陳愛武

遼寧省沈陽市于洪區(qū)人民醫(yī)院，遼寧沈陽 110141

近年來，惡性腫瘤的治療觀念由經(jīng)驗科學(xué)向循證醫(yī)學(xué)、由細(xì)胞攻擊模式向靶向性治療模式轉(zhuǎn)變，越來越多的學(xué)者應(yīng)用向腫瘤區(qū)域定位傳送藥物的“靶向治療”及“靶點治療”。腫瘤靶向治療分為2大類，一為腫瘤細(xì)胞靶向治療，腫瘤細(xì)胞靶向治療是利用腫瘤細(xì)胞表面的特異性抗原或受體作為靶向；二為腫瘤血管靶向治療，利用腫瘤區(qū)域新生毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的特異性抗原或受體起作用。血管靶向治療與腫瘤細(xì)胞靶向治療相比，不僅提高了局部腫瘤組織內(nèi)的濃度，給藥后可以迅速高濃度地積聚在靶標(biāo)部位[1]。本文通過建立膀胱癌裸鼠皮下移植瘤，探討ZD6474的抗腫瘤作用，報道如下：

1 材料與方法

1.1 動物與藥品

5～6周齡BALB/c裸鼠購自北京華阜康生物科技股份有限公司；人膀胱移行細(xì)胞癌E-J細(xì)胞株由中國醫(yī)科大學(xué)藥理教研室提供，ZD6474標(biāo)準(zhǔn)品購自深圳市明博林生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 實驗分組

將接種E-J細(xì)胞分為5組，每組6只，并分別于接種后第 7、14、21、28、35 天，測量動物體重及行 MRI檢查，測量腫瘤細(xì)胞直徑。

陰性對照組；實驗組 A[0.5 mg/（kg·d）]；實驗組 B[3 mg/（kg·d）]；實驗組 C[7 mg/（kg·d）]；實驗組 D[10 mg/（kg·d）]；實驗組將ZD6474添加到飲水中灌胃。

1.2.2 荷人膀胱癌原位移植瘤動物模型的建立

首先使用的胰酶（0.25%）對培養(yǎng)到對數(shù)生長期的E-J細(xì)胞在37℃的溫度下消化，加入D-Hanks液調(diào)整細(xì)胞濃度至1.0×107個/ml。裸小鼠麻醉后仰臥位固定、消毒。切開腹壁牽出膀胱，壓迫膀胱排出尿液。用穿刺針穿刺進入膀胱腔內(nèi)，針尖輕劃黏膜造成損傷，然后向腔內(nèi)注入E-J細(xì)胞懸液200 μl，使用微量止血鉗固定裸小鼠尿道3～5 min，確定無含有腫瘤細(xì)胞的尿液外溢后停止，并縫合腹壁切口。

所有裸小鼠置于SPF級動物實驗室飼養(yǎng)，分別于接種后第 7、14、21、28、35 天測量動物體重及行 MRI檢查， 測量腫瘤細(xì)胞直徑。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 15.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，裸鼠體重、腫瘤直徑變化采用重復(fù)測量數(shù)據(jù)方差分析。

2 結(jié)果

實驗期間，所有裸鼠健康狀況均可，其體重變化各組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表1，表明塞來昔布處理對裸鼠一般狀況及體重?zé)o明顯影響。

表1 裸鼠體重變化情況(±s，g)

表1 裸鼠體重變化情況(±s，g)

注：與陰性對照組比較，*P＜0.05

組別 0 7 d 12.3±1.7 12.2±1.9 12.4±1.7 11.9±1.9 12.4±1.7陰性對照組實驗組[0.5 mg/（kg·d）]實驗組[3 mg/（kg·d）]實驗組[7 mg/（kg·d）]實驗組[10 mg/（kg·d）]18.3±2.2 18.1±2.0 17.9±1.9 17.8±1.9 18.3±1.9 14 d 24.3±2.6 24.2±2.8 24.5±2.9 23.9±2.7 23.8±2.6 21 d 29.8±1.9 29.7±2.0*29.9±1.9 29.6±2.0 29.8±2.1 28 d 33.9±2.2 33.6±2.0 33.9±2.2 33.6±1.9 33.8±2.2 35 d 37.9±2.2 37.8±2.1 37.6±2.2 37.5±2.1 37.5±2.0

7 mg/（kg·d）組在給予 ZD6474 第 21 天時，腫瘤直徑為（1.20±0.08） mm，與 3 mg/（kg·d）組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義；15 mg/（kg·d）組與 7 mg/（kg·d）相比，腫瘤直徑（1.20±0.09） mm，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但是有2例死亡，尸體解剖示肝壞死，提示劑量過大肝中毒。見表2。

表2 裸鼠皮下移植瘤直徑變化情況（±s，mm）

表2 裸鼠皮下移植瘤直徑變化情況（±s，mm）

注：與陰性對照組比較，*P＜0.05，△P＜0.05

組別 7 d 14 d 0 0.90±0.05 0.90±0.07 0.90±0.04 0.90±0.06陰性對照組實驗組[0.5mg/（kg·d）]實驗組[3 mg/（kg·d）]實驗組[7 mg/（kg·d）]實驗組[10mg/（kg·d）]0 1.60±0.09 1.70±0.12 1.80±0.10 1.70±0.08 21 d 0 3.20±0.13*2.80±0.15*1.20±0.08△1.20±0.09△28 d 0 7.94±2.12*6.94±1.98*4.31±0.89△4.46±0.75△35 d 0 9.63±2.56*7.35±2.04*4.26±0.75△4.26±0.81△

3 討論

血管內(nèi)皮生長因子（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）是刺激血管形成最重要的生長因子之一，與內(nèi)皮細(xì)胞表面上的特異性受體蛋白結(jié)合發(fā)揮其活性。絕大多數(shù)惡性腫瘤細(xì)胞均分泌VEGF，發(fā)生游走轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞在局部VEGF刺激生成局部血管是惡性腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的重要機制，目前腫瘤血管靶向治療主要針對VEGF。最早，Senger等于1994年從篩選的大鼠腫瘤細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)VEGF-B[2]，隨后VEGF-A、PLGE、VEGF-H、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-R 等陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)。目前針對VEGF通路的靶向藥物主要有：①VEGF Trap；②抗-VEGF；③抗-VEGFR；④VEGFR酪氨酸激酶抑制劑[3]。目前，貝伐單抗、IMC-1C11等已經(jīng)在臨床上廣泛應(yīng)用，在與卡鉑、紫杉醇的聯(lián)合應(yīng)用的臨床實驗中，患者的治療反應(yīng)率、存活期、無疾病進展生存期均有明顯增加[4-5]，但是消化道反應(yīng)、血栓、高血壓、出血、蛋白尿、心臟毒性等副作用限制了其在臨床的應(yīng)用[6-7]，而VEGFR酪氨酸激酶抑制劑越來越受到人們的重視。

ZD6474是一種合成的小分子酪氨酸激酶抑制劑，可同時作用于表皮生長因子受體（EGFR）、血管內(nèi)皮生長因子受體（VEGFR）和酪氨酸激酶。不僅可抑制由EGFR誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞增殖，發(fā)揮腫瘤細(xì)胞靶向治療的作用，還可抑制腫瘤細(xì)胞的VEGFR-2阻斷腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的信號傳導(dǎo)，從而抑制腫瘤血管生成，因此具有和腫瘤血管靶向治療的雙重作用。

本文采用荷人膀胱癌原位移植瘤動物模型評估ZD6474對膀胱癌裸鼠皮下移植瘤直徑的影響，發(fā)現(xiàn)7 mg/（kg·d）組在給予ZD6474 第 21 天時，腫瘤直徑為（1.2±0.08）mm，與 3mg/（kg·d）組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義；10 mg/（kg·d）組與 7 mg/（kg·d）組相比，腫瘤直徑為（1.20±0.09）mm，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但有2例死亡，尸體解剖示肝壞死，提示劑量過大肝中毒。

ZD6474目前已經(jīng)用于乳腺癌和肝癌的治療，但是對膀胱癌的作用國內(nèi)外尚無報道，本實驗通過荷人膀胱癌原位移植瘤動物模型的實驗，提示其對膀胱癌的抗腫瘤作用，開闊了思路，為臨床上膀胱癌生物化療的治療模式提供了一定的理論基礎(chǔ)。

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