馬艷梅 張振銘 李 華 (遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院胃腸外科，遼寧 錦州 00)

XRCC1表達(dá)對(duì)胃癌術(shù)后奧沙利鉑化療患者預(yù)后的影響

馬艷梅 張振銘1李 華2(遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院胃腸外科，遼寧 錦州 121001)

目的 觀察XRCC1在胃癌組織中的表達(dá)，探討其與接受手術(shù)及奧沙利鉑化療患者預(yù)后的影響。方法 選擇接受手術(shù)和術(shù)后行奧沙利鉑化療的胃癌患者的組織標(biāo)本，采用免疫組化(SP)法檢測(cè)XRCC1的表達(dá)，Log－rank分析其與臨床特征和遠(yuǎn)期生存率的關(guān)系。結(jié)果 胃癌組織中XRCC1陽(yáng)性率為55.6%。XRCC1表達(dá)陰性患者中位生存期為52個(gè)月，3年生存率為71.9%，5年生存率為34.4%;而XRCC1表達(dá)陽(yáng)性的患者中位生存期為42.4個(gè)月，3年生存率為52.5%，5年生存率為22.5%(χ2=0.756，P=0.038 4)。結(jié)論 胃癌組織中的XRCC1表達(dá)水平與接受手術(shù)及術(shù)后奧沙利鉑化療患者的遠(yuǎn)期生存率密切相關(guān)，可作為術(shù)后胃癌生存預(yù)測(cè)的指標(biāo)。

胃癌;奧沙利鉑;X線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1;化學(xué)療法;預(yù)后

鉑類作為多種腫瘤化療的一線使用藥物，經(jīng)常被用于胃癌化療，但腫瘤的耐藥性嚴(yán)重影響了其療效。X線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因 1(X－ray repair cross complementing group 1，XRCC1)是DNA修復(fù)基因中的重要成員，其編碼的蛋白產(chǎn)物參與DNA損傷的堿基切除修復(fù)途徑，在修復(fù)DNA單鏈斷裂、保持細(xì)胞基因組的完整和穩(wěn)定中起重要作用〔1〕。研究發(fā)現(xiàn)，XRCC1基因改變可影響XRCC1蛋白的活性，進(jìn)而影響多種腫瘤對(duì)鉑類藥物的療效〔2～4〕。本實(shí)驗(yàn)旨在研究XRCC1蛋白在胃癌組織中的表達(dá)及與奧沙利鉑化療敏感性的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 選擇2004年1月至2008年1月遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院收治的胃癌患者72例，其中男40例，女32例;年齡28～75〔平均(53.5±23.3)〕歲。根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)修訂的胃癌TNM分期分為:Ⅱ期24例，Ⅲ期48例。組織學(xué)類型:高分化腺癌20例，中、低分化腺癌52例。所有患者術(shù)前胃鏡診斷明確，術(shù)后病理證實(shí)，術(shù)前均未行放化療治療，無(wú)重要臟器功能損害。術(shù)后均采用FLO－FOX方案化療。劑量為奧沙利鉑130 mg/m2，靜脈輸注 3 h，1次/d;亞葉酸鈣 0.1 g/m2，靜脈輸注1 ～5 d;5－氟尿嘧啶500 mg/m2，靜脈輸注大于6 h，1 ～5 d。每3 w重復(fù)1次，化療2～7個(gè)周期。

1.2 免疫組化檢測(cè)與結(jié)果判斷 手術(shù)切除標(biāo)本經(jīng)4%甲醛固定，石蠟包埋，常規(guī)4 μm厚切片。采用免疫組化(SP)法檢測(cè)XRCC1蛋白表達(dá)情況。兔抗人XRCC1蛋白多克隆抗體購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司;PV－9000二步法免疫組化檢測(cè)試劑購(gòu)自北京中杉金橋公司。石蠟切片常規(guī)脫蠟水化后，蒸餾水洗2 min×3次;微波抗原修復(fù)15 min，自然降至室溫，pH7.4，0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)洗2 min×3次;3%H2O2孵育20 min以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，pH7.4，0.01 mol/L PBS洗2 min×3次;滴加一抗(1∶200 XRCC1 多抗)，4℃過(guò)夜，pH7.4，0.01 mol/L PBS洗2 min×3次;滴加試劑1，37℃孵育20 min，pH7.4，0.01 mol/L PBS洗2 min×3 次;滴加試劑 2，37℃孵育20 min，pH7.4，0.01 mol/L PBS洗2 min×3 次;二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，蘇木素復(fù)染，1%鹽酸酒精分化，自來(lái)水返藍(lán)15 min，脫水，透明，中性樹(shù)脂封片。

XRCC1陽(yáng)性主要呈細(xì)胞核著色。表達(dá)水平判定標(biāo)準(zhǔn):著色程度分為3分，無(wú)著色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，深褐色3分;免疫反應(yīng)范圍按照著色細(xì)胞百分比來(lái)計(jì)分，無(wú)著色0分，著色范圍＜20%為1分，著色范圍在20% ～50%之間為2分，著色范圍＞50%為3分;總評(píng)分為著色程度與范圍的乘積，＜2分為陰性表達(dá)或不表達(dá)，≥2分為陽(yáng)性表達(dá)〔5〕。

1.3 隨訪 所有患者均觀察至疾病進(jìn)展時(shí)間(TTP)，即從首次化療開(kāi)始至證實(shí)病情惡化或死亡的時(shí)間。至隨訪結(jié)束時(shí)未得出TTP的，統(tǒng)計(jì)作為截尾數(shù)據(jù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件，單因素分析用χ2檢驗(yàn)，生存分析采用Kaplan－Meier曲線，生存時(shí)間的比較用Logrank法。

2 結(jié)果

2.1 XRCC1在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá) XRCC1均主要在細(xì)胞核內(nèi)分布，一些腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)也有表達(dá)，其在腫瘤細(xì)胞的表達(dá)率為55.6%(40/72)。見(jiàn)圖1。

圖1 免疫組化(HE，×400)

2.2 XRCC1表達(dá)與患者臨床特征之間的關(guān)系 XRCC1表達(dá)與患者年齡、性別、組織學(xué)分型、癌栓無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)，而與TNM分期及淋巴轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性(P＜0.05)。

2.3 XRCC1表達(dá)與胃癌Ⅱ、Ⅲ期患者化療療效的關(guān)系

XRCC1表達(dá)陰性患者中，平均生存期為(56.32±4.39)個(gè)月，中位生存期為52個(gè)月，3年生存率為71.9%(23/32)，5年生存率為34.4%(11/32);而XRCC1表達(dá)陽(yáng)性的患者中，平均生存期為(40.42±2.88)個(gè)月，中位生存期為42.4個(gè)月，3年生存率為52.5%(21/40)，5年生存率為22.5%(9/40)。比較發(fā)現(xiàn)，XRCC1陰性表達(dá)患者療效好于陽(yáng)性表達(dá)患者，有顯著性差異(χ2=0.756，P=0.038 4)。

3 討論

奧沙利鉑是繼順鉑和卡鉑之后的第三代鉑類抗癌藥，其藥理學(xué)特點(diǎn)與其他鉑類藥物相似，均以DNA為靶點(diǎn)，阻止其復(fù)制及轉(zhuǎn)錄，造成細(xì)胞死亡。目前，臨床醫(yī)師應(yīng)用以?shī)W沙利鉑為主導(dǎo)藥物的FLO－FOX方案行胃癌患者術(shù)后輔助化療，已是最常用的胃癌化療方案之一，但不同個(gè)體對(duì)鉑類藥物敏感性差異很大，嚴(yán)重影響了鉑類藥物的臨床療效。影響鉑類藥物療效的原因由多種因素組成，其中DNA損傷修復(fù)能力改變是影響鉑類化療藥物療效的重要分子基礎(chǔ)〔6〕。DNA損傷修復(fù)最主要的修復(fù)形式之一即為堿基切除修復(fù)(BER)。

BER切除和替換由內(nèi)源性化學(xué)物作用產(chǎn)生的DNA堿基損傷，XRCC1是其重要組成部分。研究發(fā)現(xiàn)，XRCC1基因相關(guān)位點(diǎn)突變導(dǎo)致的XRCC1基因多態(tài)性改變了其對(duì)DNA損傷修復(fù)的效能，從而影像鉑類藥物治療的療效〔7，8〕。但XRCC1表達(dá)與胃癌患者對(duì)鉑類藥物的敏感性及生存期之間關(guān)系的相關(guān)研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，XRCC1表達(dá)與不同年齡、性別、組織學(xué)分型之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而與TNM分期及是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本實(shí)驗(yàn)XRCC1表達(dá)陰性患者化療后有效率高于XRCC1表達(dá)陽(yáng)性患者，XRCC1陰性表達(dá)患者的平均生存期、中位生存期、3年生存率、5年生存率均優(yōu)于XRCC1陽(yáng)性表達(dá)患者。提示XRCC1表達(dá)陰性患者從含鉑方案化療中受益程度大于XRCC1表達(dá)陽(yáng)性患者。

總之，胃癌組織中的XRCC1表達(dá)水平與接受手術(shù)及術(shù)后奧沙利鉑化療患者的遠(yuǎn)期生存率密切相關(guān)，可作為術(shù)后胃癌生存預(yù)測(cè)的指標(biāo)。早期檢測(cè)胃癌組織中的XRCC1表達(dá)可能有助于個(gè)體化選擇化療藥物，改善鉑類化療藥物臨床療效不滿意的現(xiàn)狀。

1 Caldecott KW，Aoufouchi S，Johnson P，et al.XRCC1 polypeptide interacts with DNA polymerase bête and possibly poly(ADP－ribose)polymerase，and DNA ligase Ⅲ is a novel molecular nick－sensor in vitro〔J〕.Nucleic Acids Res，1996;24(22):4387－94.

2 Chung HH，Kim MK，Kim JW，et al.XRCC1 R399Q polymorphism is associated with response to platinum－based neoadjuvant chemotherapy in bulky cervical cancer〔J〕.Gynecol Oncol，2006;103(3):1031－7.

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5 Crnogorac－Jurcevic T，Efthimiou E，Nielsen T，et al.Expression profiling of microdissected pancreatic adenocarcinomas〔J〕.Oncogenelogy，2002;21(29):4587－94.

6 Rosel1 R，Taron M，O′Brate A.Predictive molecular markers in non－small cell lung cancer〔J〕.Curr Opin Oncol，2001;13(2):101－9.

7 Snh KW，Kim JH，Kimdo Y，et al.Which gene is a dominant predictor of response during FLOFOX chemotherapy for the treatment of metastatic colorectal cancer，the MTHFR or XRCC1 gene〔J〕.Ann Surg Oncol，2006;13(11):1379－85.

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R735.2;R362

A

1005-9202(2011)12-2166-02

1 遼河油田第二醫(yī)院外科 2 遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院腫瘤科

馬艷梅(1971－)，女，主管護(hù)師，主要從事胃腸道腫瘤化療工作。

〔2011－02－28 收稿 2011－03－20 修回〕

(編輯 袁左鳴/徐 杰)