蔡紹東

廣東省人民醫(yī)院藥學部，廣東廣州 510080

珍菊降壓片收載于 《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》第20冊，標準號為WS3-B-3925-98，為中西藥復方制劑，主要用于治療高血壓，其主要成分為野菊花膏粉、珍珠層粉、鹽酸可樂定、氫氯噻嗪和蘆丁[1]。為有效控制藥品的質量保證臨床療效，筆者應用高效液相色譜法測定該制劑中鹽酸可樂定的含量，現(xiàn)報道如下：

1 儀器與試藥

島津LC-10ATVP高效液相色譜儀，大連中北色譜工作站；AT-201 電子分析天平（d=0.01 mg，瑞士梅特勒），島津UV-2550紫外-可見分光光度計，超聲波清洗器（SB-3200，寧波新芝科器研究所），LDZ4-0.8自動平衡微型離心機（北京醫(yī)用離心機廠）。鹽酸可樂定對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號：100071-199905，規(guī)格：100 mg，含量 100%）；珍菊降壓片樣品 （廣東清平制藥有限公司生產(chǎn)，國藥準字Z44023806；批號：20080601、20080602、20080603），規(guī)格：0.25g/片，鹽酸可樂定的標示量為每片30 μg。甲醇為色譜純，辛烷磺酸鈉、磷酸、氫氧化鈉等為分析純，水為重蒸超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

選擇迪馬液相色譜柱Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為0.22%辛烷磺酸鈉-甲醇-磷酸(560∶440∶1，以 1 mol/L 氫氧化鈉溶液調節(jié)pH至 3.0)，檢測波長為 220 nm，流速為 1.0 ml/min，進樣量為20 μl，柱溫為室溫。理論塔板數(shù)按鹽酸可樂定峰值計算≥4 000。

2.2 對照品、供試品溶液的制備

2.2.1 對照品溶液制備 取經(jīng)過干燥至恒重的鹽酸可樂定對照品10 mg，置于100 ml容量瓶中，加流動相溶解稀釋至刻度，準確吸取4 ml溶液移至100 ml容量瓶，加流動相溶解稀釋至刻度，制成每1 ml含4 μg的溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取樣品20片，研磨至極細，置電子分析天平精密稱定，稱取粉末0.25 g（約相當于1片珍菊降壓片，含鹽酸可樂定30 μg），放置到具塞錐形瓶中，精密吸取枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液（pH=4.0）40 ml加入錐形瓶中，稱定重量。經(jīng)超聲提取40 min，冷卻后，加入枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液（pH=4.0）補足減少的量；搖勻后置于LDZ4-0.8自動平衡微型離心機，以3 000 r/min離心10 min，精密量取上清液20 ml，精密加碳酸鈉試液10 ml，混勻再離心，精密量取上清液20 ml，至分液漏斗中，用二氯甲烷振搖，提取5次，每次25 ml，合并二氯甲烷提取液，放至溫水浴中低溫揮干；殘渣加入流動相充分溶解并定容至5 ml，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過。

2.2.3 陰性對照溶液 按珍菊降壓片處方取不含鹽酸可樂定的其他原輔料，并按藥典工藝制得空白樣品，按“2.2.2”項下方法制備，即得。

2.3 測定方法

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標法計算。

2.4 系統(tǒng)適用性試驗

在上述色譜條件下，鹽酸可樂定的保留時間約為10 min，峰形良好，且陰性對照品實驗無干擾，其色譜峰與相鄰峰分離度符合規(guī)定，理論板數(shù)不小于4 000。

2.5 線性關系考察

精密吸取鹽酸可樂定對照品適量，加流動相制成每1 ml中含鹽酸可樂定對照品 1、2、4、6、8、10 μg的溶液。 取上述各溶液20 μl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，測定其峰面積。以峰面積A為縱坐標，濃度C為橫坐標進行線性回歸，結果得出：回歸方程為 A=1.361 8C-0.137 9（r=0.999 9），可見鹽酸可樂定在1.0～10.0 μg/ml范圍內(nèi),鹽酸可樂定峰面積值與濃度呈現(xiàn)良好的線性關系。

2.6 精密度試驗

取鹽酸可樂定對照品溶液，按上述色譜條件，重復進樣6次，測定峰面積的RSD為0.35%（n=6），表明本法精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取鹽酸可樂定供試品溶液，按以上色譜條件，分別在1、2、4、8、12、24 h 進樣 1 次，共測試 6 次，測定峰面積，RSD 為1.28%，結果顯示樣品至少在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復性試驗

取同一批號樣品（20080601）6份，分別精密稱定，按本文方法制備供試品溶液，測定峰面積并計算鹽酸可樂定含量（μg/g），結果顯示樣品鹽酸可樂定的標示百分含量分別為96.0%、99.5%、100.3%、97.2%、95.0%、100.7%，平均標示百分含量為98.11%，RSD為1.28%。

2.9 回收率試驗

采用加樣回收率測定方法。精密稱定已知含量樣品（20080601）0.25 g，其鹽酸可樂定的標示百分含量平均為98.11%，精密加入鹽酸可樂定對照品適量，按正文方法處理后測定峰面積并計算含量，結果顯示鹽酸可樂定平均回收率為99.4%，RSD為0.93%。見表1。

表1 鹽酸可樂定加樣回收率試驗結果

2.10 鹽酸可樂定含量測定

按照供試品處理方法對3批樣品 （批號：20080601、20080602、20080603）進行處理，注入液相色譜儀，測定結果分別為 29.4 μg/片、29.8 μg/片、30.3 μg/片。

3 討論

珍菊降壓片作為中西藥復方制劑，其成分復雜，其中鹽酸可樂定含量又非常微小。為保證測定含量的準確精密，排除干擾成份，筆者選擇用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，參考《中國藥典》（2005年版）二部收載的鹽酸可樂定片[2]的流動相和文獻[3]，經(jīng)試驗篩選，確定以0.22%辛烷磺酸鈉-甲醇-磷酸 （560∶440∶1， 用1 mol/L氫氧化鈉溶液調節(jié)pH至3.0）為流動相。流動相中加入辛烷磺酸鈉為離子對試劑，可增加鹽酸可樂定的容量因子，顯著提高分離效果。

試驗中為減少溶劑和流動相的干擾，確保實驗結果的準確性，參考國內(nèi)相關研究結果[4]：鹽酸可樂定在220 nm處有一強吸收峰，在270 nm和279 nm處各有一個弱吸收峰。根據(jù)鹽酸可樂定原料在甲醇中的紫外吸收圖譜，其最大吸收在205 nm左右[5]，而氫氯噻嗪和蘆丁在270 nm處都有較強吸收峰。為了避免測定時珍菊降壓片中含有的氫氯噻嗪和蘆丁等組份的干擾，筆者選擇220 nm作為檢測波長。

本實驗結果表明以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜柱，0.22%辛烷磺酸鈉-甲醇-磷酸（560∶440∶1）為流動相，檢測波長為220 nm，采用高效液相色譜法測定珍菊降壓片中鹽酸可樂定含量精密度高，準確性良好，可有效控制藥品的質量，促進臨床合理用藥。

[1]國家藥典委員會.衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑(第20冊)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,1998：232.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京：化學工業(yè)出版社,2005：471-472.

[3]張新學,劉圣梅,李亞芳.HPLC法測定珍菊降壓片中鹽酸可樂定的含量[J].齊魯藥事,2008,27(10)：662-663．

[4]黃東慧.反相高效液相色譜法測定珍菊降壓片中鹽酸可樂定的含量[J].臨床和實驗醫(yī)學雜志,2009,8(4)：68-69.

[5]楊繼斌,湯曉樞.HPLC法測定珍菊降壓片中鹽酸可樂定的含量[J].藥物分析雜志,2006,26(12)：1854-1856.