曹 敏 王福波 于 玲 王清華 尚 云

1上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院（上海200032）

2上海中醫(yī)藥大學(xué)（上海200000）

3上海市浦東新區(qū)光明中醫(yī)醫(yī)院（上海200000）

中醫(yī)藥防治冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病 （CHD）有一定作用。以往研究表明，中藥復(fù)方黃芪保心湯可有效清除自由基［1］、提高缺血心肌中降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）水平［2］、改善內(nèi)皮細(xì)胞功能［3］等，而起到保護(hù)心肌的作用。本課題在原有實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，探討黃芪保心湯抗心肌缺血的療效和作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD雄性大鼠48只，體質(zhì)量（230±20）g，由上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 藥物及試劑 黃芪保心湯：由黃芪30g，丹參15g，白芥子15g，膽南星 12g，蒲黃 12g，水蛭 12g，三七 3g，山楂 15g 組成，藥物在上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院加工制備，相當(dāng)于含生藥1.5g/mL。復(fù)方丹參滴丸：天津天士力制藥股份有限公司生產(chǎn)，25mg/丸。

1.3 主要儀器 DH-150型動(dòng)物人工呼吸機(jī)，浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)儀器廠(chǎng)。Powerlab 8/30生理記錄儀，AD Instrument，澳大利亞。戊巴比妥鈉（中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司，批號(hào)：F2008117），配成3%水溶液。肌酸激酶（CK）、乳酸脫氫酶（LDH）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、一氧化氮（NO）試劑盒均購(gòu)于南京建成生物工程有限公司提供。

1.4 分組和給藥 實(shí)驗(yàn)前先進(jìn)行動(dòng)物篩選，心電圖檢查無(wú)異常者進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。將48只大鼠隨機(jī)分為4組：假手術(shù)組、模型組、復(fù)方丹參滴丸組、黃芪保心湯組 （每組12只）。黃芪保心湯組以1mL/100g灌胃，復(fù)方丹參滴丸組將滴丸按300mg/kg用量比例用飲用水融化，1mL／100g灌胃，假手術(shù)組和模型組以lmL/100g生理鹽水灌胃，各組均每日給藥1次，共14d。

1.5 模型制備 大鼠心肌缺血模型制備 最后1d灌胃后30min除假手術(shù)組外各組均行冠脈結(jié)扎。用3%戊巴比妥鈉（45mg/kg）行腹腔注射麻醉大鼠，用18號(hào)靜脈留置針行氣管插管，連接動(dòng)物呼吸機(jī)行人工呼吸 （呼吸比為1∶2，潮氣量20~22mL/min），四肢皮下連接心電圖電極，記錄Ⅱ?qū)?lián)心電圖。胸骨左側(cè)剃毛，于劍突上1.0cm，旁開(kāi)約0.5cm切開(kāi)皮膚，逐層鈍性分離皮下組織、肌肉，剪斷第3根肋骨，剝離心包膜暴露心臟，在動(dòng)脈圓錐和左心耳之間，左心耳下方約1～2mm，用0/5號(hào)帶線(xiàn)縫合針，進(jìn)針深度控制在0.1cm左右，寬度為0.1～0.2cm之間結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支，結(jié)扎。結(jié)扎后迅速清除胸腔內(nèi)多余血液，觀(guān)察心電圖變化，以心電圖J點(diǎn)明顯抬高（>0.1mV）并穩(wěn)定15min以上，心尖部心肌呈灰白色為模型制備成功標(biāo)志。假手術(shù)組用同樣大小的帶線(xiàn)縫合針從左心耳下緣右側(cè)進(jìn)針。從肺動(dòng)脈圓錐左側(cè)出針，進(jìn)針深度及寬度同上，但縫合針不打結(jié)，其余操作同上。1.6 大鼠肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖 PowerLab生物信息采集系統(tǒng)記錄大鼠心電圖Ⅱ?qū)?lián)結(jié)扎前后J點(diǎn)位移變化（mV）。

1.7 標(biāo)本采集與檢測(cè) 冠狀動(dòng)脈結(jié)扎60min后，腹主動(dòng)脈取血，5mL放入普通試管中，立即于4℃，3000r/min離心10min，分離上清，血清于-20℃保存，留待測(cè)血清CK、LDH、AST、NO含量。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。所有資料均以）表示。符合正態(tài)分布的多組樣本間比較采用oneway ANOVA檢驗(yàn)；不符合正態(tài)分布的均數(shù)比較用非參數(shù)檢驗(yàn)。所有檢驗(yàn)均以P＜0.05作為顯著性檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

2.1 大鼠一般情況 實(shí)驗(yàn)大鼠共48只（每組12只），因手術(shù)意外死亡（結(jié)扎后嚴(yán)重心律失常或灌流過(guò)程中死亡）的有5只，死亡率約10.4%。其中假手術(shù)組無(wú)死亡，模型組1只，復(fù)方丹參滴丸組2只、黃芪保心湯組2只。

2.2 各組結(jié)扎前后J點(diǎn)位移變化 結(jié)扎前，各組心電圖J點(diǎn)均無(wú)顯著差異（P＞0.05），結(jié)扎后，模型組與假手術(shù)組比較J點(diǎn)顯著抬高（P＜0.01），與模型組相比，在結(jié)扎后各時(shí)間點(diǎn)，各治療組均優(yōu)于模型組（P＜0.01）。與復(fù)方丹參滴丸組相比較，在結(jié)扎后各時(shí)間點(diǎn)，黃芪保心湯組在 10、30、60min 降低明顯（P＜0.05），但在20min兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

2.3 各組血清CK、LDH、AST含量 模型組與假手術(shù)組比較心肌酶顯著升高（P＜0.01），與模型組相比，各治療組心肌酶水平均低于模型組（P＜0.01）。與復(fù)方丹參滴丸組相比較，黃芪保心湯組CK、LDH水平降低明顯（P＜0.05），而AST兩組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。 見(jiàn)表 2。

表1 各組結(jié)扎前后心電圖J點(diǎn)位移變化

表1 各組結(jié)扎前后心電圖J點(diǎn)位移變化

與模型組比較*P＜0.01；與復(fù)方丹參滴丸組比較，△P＜0.05。下同。

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表2 各組大鼠CK、LDH、AST的比較

表2 各組大鼠CK、LDH、AST的比較

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2.4 血漿NO含量 見(jiàn)表3。模型組血漿NO與各組比較，顯著降低（P＜0.01）；但假手術(shù)組、復(fù)方丹參滴丸組、黃芪保心湯組各組間無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表3 各組血漿NO含量 （umol/L

表3 各組血漿NO含量 （umol/L

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3 討 論

黃芪保心湯由黃芪、丹參、生蒲黃、自芥子、膽南星、水蛭、三七、山楂組成，具有益氣活血化痰之功效。藥理研究表明，黃芪中黃芪皂苷能改善心肌能量代謝，保護(hù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)特別是線(xiàn)粒體結(jié)構(gòu)，提高細(xì)胞內(nèi)SOD活性，減輕氧自由基對(duì)心肌細(xì)胞膜的損傷，從而增強(qiáng)心肌收縮力，改善心肌缺血［4-6］；而丹參具有抗血小板聚集、抗血栓形成、調(diào)脂、改善冠脈循環(huán)、抗氧化及抗動(dòng)脈粥樣斑塊形成等作用［7-8］，近來(lái)報(bào)道丹參還可抑制心肌缺血時(shí)的細(xì)胞凋亡［9］；蒲黃也具有增加冠脈流量、降低心肌攝氧率和心肌耗氧量、限制心梗范圍、抗血小板聚集等作用［10-11］；白芥子水解物能刺激胃黏膜，反射性引起支氣管分泌增加而發(fā)揮祛痰作用［12］；水蛭的有效成分水蛭素，有防止動(dòng)脈粥樣硬化的作用；三七總皂苷通過(guò)抑制自由基的生成，起保護(hù)心肌缺血損傷，具有非常明顯的抗血小板聚集作用；山楂可顯著增加冠脈血流量，降低心肌氧耗量和耗氧指數(shù)。

大鼠冠脈結(jié)扎致心肌缺血模型中，J點(diǎn)的位移值可視為心肌缺血模型成功的一個(gè)重要指標(biāo)，J點(diǎn)上升或下降0.1mV即可視為心肌缺血［13］。有研究表明，缺血30min時(shí)，ECG的改變最為明顯［14］。本實(shí)驗(yàn)在進(jìn)行造模時(shí)，發(fā)現(xiàn)大鼠冠脈結(jié)扎后10min，心電圖J點(diǎn)即發(fā)生明顯抬高。模型組在缺血30min左右時(shí)出現(xiàn)明顯的J點(diǎn)升高，可達(dá)0.1mV以上，甚至S-T段與T波融合成拋物曲線(xiàn)。黃芪保心湯組對(duì)這種改變有明顯改善作用，與模型組、復(fù)方丹參滴丸組比較均有意義。

血管內(nèi)皮細(xì)胞通過(guò)釋放NO松馳血管平滑肌和抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖，同時(shí)釋放內(nèi)皮素（ET）收縮血管和促使內(nèi)皮細(xì)胞增殖。在病理情況下，NO釋放減少和內(nèi)皮素釋放增加，可導(dǎo)致血管舒縮功能失調(diào)、血小板凝聚和內(nèi)皮細(xì)胞增殖，是引起一系列疾病的基礎(chǔ)。調(diào)節(jié)血管舒縮功能（NO），可從多方面發(fā)揮其對(duì)心肌缺血性損傷的保護(hù)作用，減輕心肌的缺血性損傷，避免心肌細(xì)胞不可逆性壞死。本實(shí)驗(yàn)研究表明，黃芪保心湯可升高血漿NO水平，同時(shí)能降低心肌酶水平，說(shuō)明黃芪保心湯對(duì)缺血性心臟病有一定的療效，可能與提高血漿NO水平有關(guān)。

［1］ 孫平龍，尚云，衛(wèi)新國(guó)，等.黃芪保心湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌缺血大鼠心肌組織MDA、SOD水平及心肌組織形態(tài)學(xué)的影響［J］.上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，14（2）：38-40.

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