劉麗琴 胡 旭 浙江省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 杭州 310003呂 華 北京中醫(yī)藥大學(xué)

宣肺和解方對(duì)流感病毒感染小鼠的保護(hù)作用

劉麗琴 胡 旭 浙江省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 杭州 310003呂 華 北京中醫(yī)藥大學(xué)

目的：觀察宣肺和解方對(duì)流感病毒感染小鼠的保護(hù)作用。方法：取體重為17～18g的NIH小鼠分為正常對(duì)照組、感染模型組、宣肺和解方組和病毒唑組。以流感病毒FM1株滴鼻感染小鼠，致病毒性肺炎模型。應(yīng)用宣肺和解方進(jìn)行防治，以病毒唑注射液為對(duì)照。結(jié)果：在觀察的時(shí)間內(nèi)，與模型組比較，宣肺和解方可以顯著降低流感病毒感染小鼠的死亡率（P＜0.05），顯著延長(zhǎng)平均生存時(shí)間（P＜0.05），顯著降低肺指數(shù)（P＜0.05），以及顯著降低肺勻漿中病毒血凝滴度（P＜0.05）；各組小鼠體重也有顯著性差異（P＜0.05）。結(jié)論：宣肺和解方可有效抑制病毒性肺炎小鼠體內(nèi)病毒增殖，降低肺指數(shù)，提高存活率。

小鼠 流感病毒 病毒性肺炎 宣肺和解方

宣肺和解方由麻杏石甘湯合小柴胡湯加減組成，是臨床用于流感樣疾病的經(jīng)驗(yàn)方，可用于流感流行季節(jié)具有發(fā)熱、咽痛、咳嗽等癥狀患者的防治。為了進(jìn)一步研究其防治呼吸道感染的作用機(jī)制，我們進(jìn)行了宣肺和解方抗小鼠呼吸道流感病毒感染的研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 NIH小鼠112只，清潔級(jí)，雌雄各半，體重17g～18g，由北京生物制品研究所提供（醫(yī)動(dòng)字第01-3071號(hào)），置于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物潔凈柜中飼養(yǎng)。

1.2 病毒及藥物 SPF雞胚，購(gòu)自北京生物制品研究所。流感病毒亞洲甲型鼠肺適應(yīng)株（FM1），中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)院病毒所提供，實(shí)驗(yàn)室液氮保存。病毒復(fù)蘇后在雞胚中傳代兩次，小鼠LD50為10-5.11，血凝滴度1∶256。宣肺和解方由炙麻黃、炒杏仁各9g，生石膏30g，生甘草6g，柴胡、黃芩、連翹、牛蒡子各15g，知母10g組成。上方藥物經(jīng)藥學(xué)鑒定后，確定工藝，制備成實(shí)驗(yàn)研究用的口服制劑，含生藥0.4g/mL。病毒唑注射液，100mg/mL，由江蘇揚(yáng)州制藥廠生產(chǎn)（批號(hào)：20030915），用時(shí)以無菌生理鹽水配制成2mg/mL，0.05g/（kg·d）。

1.3 死亡保護(hù)實(shí)驗(yàn) 小鼠雌雄各半，隨機(jī)分為四組，每組20只。正常對(duì)照組、感染模型組和宣肺和解方組均提前4天灌胃，每次灌胃0.5mL，1天2次，其中正常對(duì)照組、感染模型組以生理鹽水灌胃；宣肺和解方組以宣肺和解口服液灌胃。第5天除正常對(duì)照組外，另三組灌胃后感染FM1，以乙醚輕度麻醉小鼠后，以50μL流感病毒液滴鼻，感染劑量為30 LD50。正常對(duì)照組以生理鹽水50μL滴鼻。感染后再灌胃7天。病毒唑組在感染FM1后30min給藥，每次腹腔注射病毒唑0.5mL，1天2次，共給藥6天。記錄不同時(shí)間的小鼠體重，逐日觀察動(dòng)物發(fā)病癥狀，記錄死亡時(shí)間和死亡數(shù)。直至感染后14天。死亡保護(hù)率（%）＝感染模型組死亡率-藥物治療組死亡率。

1.4 肺指數(shù)及病毒血凝滴度測(cè)定 小鼠分組、感染、給藥方法同上，每組8只。肺指數(shù)測(cè)定：在流感病毒感染后第4天，按文獻(xiàn)方法測(cè)定。肺指數(shù)＝小鼠肺重/小鼠體重×100%。肺懸液病毒血凝滴度測(cè)定：分別取各組肺置勻漿器中加生理鹽水（肺重（g）/生理鹽水（mL）＝1/9），研磨制成勻漿，4℃，2500 rpm，離心30min，取上清按文獻(xiàn)方法作微量病毒血凝試驗(yàn)，計(jì)算滴度[1]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)。計(jì)量資料用方差分析，組間比較用q檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 FM1感染對(duì)小鼠行為的影響 正常對(duì)照組小鼠精神良好，行動(dòng)敏捷有力，毛發(fā)有光澤，呼吸正常，體肥。感染模型組感染24小時(shí)后出現(xiàn)甩頭、呼吸逐日加快、短促，以腹式呼吸為主，行動(dòng)遲緩無力，蜷縮、怕冷、毛發(fā)無光澤，食少消瘦，飲水量明顯降低，這種狀態(tài)在一直持續(xù)4天左右。第5天感染病毒的小鼠陸續(xù)出現(xiàn)死亡，直至第9天左右達(dá)到高峰，出現(xiàn)大量死亡，以感染模型組為最。從第10天起，各感染病毒組，小鼠活動(dòng)逐漸增加，飲食量接近正常對(duì)照組，體重開始緩慢增長(zhǎng)，狀態(tài)恢復(fù)。14天后，各組均不再有死亡，除體重有差異外，小鼠飲食與活動(dòng)無差別。病毒唑組、宣肺和解方組與感染模型組比較，活動(dòng)與攝食減少的癥狀相對(duì)較輕。

2.2 宣肺和解方對(duì)FM1感染小鼠的死亡保護(hù)作用宣肺和解方可以延長(zhǎng)FM1感染小鼠生存時(shí)間，降低死亡率，同感染模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 宣肺和解方對(duì)FM1感染小鼠的死亡保護(hù)作用（±s）

表1 宣肺和解方對(duì)FM1感染小鼠的死亡保護(hù)作用（±s）

注：與感染模型組比較，△P＜0.05,△△P＜0.01

組別正常對(duì)照組感染模型組病毒唑組宣肺和解方組平均存活時(shí)間/天＞14 9.7±3.2 13.2±2.2△△11.4±3.1△n/只20 20 20 20死亡數(shù)/只0 16 4 8死亡保護(hù)率/% --死亡率/% 0 80.0 20.0△40.0△60.0 40.0

2.3 宣肺和解方對(duì)FM1感染小鼠體重的影 FM1感染可以導(dǎo)致小鼠體重明顯下降，至感染第9天，平均體重比感染前降低。宣肺和解方組可以一定程度地抑制FM1感染導(dǎo)致的體重下降，同感染模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。病毒唑雖然有明顯的抗病毒作用，但也不能完全阻止小鼠FM1感染導(dǎo)致的體重下降，見表2。

表2 宣肺和解方對(duì)FM1感染小鼠體重的影響（±s）

表2 宣肺和解方對(duì)FM1感染小鼠體重的影響（±s）

注：與感染模型組比較，△P＜0.05,△△P＜0.01

組別正常對(duì)照組感染模型組病毒唑組宣肺和解方組n/只20 20 20 20感染前7天17.8±0.8 17.8±1.0 17.9±0.7 17.9±0.6感染第9天22.9±0.9△△14.8±2.4 18.7±2.9△17.3±2.7△

2.4 宣肺和解方對(duì)FM1感染小鼠肺指數(shù)病毒血凝滴度的影響 宣肺和解方組可以降低FM1感染小鼠的肺指數(shù)和肺懸液病毒血凝滴度，同感染模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 宣肺和解方對(duì)FM1感染小鼠肺指數(shù)和病毒血凝滴度的影響（± s）

表3 宣肺和解方對(duì)FM1感染小鼠肺指數(shù)和病毒血凝滴度的影響（± s）

注：與感染模型組比較，△P＜0.05,△△P＜0.01

組別正常對(duì)照組感染模型組病毒唑組宣肺和解方組血凝滴度（lnX）0 5.16±0.58 3.33±0.53△△4.31±0.77△n/只8 8 8 8肺指數(shù)（%）0.864±0.081△△1.271±0.189 0.971±0.159△△1.050±0.140△

3 討論

實(shí)驗(yàn)研究表明，小柴胡湯及麻杏石甘湯均有良好的抗流感病毒的作用[2-3]。但是，不是所有具有解表作用的方藥均有抗病毒作用，例如小青龍湯可以抑制流感病毒感染小鼠的病毒復(fù)制，抑制病毒從鼻向肺傳播，增加支氣管肺泡灌冼液中IgA抗體含量；而組方與小青龍湯部分相似的葛根湯在同樣條件下，無抗流感病毒活性[4]，其機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。本研究所采用的宣肺和解方，即是由麻杏石甘湯合小柴胡湯加減組成，可以顯著降低流感病毒感染小鼠的死亡率，延長(zhǎng)平均生存時(shí)間。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，宣肺和解方對(duì)小鼠FM1感染所致病毒性肺炎的程度和肺內(nèi)的病毒復(fù)制，具有一定的抑制作用，對(duì)流感病毒感染小鼠有一定的保護(hù)作用。

中藥復(fù)方抗流感病毒具有成分復(fù)雜、多作用靶點(diǎn)的特點(diǎn)。不同配方的中藥，抗流感病毒免疫機(jī)制不盡相同，有的是改善非特異性免疫，有的是改善血清免疫球蛋白水平，有的則作用于T淋巴細(xì)胞亞群、調(diào)節(jié)細(xì)胞因子（如IFN、IL、TNF）合成和釋放，這些研究對(duì)深入闡述中藥調(diào)節(jié)機(jī)體抗病毒免疫的機(jī)制提供了依據(jù)。

［1］傅繼華.病毒學(xué)實(shí)用實(shí)驗(yàn)技術(shù)［M］.濟(jì)南:山東科學(xué)技術(shù)出版社,2001：53-59.

［2］袁長(zhǎng)津,盧芳國(guó),朱應(yīng)武.小柴胡湯及其加減方體外抗流感病毒的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中華中醫(yī)藥雜志,2006,2l（1）:4l-42.

［3］張仲海,王勝春,王汝娟,等.麻杏石甘湯不同方法提取液對(duì)發(fā)熱模型及抗病毒作用的影響［J］.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2007, 18（6）:522-524．

［4］胡旭,邱全瑛.中醫(yī)藥抗呼吸道流感病毒感染實(shí)驗(yàn)研究概況［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2004,11（2）:180-182.

Antiviral Effect of Chinese Herbal Medicine Xuan-fei-he-jie Formula on Influenza Virus Infection in Mice

LIU Liqin,HU Xu,LV hua.Zhejiang Provincial Hospital of the Integration of Traditional Chinese and Western Medicine, Hangzhou（310003）,China

Objective:To study the effect of Chinese herbal medicine Xuan-fei-he-jie Formula on the treatment of influenza virus infection in mice.MethodsPulmonary inflammation model was established in mice by nasal drop of influenza virus.The effect of prophylaxis and treatment with Xuan-fei-he-jie Formula was investigated in the mice with influenza virus infection.Ribavirin served as control.ResultsIn the Xuan-fei-he-jie Formula group,the survival rate of infected mice was significantly increased than that in the model group（P＜0.05）,with a prolonged survival time（P＜0.05）. Both the lung index and viral titers were decreased in the Xuan-fei-he-jie Formula group than those in the model group（P＜0.05）.The mouse body weight was significant different in the 2 groups（P＜0.05）.ConclusionXuan-fei-he-jie Formula can effectively inhibit the proliferation of influenza virus,decrease lung index,promote survival rate in mice infected by influenza virus.

influenza Virus respiratory tract infection mouse

2010-07-05