王 濤，陳雪輝，曹 萌，尹清風(fēng)，李 燕，王業(yè)民

新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，河南新鄉(xiāng) 453100

隨著糖尿病人群的增加，需要采取胰島素治療的糖尿病患者日漸增多。目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上存在多種胰島素制劑，滿足不同患者治療的需要。萬(wàn)邦中性胰島素筆芯是一種由國(guó)內(nèi)廠商所生產(chǎn)的動(dòng)物來(lái)源的普通胰島素，其濃度為100 IU/ml。由于其能采用筆式注射器注射，而且價(jià)格低廉，因而易于獲得患者接受，尤其對(duì)經(jīng)濟(jì)條件受限的糖尿病患者。基因重組人胰島素在其產(chǎn)品說(shuō)明書中標(biāo)明能在室溫保存4周左右。與基因重組人胰島素不同，萬(wàn)邦中性胰島素筆芯產(chǎn)品說(shuō)明書中未對(duì)其能在室溫條件下保存多久進(jìn)行說(shuō)明，這在臨床使用中常常給使用者帶來(lái)困惑，正在使用中的萬(wàn)邦胰島素筆是否需要低溫保存，本研究將針對(duì)該問(wèn)題進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 材料

萬(wàn)邦中性胰島素筆芯購(gòu)自當(dāng)?shù)蒯t(yī)藥公司 （批號(hào)：1007501），出生日期接近的雄性小鼠由新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心供應(yīng)，體重18~22 g，均健康無(wú)傷，每次試驗(yàn)使用40只小鼠。采用拜耳公司生產(chǎn)的拜安捷血糖儀，用于檢測(cè)血糖。

1.2 方法

1.2.1 藥品的準(zhǔn)備 以2~4℃保存的萬(wàn)邦中性胰島素筆芯為標(biāo)準(zhǔn)品，檢測(cè)當(dāng)日從冰箱取出，室溫條件下自然復(fù)溫4 h待用。供試品為與標(biāo)準(zhǔn)品為同批次的萬(wàn)邦中性胰島素筆芯，檢測(cè)前已在25℃恒溫箱中分別避光保存了3周、4周、5周，檢測(cè)當(dāng)日從恒溫箱中取出，自然復(fù)溫4 h待用。

1.2.2 胰島素生物效價(jià)檢測(cè)采用小鼠血糖法 按照 《中國(guó)藥典》（2005年版）附錄ⅫG的要求，采用雙交叉設(shè)計(jì)[1]。簡(jiǎn)述如下：出生日期接近的雄性小鼠40只，體重18~22 g，按體重隨機(jī)分配為4組，各組間小鼠體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。中性胰島素100 IU/ml加入精密稱量的生理鹽水中，稀釋為低劑量濃度40 mIU/ml，高劑量濃度為80 mIU/ml，每次注射藥物體積均為0.25 ml/只，均為皮下注射。注射藥物后40 min，用采血針刺破尾端，自尾端采血，用血糖儀檢測(cè)血糖。第一次注射藥物的順序?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)品低濃度（dS1）、標(biāo)準(zhǔn)品高濃度（dS2）、供試品低濃度（dT1）、供試品高濃度（dT2）。第二次注射的順序?yàn)楣┰嚻犯邼舛龋╠T2）、供試品低濃度（dT1）、標(biāo)準(zhǔn)品高濃度（dS2）、標(biāo)準(zhǔn)品低濃度（dS1）。兩次注射間隔3 h。注射藥物至測(cè)血糖之間小鼠禁食，不禁水，其他時(shí)間小鼠自由進(jìn)食水。所用飼料為新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心供應(yīng)的普通小鼠飼料。按該方案，間隔2 d分別對(duì)在25℃恒溫箱中保存了3周、4周、5周的藥物效價(jià)進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

按照按照《中國(guó)藥典》（2005年版）附錄ⅩⅣ生物檢定統(tǒng)計(jì)法的要求進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，采用Microsoft Office Excel 2003軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果

2.1 25℃保存3周對(duì)中性胰島素筆芯效價(jià)的影響

該組測(cè)試可靠性檢測(cè)見(jiàn)表1。

表1 25℃保存3周后中性胰島素效價(jià)雙交叉法可靠性檢測(cè)

偏離平行差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，回歸差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，實(shí)驗(yàn)成立。以在4℃保存的胰島素為對(duì)照，25℃保存3周后萬(wàn)邦中性胰島素筆芯的效價(jià)可信限為91~115 IU/ml，可信限率為11.77%，符合《中國(guó)藥典》（2005年版）對(duì)可信限的要求，在其標(biāo)示量91%~116%的范圍內(nèi)，可信限率亦符合要求<25%。

2.2 25℃保存4周對(duì)中性胰島素筆芯效價(jià)的影響

該組測(cè)試可靠性檢測(cè)見(jiàn)表2。

表2 25℃保存4周后中性胰島素效價(jià)雙交叉法可靠性檢測(cè)

偏離平行差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，回歸差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，實(shí)驗(yàn)成立。以在4℃保存的胰島素為對(duì)照，25℃保存4周后萬(wàn)邦中性胰島素筆芯的效價(jià)可信限為89~117 IU/ml，與《中國(guó)藥典》（2005年版）對(duì)其標(biāo)示量的要求91%~116%非常接近，可信限率符合要求。

2.3 25℃保存5周對(duì)中性胰島素筆芯效價(jià)的影響

該組測(cè)試可靠性檢測(cè)見(jiàn)表3。

表3 25℃保存5周后中性胰島素效價(jià)雙交叉法可靠性檢測(cè)

偏離平行差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，回歸差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，實(shí)驗(yàn)成立。以在4℃保存的胰島素為對(duì)照，25℃保存5周后萬(wàn)邦中性胰島素筆芯的效價(jià)可信限為80~106 IU/ml，可信限率為14.13%，符合<25%的要求，但可信限明顯超出了其標(biāo)示量的91%~116%的范圍。

3 討論

胰島素是大分子蛋白質(zhì)，維持胰島素的正常三維構(gòu)象對(duì)維持其生物活性具有重要意義。溫度是導(dǎo)致胰島素變性的重要因素。隨著貯存溫度的升高，胰島素變性加劇，其生物活性也受到影響。因此，各國(guó)藥典都要求胰島素的儲(chǔ)存溫度應(yīng)在2～8℃。由于胰島素筆式注射器的廣泛使用，100 IU/ml的卡式瓶裝胰島素筆芯正逐步取代40 IU/ml的普通瓶裝胰島素。那些裝入胰島素筆并且正在使用的胰島素長(zhǎng)期暴露于室溫條件下，其生物效價(jià)是否受到影響引起人們關(guān)注[2-3]。

生物重組人胰島素筆芯是目前國(guó)內(nèi)使用較廣泛的一類胰島素，如丹麥諾和諾德公司生產(chǎn)的諾和靈R筆芯、禮來(lái)公司生產(chǎn)的優(yōu)泌林R筆芯等。關(guān)于使用中的生物重組人胰島素能在室溫保存多久的問(wèn)題曾引起內(nèi)分泌醫(yī)師的熱烈討論[4-5]，大家的共識(shí)是內(nèi)分泌醫(yī)師應(yīng)該按照胰島素產(chǎn)品說(shuō)明書提供的信息來(lái)指導(dǎo)胰島素的使用。在生物重組人胰島素的說(shuō)明書中明確標(biāo)示出，這些胰島素筆芯能夠在室溫下保存4周。從而，已經(jīng)裝入胰島素筆式注射器的胰島素筆芯不需要低溫保存，使得胰島素筆的應(yīng)用更方便。

由于產(chǎn)品生產(chǎn)效價(jià)比的關(guān)系，歐美已經(jīng)基本停止了動(dòng)物源性胰島素的生產(chǎn)。因?yàn)閮r(jià)格便宜，我國(guó)仍在大量使用動(dòng)物源性胰島素。萬(wàn)邦中性胰島素筆芯為動(dòng)物來(lái)源的普通胰島素，其濃度為100 IU/ml?！吨袊?guó)藥典》（2005年版）并未對(duì)普通胰島素在室溫下保存時(shí)間進(jìn)行要求，在萬(wàn)邦中性胰島素筆芯產(chǎn)品說(shuō)明書亦未標(biāo)示在維持其生物活性不變的前提下，其產(chǎn)品能在室溫下保存多久。筆者的研究發(fā)現(xiàn)萬(wàn)邦中性胰島素筆芯25℃避光保存3周，對(duì)其降血糖的作用無(wú)明顯影響，4周時(shí)仍能滿足《中國(guó)藥典》（2005年版）所要求的范圍，5周時(shí)其降糖效價(jià)下降，與保存在4℃條件下的胰島素相比生物活性低于《中國(guó)藥典》（2005年版）所要求的范圍。因此在臨床使用中，萬(wàn)邦中性胰島素筆芯暴露在室溫條件下4周以內(nèi)對(duì)其效價(jià)無(wú)明顯影響，但不宜超過(guò)4周。

室溫是指10～30℃，本研究胰島素保存溫度為恒定25℃，未涉及溫度波動(dòng)對(duì)萬(wàn)邦中性胰島素筆芯效價(jià)的影響。本研究亦不涉及振蕩、光照等因素，其結(jié)果與臨床實(shí)際使用的情況會(huì)有所不同?？傊?，筆者認(rèn)為萬(wàn)邦中性胰島素筆芯在室溫保存的時(shí)間不宜超過(guò)4周。

所有作者均聲明，本研究與相關(guān)各方均無(wú)利益關(guān)系。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2005：56.

[2]Marcus A.Diabetes care-insulin delivery in a changing world[J].Medscape J Med,2008,20,10(5)：120.

[3]Grajower MM,Fraser CG,Holcombe JH,et al.How long should insulin be used once a vial is started[J].Diabetes Care,2003,26(9)：2665-2666.

[4]Gallo M,Comoglio M,De Micheli A,et al.Insulin storage in Europe：a comment to Grajower et al.,Eli Lilly and Novo Nordisk [J].Diabetes Care,2004,27(5)：1225-1226.

[5]Molitch ME.How long should insulin be used once a vial is started[J].Diabetes Care,2004,27(5)：1240-1241.