王建祥

（懷化市第一人民醫(yī)院，湖南 懷化 418000）

鹽酸平陽霉素以其對(duì)唇癌、齒齦癌、舌癌、鼻咽癌等頸部鱗癌所具有的特殊療效，在臨床越來越受到廣大醫(yī)師和患者的重視，其有關(guān)物質(zhì)的含量和其產(chǎn)品質(zhì)量及不良反應(yīng)密切相關(guān)，但國內(nèi)鮮有關(guān)于其有關(guān)物質(zhì)的控制方法的報(bào)道，2005版藥典標(biāo)準(zhǔn)也未見有有關(guān)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)設(shè)置[1]。我們采用梯度洗脫高效液相色譜法對(duì)鹽酸平陽霉素粉針劑中平陽霉素的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行了檢測研究，以期為生產(chǎn)過程中鹽酸平陽霉素粉針劑質(zhì)量控提供一種科學(xué)有效的方法，不斷提高產(chǎn)品的生產(chǎn)質(zhì)量，現(xiàn)將研究資料總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 儀器

高效液相色譜儀及工作站，液相色譜solution管理系統(tǒng)。紫外檢測器，精密電子分析天平。

1.2 試劑

色譜級(jí)乙腈、甲醇、乙酸，分析純級(jí)乙二胺四乙酸二鈉、氨水、己烷磺酸鈉，注射用水。

1.3 鹽酸平陽霉素粉針劑

購于某醫(yī)藥公司，由國內(nèi)某制藥公司生產(chǎn)，批號(hào)為：20100801、20100802、20100803；規(guī)格為8mg每支，平陽霉素標(biāo)準(zhǔn)品。

1.4 方法

1.4.1 測定原理

采用面積歸一化法原理進(jìn)行測定。我們采用的檢測器是紫外吸收檢測器，根據(jù)朗伯一比耳定律，A（吸光度）=K（樣品在檢測波長下的摩爾吸光系數(shù)）b（吸收池的光程）c（樣品的濃度），知道樣品的吸光度、紫外檢測器中吸收池的光程、K值后，就可以計(jì)算出樣品的濃度c。在高效液相色譜儀和流動(dòng)相系統(tǒng)中，可最終推導(dǎo)得出：Ai（溶質(zhì)的色譜峰面積）f（計(jì)算機(jī)系統(tǒng)峰面積積分?jǐn)?shù)值的單位）F（流動(dòng)相的流量）=103kb c i（溶質(zhì)的濃度）Vloop。在一臺(tái)固定的高效液相色譜頻譜儀和用固定檢測方法的系統(tǒng)中，流動(dòng)相流量、溶質(zhì)的摩爾吸光系數(shù)、紫外檢測儀吸收池光程及定量進(jìn)樣管的體積是已知的或者可以進(jìn)行準(zhǔn)確測定的，所以，采用上述的公式，只要知道樣品的色譜峰面積，樣品的濃度就可以計(jì)算出來。

1.4.2 測定方法

①流動(dòng)相配制：流動(dòng)相A的配制：分別稱取分析純己烷磺酸鈉37.695g、分析純乙二胺四乙酸二鈉18.645g，取0.08M乙酸溶液4500mL，溶解已稱好的己烷磺酸鈉和乙二胺四乙酸二鈉，充分震搖使充分溶解后，定容至500mL，用氨溶液調(diào)節(jié)pH值4.1～4.3即得流動(dòng)相A；流動(dòng)相B的配制：取色譜級(jí)的甲醇和已晴以70∶30的比例混合均勻即得流動(dòng)相B。②色譜條件：C18（4.6mm ×150mm×5μm），檢測波長設(shè)定為254nm，柱溫設(shè)定為30℃，流動(dòng)相洗脫程序：流動(dòng)相A和流動(dòng)相B按照線性梯度洗脫程序進(jìn)行設(shè)置（0～15min：70%A，30%B，流速1.0mL/min；15～35min：68%A，32%B，流速1.0mL/min；35～36min：60%A，40%B，流速1.0mL/min；36～40min：70%A，30%B，流速1.0mL/min），每針進(jìn)樣量20μL，檢測時(shí)間40min。③平陽霉素標(biāo)準(zhǔn)液制備：檢查平陽霉素標(biāo)準(zhǔn)品瓶簽上標(biāo)示的品名、純度等正確，標(biāo)準(zhǔn)品無啟封現(xiàn)象，打開標(biāo)準(zhǔn)品目測標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)無結(jié)潮現(xiàn)象，于電子精密分析天平上采用取出法稱取4mg平陽霉素標(biāo)準(zhǔn)品于2mL潔凈干燥的容量瓶中，用注射用水溶解，經(jīng)超聲波超聲溶解5min后，定容至2mL，作為標(biāo)準(zhǔn)液備用。④制備樣品供試液：取鹽酸平陽霉素粉針劑（批號(hào)20100801、20100802、20100803）各1支，分別用注射用水溶解，制成2mg/mL的溶液，充分震搖使充分溶解，寫好標(biāo)簽并仔細(xì)貼在容量瓶身上，作為供試品溶液。⑤繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：將配置好的平陽霉素對(duì)照液用注射用水稀釋，分別對(duì)原液稀釋2倍、4倍、10倍、20倍、40倍、100倍、200、2000倍，分別用高效液相色譜儀測定稀釋后的不同濃度的對(duì)照液的峰面積，每個(gè)樣品的進(jìn)樣量為20μL，以不同濃度對(duì)照液的峰面積作為縱坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的平陽霉素對(duì)照品濃度作為橫坐標(biāo)，得到平陽霉素的線性回歸方程。⑥樣品的測定：將已配制好的樣品取出，按照制作回歸方程的色譜條件進(jìn)行測定，每次進(jìn)樣量為20μL，測各樣品的峰面積，采用面積歸一化法分別計(jì)算3個(gè)樣品中鹽酸平陽霉素相關(guān)物質(zhì)的含量。

2 結(jié) 果

2.1 鹽酸平陽霉素在濃度1～1000μg/mL范圍內(nèi)時(shí)，峰面積和濃度線性關(guān)系為A=8133.6C-9453.4，r=0.9999。表明供試液濃度在該范圍內(nèi)與面積呈良好的線性關(guān)系。

2.2 三批產(chǎn)品的鹽酸平陽霉素有關(guān)物質(zhì)的含量統(tǒng)計(jì)見表1。

表1 三批產(chǎn)品的鹽酸平陽霉素有關(guān)物質(zhì)的含量

3 討 論

鹽酸平陽霉素又被稱作鹽酸博萊霉素，平陽鏈霉菌在發(fā)酵過程中產(chǎn)生了多種平陽霉素組分，通過分離精制這些組分，得到一種化學(xué)名為N/-3-（4-氨基丁基）氨基丙基博萊霉素酰胺鹽酸鹽，即為鹽酸平陽霉素。鹽酸平陽霉素具有廣譜抗癌效果，尤其以頸部鱗癌效果明顯，其抗腫瘤活性強(qiáng)、療程短、不良反應(yīng)輕微，較少出現(xiàn)對(duì)造血和免疫功能的損害。因其具有的上述優(yōu)點(diǎn)，在臨床受到了廣大醫(yī)師和患者的青睞。鹽酸平陽霉素性質(zhì)不穩(wěn)定，在常溫下易分解，鹽酸平陽霉素凍干粉針劑的出現(xiàn)對(duì)這一問題有所緩解。鹽酸平陽霉素的有關(guān)物質(zhì)含量和其產(chǎn)品質(zhì)量、臨床不良反應(yīng)等密切相關(guān)，但國內(nèi)相關(guān)的研究資料比較少，本組研究資料在參照日本、美國、英國[2-4]相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，對(duì)鹽酸平陽霉素的有關(guān)物質(zhì)測定方法做了初步的探析，以期為該產(chǎn)品的生產(chǎn)質(zhì)量控制、穩(wěn)定性考察、臨床使用等提供一定的參考意義。通過實(shí)驗(yàn)研究顯示，采用梯度洗脫高效液相色譜法進(jìn)行鹽酸平陽霉素有關(guān)物質(zhì)的檢測，在1～1000μg/mL含量范圍內(nèi)峰面積和濃度線性關(guān)系良好，可以作為生產(chǎn)過程中鹽酸平陽霉素含量和有關(guān)物質(zhì)控制的有效方法。

[1]國家藥典委員會(huì).中國藥典(一部)[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2005.

[2]Society of Japanese Pharmacopoeia.The Japanese Pharmacopoeia[S].Tokyo：Society of Japanese Pharmacopoeia,2008：370.

[3]The British Phanmcopoeia Comn-fissioll.The British F,Pharmacopoeia[S].London：The Stationary Office,2008：292.

[4]The United States Pharmacopoeia Commission Inc.The United Slates Pharmacopoeia[S].Board of Trustees,2007：1541.