陳毅華，楊志華

1.廣東省汕頭市中醫(yī)醫(yī)院，廣東汕頭515041；2.廣東省汕頭市皮膚性病防治院，廣東汕頭 515041

復(fù)方前列安顆粒制劑是汕頭市中醫(yī)醫(yī)院制劑室自制藥品，已取得汕頭市臨床科研用藥（試用）項(xiàng)目，批準(zhǔn)文號(hào)為粵Z20080089。該產(chǎn)品由赤芍、淫羊霍、澤瀉、延胡索、制乳香、王不留行等藥味組成，具有活血化瘀、理氣通絡(luò)之功效，適用于氣滯血瘀型的前列腺炎、前列腺增生等病癥。其顆粒采用醇提和傳統(tǒng)的水提工藝相結(jié)合，再經(jīng)過濃縮、干燥、一步制粒等現(xiàn)代先進(jìn)技術(shù)制備而成，為了控制復(fù)方前列安顆粒的質(zhì)量，本文參照文獻(xiàn)[1-4]一方面采用薄層色譜法對(duì)該制劑中的淫羊霍、澤瀉、延胡索藥材進(jìn)行了定性鑒別分析；另一方面采用高效液相色譜法進(jìn)一步測(cè)定制劑中的主要成分之一芍藥苷的含量，為控制復(fù)方前列安顆粒的藥品內(nèi)在質(zhì)量提供有效的保證。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

薄層鋪板器；定量毛細(xì)血管；瑞士CAMAG Reprostar薄層成像系統(tǒng)；色譜柱：Kromasil KR100-5 C18ODS柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；SPD-6A 型檢測(cè)器（日本島津），P-2000 泵；BP211D電子天平；2170AA數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)。硅膠G薄層板（青島海洋化工廠）；LC-10AVP高效液相色譜儀（日本島津）。

1.2 試劑

甲醇為進(jìn)口色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

1.3 試藥

芍藥苷、延胡索、淫羊霍對(duì)照品，澤瀉對(duì)照藥材均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所。復(fù)方前列安顆粒（20100422、20100425、20100508、20100512）由汕頭市中醫(yī)醫(yī)院制劑室自制，所用藥材均為生產(chǎn)用同批號(hào)藥材。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別

2.1.1 淫羊霍的薄層色譜鑒別 取本品粉末6 g，加醋酸乙酯50 ml，提取3次，合并醋酸乙酯，用水20 ml洗2次，醋酸乙酯提取液蒸干，殘?jiān)蛹状? ml使溶解，即得供試品溶液。精密稱取淫羊霍對(duì)照品適量，加甲醇制成1 mg/ml的溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述溶液各10 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲醇-水（10∶1∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾（見圖1）。

2.1.2 澤瀉的鑒別 取本品粉末5 g，置錐形瓶中，加甲醇50 ml，超聲處理30 min，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 ml溶解，以乙酸乙酯提取3次(20、15、15 ml)合并提取液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状? ml使溶解，作為供試品溶液。另取澤瀉對(duì)照藥材2 g，加甲醇5 ml，按照供試品溶液制備方法制得對(duì)照藥材溶液。同樣按處方比例，取缺澤瀉的其他各味藥，按制備工藝加工制成陰性樣品，按供試品制備方法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄)試驗(yàn)，吸取上述溶液各8 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶2∶0.7)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以 10%硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同紫紅色的斑點(diǎn)，陰性無干擾（見圖 2）。

2.1.3 延胡索的薄層色譜鑒別 取本品粉末5 g，加甲醇20 ml，熱溶解，超聲處理30 min，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)铀? ml使溶解，加氨試液0.5 ml，調(diào)pH值至7.0，加乙醇提取3次，每次5 ml，提取液合并，蒸干，加甲醇2 ml溶解，作為供試品溶液。另取延胡索乙素對(duì)照品適量，加甲醇溶解，制成1 mg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。再按處方取不含延胡索的其他藥材，按本品制備工藝和上述供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，分別吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液各10 μl，分別點(diǎn)于用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以正己烷-氯仿-甲酸(7.5∶4∶1)為展開劑，展距15 cm，取出，晾干，以碘蒸氣薰至斑點(diǎn)顯色清晰，揮盡碘后(10 min)，置紫外燈(365 mm)下檢視，在Rf為0.3處，供試品色譜與對(duì)照品色譜顯一相同黃棕色熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品無此斑點(diǎn)（見圖3）。

2.2 芍藥苷的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil KR100-5 C18ODS柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.01%磷酸水-乙腈（83∶17）；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；柱溫：室溫；流速：1.0 ml/min[1,3]。

2.2.2 溶液的制備 取本品2.5 g，研細(xì)，加乙醇20 ml，振搖，超聲波提取10 min，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? ml溶解，即得供試品溶液。另取芍藥苷對(duì)照品精密稱定，加乙醇制成每1 ml含芍藥苷0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。再按處方自配不含赤芍的群藥，依法制成陰性對(duì)照溶液。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精取芍藥苷對(duì)照品（0.5 mg/ml）2、4、6、8、10 μl注入液相色譜儀，以峰面積 Y 對(duì)進(jìn)樣量 X（μg）進(jìn)行回歸處理?；貧w方程：Y=10 570.95X-836.40，r=0.999 4。結(jié)果表明芍藥苷的進(jìn)樣量在1.704～8.520 μg范圍內(nèi)與其峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.2.4 精密度試驗(yàn) 精取一定量的上述芍藥苷對(duì)照品溶液，按上述色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣5次，求得RSD為0.14%(n=5)，儀器精密度良好。

2.2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn) 精取同一批號(hào)樣品溶液5份，按樣品含量測(cè)定項(xiàng)下的方法操作測(cè)定。結(jié)果RSD為4.03%（n=5），試驗(yàn)重現(xiàn)性良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精取同一樣品溶液，在不同時(shí)間連續(xù)進(jìn)樣5次，RSD為1.93%，儀器穩(wěn)定性良好。

2.2.7回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法測(cè)定回收率，取已知含量的樣品精密稱重，分別加入芍藥苷對(duì)照品適量。依樣品溶液項(xiàng)下方法操作測(cè)定，平均回收率為97.45%，RSD為1.78%，結(jié)果見表1。

表1 芍藥苷的回收率試驗(yàn)（n=6）

2.2.8 樣品測(cè)定 取供試品進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 供試品中芍藥苷的含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

復(fù)方前列安顆粒中淫羊霍與澤瀉的定性鑒別采用TCL法，并分別與各自的陰性對(duì)照液進(jìn)行了對(duì)照試驗(yàn)，結(jié)果沒有干擾，斑點(diǎn)明顯，專屬性好，收到良好效果。

延胡索薄層色譜鑒別中使用碘薰后，延胡索乙素氧化成更具熒光的氧化物，經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)驅(qū)趕碘的時(shí)間須在5 min以上，否則斑點(diǎn)上仍有棕色碘覆蓋，在紫外燈下顯黑色暗斑，故定為10 min。

芍藥苷作為本制劑的主要成分之一，本文根據(jù)《中國(guó)藥典》2010版一部中赤芍藥材項(xiàng)下的含量測(cè)定方法，采用HPLC對(duì)該成分的含量進(jìn)行測(cè)定，對(duì)復(fù)方前列安顆粒的內(nèi)在質(zhì)量控制有重要意義。結(jié)果顯示該方法適宜于本制劑中芍藥苷的含量測(cè)定，色譜峰分離度高、峰型好，且陰性無干擾[5-7]。

在本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過程中，對(duì)不同批號(hào)的制劑樣品的含量進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)含量相差較大，這可能與所用原藥材不是同一批號(hào)有關(guān)，因此，控制原藥材質(zhì)量與確保制劑的質(zhì)量關(guān)系非常密切。

本文測(cè)定方法經(jīng)各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)考察，結(jié)果表明該方法簡(jiǎn)便快捷，結(jié)果精確，重現(xiàn)性好，可作為復(fù)方前列安顆粒制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010.

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[3]陳發(fā)奎.常用中草藥有效成分含量測(cè)定[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,1997：123.

[4]魏璐雪.中藥制劑分析[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2003：311.

[5]苗明三,李振國(guó).現(xiàn)代實(shí)用中藥質(zhì)量控制技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,2003.

[6]應(yīng)海燕,沈國(guó)興.前列安顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].江西中醫(yī)藥,2009,45(5)：156-157.

[7]沈國(guó)興,應(yīng)海燕;前列安顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].海峽藥學(xué);2009;21(6)：75-77.