過(guò)濾→調(diào)pH→冷卻→抽濾→洗滌→干燥→產(chǎn)品。

1.2.2 單因素試驗(yàn)

1） 固液比對(duì)橘皮苷得率的影響

稱(chēng)取5.0g橘皮粉，固定提取溫度為70℃，提取時(shí)間為2h，pH值為4，考察不同固液比對(duì)橘皮苷得率的影響，結(jié)果如圖1所示。

2） 溫度對(duì)橘皮苷得率的影響

稱(chēng)取5.0g橘皮粉，固定固液比1：15，提取時(shí)間為2h，pH值為4，考察溫度對(duì)橘皮苷得率的影響，結(jié)果如圖2所示。

3） 時(shí)間對(duì)橘皮苷得率的影響

稱(chēng)取5.0g橘皮粉，固定固液比1：15，提取溫度為75℃，pH值為4，考察時(shí)間對(duì)橘皮苷得率的影響，結(jié)果如圖3所示。

4） pH值對(duì)多糖得率的影響

稱(chēng)取5.0g橘皮粉，固定固液比1：15，提取溫度為75℃，提取時(shí)間為3h，考察pH值對(duì)橘皮苷得率的影響，結(jié)果如圖4所示。

1.2.3 橘皮苷的抑菌試驗(yàn)方法

用橘皮苷配制成0.05%、0.1%、0.2%、0.4%、0.8%的甲醇溶液，將這些溶液和一份飽和乙醇溶液分別倒入培養(yǎng)皿中，將剪好的濾紙片置于不同的溶液中進(jìn)行浸泡，晾干。把五種試驗(yàn)用的菌種用無(wú)菌生理鹽水配制成105個(gè)/L左右的菌液，把大腸桿菌、枯草芽抱桿菌、金黃色葡萄球菌制成的菌液加入到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板上，青霉、根霉菌液加入到馬鈴薯培養(yǎng)基平板上。取0.5mL菌液加入到平板上，立即用涂布棒迅速將菌液均勻涂開(kāi)，涂好后，將浸漬過(guò)橘皮苷溶液的濾紙圓片風(fēng)干，放到每個(gè)涂有菌液的平板上，每個(gè)培養(yǎng)皿中放4個(gè)紙片，平行做3個(gè)培養(yǎng)皿。細(xì)菌在37℃下培養(yǎng)，霉菌在28℃下培養(yǎng)，均培養(yǎng)48h，測(cè)定抑菌圈直徑大小，確定抑菌效果[7]。

2 結(jié)果分析與討論

2.1 不同因素對(duì)提取橘皮苷的影響

圖1 固液比對(duì)橘皮苷提取率的影響

圖2 溫度對(duì)橘皮苷提取率的影響

圖3 pH值對(duì)橘皮苷提取率的影響

圖4 時(shí)間對(duì)橘皮苷提取率的影響

根據(jù)單因素對(duì)橘皮苷提取率的影響情況可知：沉淀時(shí)的pH值對(duì)橘皮苷的提取有一定的影響。當(dāng)pH＜2時(shí)，形成的沉淀很少，而當(dāng)pH＞4時(shí)，則有雜質(zhì)出現(xiàn)。所以控制pH值2～4為宜；當(dāng)固液比為1:15時(shí)，提取率最高，之后增加固液比，提取率增高不明顯，從經(jīng)濟(jì)角度考慮，選取1:15的固液比比較適宜；在浸取過(guò)程中，溫度控制也有影響。因橘皮苷溶于熱水常溫時(shí)溶解度0.1g/mL，而75℃時(shí)溶解度為10g/mL。若再加高溫度，溶解度增加不大，反而出現(xiàn)了雜質(zhì)。影響了產(chǎn)物的純度。所以，以75℃浸取較好。另外在橘皮苷的洗滌過(guò)程中，不宜用過(guò)高溫度的水洗滌，否則產(chǎn)物損失很大。浸提時(shí)間在3h左右時(shí)，提取率較高，當(dāng)小于3h或大于3h時(shí)，產(chǎn)率都較低，其原因可能是橘皮苷分子中的酚性輕基，在堿液作用下逐漸從橘皮中溶解出來(lái)，浸泡時(shí)間太短橘皮苷溶解不充分，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，部分橘皮苷分解，體現(xiàn)了橘皮苷在水中的不穩(wěn)定性。

2.2 濃度對(duì)橘皮苷抑菌效果的影響

表1 橘皮苷的質(zhì)量濃度對(duì)抑菌效果的影響

從表1的實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析可以看出，不同質(zhì)量濃度的橘皮苷對(duì)5種菌種的生長(zhǎng)均有抑制作用，但對(duì)不同菌種有不同的抑制程度，其中對(duì)枯草桿菌的抑制作用最強(qiáng)，對(duì)霉菌的抑制作用最弱。另外，同一濃度，對(duì)不同的菌種所抑制的程度不同，其中橘皮苷的質(zhì)量濃度在0.2%～0.6%之間均有較好的抑菌效果。而質(zhì)量濃度低于0.1%及高于0.6%，有抑菌作用但效果較差。

2.3 溶劑對(duì)橘皮苷抑菌效果的影響

把橘皮苷分別配制成質(zhì)量濃度為0.2%的甲醇溶液及乙醇的飽和溶液，把同樣大小的濾紙片在兩種溶液中浸泡后，作抑菌實(shí)驗(yàn)。

表2 溶劑對(duì)橙皮試抑菌效果的影響

橘皮苷的0.2%甲醇溶液和橘皮苷的飽和乙醇溶液均有較好的抑菌效果。其中對(duì)大腸桿菌的抑菌效果較好，而對(duì)霉菌的抑制作用較差。對(duì)枯草桿菌的抑制作用，橘皮苷的甲醇溶液要比飽和乙醇溶液的效果要好些，而對(duì)葡萄球菌的抑制作用，則正好相反，橘皮苷的飽和乙醇溶液要好于甲醇溶液的抑菌效果。

2.4 熱穩(wěn)定性對(duì)橘皮苷抑菌效果的影響

熱穩(wěn)定性試驗(yàn)就是將橘皮苷分別置于70℃、80℃、90℃、100℃的水浴恒溫水浴鍋內(nèi)，加熱處理20min后，將在濃度為0.5%橘皮苷溶液浸泡過(guò)濾紙片涼干后置于涂均勻的平板中，放入恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，觀察其抑菌效果。通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，經(jīng)不同溫度處理后的橘皮苷抑菌效果與未處理過(guò)的橘皮苷抑菌效果基本一樣，沒(méi)明顯變化，說(shuō)明橘皮苷在抑菌方面具有較好的熱穩(wěn)定性。

表3 5%的橘皮苷液中溫度對(duì)抑菌效果的影響

3 結(jié)論

通過(guò)實(shí)驗(yàn)可知：堿溶酸沉法提取橘皮苷，浸提及沉淀時(shí)的pH值、溫度、CaC12與NaOH的濃度、顆粒大小對(duì)提取橘皮苷的產(chǎn)率及質(zhì)量均有一定的影響。其最佳工藝為：料液比為1:15，浸提溫度為75℃，浸提時(shí)間為3h，pH值為4，橘皮苷的產(chǎn)率可達(dá)5.8%。

由抑菌試驗(yàn)結(jié)果可得出：不同濃度的橘皮苷溶液、不同的溶劑及不同的溫度值對(duì)菌種的抑菌效果有明顯不同，但都有一定的抑菌作用，且基本不受溫度變化的影響，可以作為良好的抑菌產(chǎn)品。

[1]國(guó)家統(tǒng)計(jì)局國(guó)際統(tǒng)計(jì)信息中心.柑橘、蘋(píng)果等水果生產(chǎn)情況(2001)[N].世界農(nóng)業(yè)，2002(4)：62.

[2]田世英.我國(guó)柑橘產(chǎn)業(yè)基本情況及發(fā)展思路[N].農(nóng)業(yè)部?jī)?yōu)質(zhì)農(nóng)產(chǎn)品開(kāi)發(fā)服務(wù)中心，2004(2)：17.

[3]喬海鷗，丁曉雯，張慶祝.柑橘皮的綜合利用[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2003(3)：147-149.

[4]馬慶一，陳春濤，荊曉艷，等.橘皮甙等桔皮活性成分的提取和抑菌作用研究[J].食品科學(xué)，2004，25(12)：112-115

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[6]HIMANISH DAS Useful Byproduets from Cellulosie Wastes of Agrieulture and Food Industry—A Critieal Appraisal Critieal Reviews in Food Science and Nutrition Boea Raton[J]，2004，44(2)：77-90.

[7]臧玉紅.柑橘皮連續(xù)提取有效成分的工藝研究[D].天津大學(xué)化工學(xué)院，2006，8.